本发明专利技术涉及医药技术领域，涉及黄烷‑3‑醇衍生物及其用途。具体涉及一种从安化黑茶中分离得到的黄烷‑3‑醇衍生物及其在制备神经保护药物中的应用。本发明专利技术所述的黄烷‑3‑醇衍生物的结构如下。试验结果表明，本发明专利技术所述的黄烷‑3‑醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物具有明显的神经保护作用，可以用于制备神经保护类药物。
Flavanone -3- alcohol derivatives and their uses
The invention relates to the field of medicine technology, relating to flavanone 3 alcohol derivatives and their uses. The invention relates specifically to a flavane 3_ol derivative isolated from Anhua black tea and its application in the preparation of neuroprotective drugs. The structure of the flavanone 3 alcohol derivative is as follows. The experimental results show that the flavanols and their pharmaceutically acceptable salts, isomers or solvents have obvious neuroprotective effects and can be used to prepare neuroprotective drugs.
【技术实现步骤摘要】
黄烷-3-醇衍生物及其用途
本专利技术涉及医药
，涉及黄烷-3-醇衍生物及其用途。具体涉及一种从安化黑茶中分离得到的黄烷-3-醇衍生物及其在制备神经保护药物中的应用。
技术介绍
黑茶作为后发酵茶的代表，主要产于中国和日本，主要产地为中国云南、湖南、广西、四川及湖北，其中云南普洱茶、广西六堡茶和湖南安化黑茶是黑茶中的代表。由于加工工艺的不同，黑茶以其特征性的生物活性如减肥、降血脂、降血糖、抗氧化、抗菌及抗诱变等逐渐受到广泛的重视。作为唯一的微生物发酵茶，黑茶特殊的加工过程导致其与未发酵的绿茶及非微生物发酵的白茶、红茶和乌龙茶等的活性成分存在较大差异。而因为特定微生物的作用，安化黑茶与其他产地黑茶的活性成分也有区别。茶的特征性成分为儿茶素类(即黄烷-3-醇类)，占多酚类物质总量的70％-80％，是多酚类物质的主要成分。一般分为酯型和非酯型。儿茶素类在黑茶中含量低于绿茶和红茶，研究表明其同渥堆发酵过程中微生物的酶促氧化和非酶促作用相关，其中酶促氧化作用占主导。文献报道从安化黑茶中分离出一系列B环裂环的儿茶素衍生物(R)-6-oxo-4-((2R,3R)-3,5,7-trihydroxychroman-2-yl)-3,6-dihydro-2H-pyran-2-carboxylicacid，茯砖素(fuzhuanin)A-F，文冠木素(xanthocerin)及plancholA，其结构如下。该类化合物仅在安化黑茶中发现，提示其可能为加工过程中的由原料茶中儿茶素类化合物经氧化产生的特征性成分。相对的，普洱茶中发现一系列儿茶素A环同茶氨酸反应得到的具有N-乙基-2-吡咯烷酮片段的儿茶素衍生物，此类化学成分的差异也表明普洱茶同安化黑茶后发酵过程存在差异。本专利技术从安化黑茶中分离出A环取代的儿茶素类成分，表明安化黑茶的发酵过程中儿茶素类的A环也会受微生物代谢的影响。
技术实现思路
本专利技术提供一系列从安化黑茶中分离得到的用于神经退行性疾病的具有神经保护活性的黄烷-3-醇衍生物。本专利技术是通过如下技术方案实现的：本专利技术提供通式(I)所示的黄烷-3-醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物：其中，2位及3位为手性碳原子，化合物A中，R为氢原子，2位构型为S，3位构型为R，化合物B中，R为氢原子，2位构型为R，3位构型为R，化合物C中，R为没食子酰基G，2位构型为R，3位构型为R。本专利技术所述的黄烷-3-醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物的制备方法包括如下步骤：1)提取：将安化黑茶干燥粉碎，加入溶剂提取。2)浓缩：提取液浓缩或减压浓缩得到浓缩液。3)萃取：将浓缩液以石油醚萃取除去低极性杂质后，余下浓缩液以乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取液。4)浓缩：将3)中所得乙酸乙酯萃取液浓缩或减压浓缩得干燥萃取物。5)纯化：步骤4)所得乙酸乙酯萃取液经反复硅胶柱层析，并以制备高效液相色谱法纯化得到化合物。其中：步骤1)所述的提取方法为热回流提取法。所用溶剂为50％-70％乙醇水溶液，提取温度为80-90℃。提取1-3次，每次2-3小时。步骤3)所述的萃取用试剂的用量为每100g药材使用100-200mL试剂，萃取次数为2-3次。步骤5)为将步骤4)所得的乙酸乙酯萃取液浓缩后萃取物，经硅胶柱色谱以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇(100:0-0:100)梯度洗脱。馏分1(100:3)经硅胶柱色谱，以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇(100:2-100:5)洗脱，馏分经循环制备高效液相色谱以甲醇-乙腈-水(1:1:2-1:1:3)纯化，得到化合物A和B。馏分2(100:5)经硅胶柱色谱以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇(100:5-100:7)洗脱，馏分经循环制备高效液相色谱以甲醇-乙腈-水(1:1:2-1:1:4)纯化，得到化合物C。本专利技术所述的黄烷-3-醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物具有明显的神经保护作用，可以用于制备神经保护类药物。附图说明图1为化合物A对SY-SH5Y细胞的神经保护作用。(A)化合物A对SY-SH5Y细胞的细胞毒作用。(B)化合物A对H2O2诱导的SH-SY5Y细胞损伤的神经保护作用(细胞存活率)(C)AV-PI颜色检测化合物A对降低H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡。图2为化合物A通过Nrf2以及Akt通路抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡与损伤。(A)化合物A通过上调Nrf2的mRNA水平继而增加Nrf2的蛋白水平并调控Nrf2信号通路，抑制H2O2诱导的SHSY-5Y细胞损伤，发挥神经保护活性。(B)化合物A通过激活Akt通路以及ERK从而抑制H2O2诱导的SH-SY5Y细胞的凋亡与损伤。具体实施方式实施例1：化合物的制备安化黑茶干燥叶4kg，以60％乙醇加热回流提取3次，每次3h。提取液过滤合并，减压浓缩后加入10L水混悬，依次以石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取(各10L×3次)。取乙酸乙酯萃取液浓缩后得245g萃取物，经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇(1:0-0:1)梯度洗脱。馏分1(100:3)经硅胶柱色谱，以二氯甲烷-甲醇(100:3)洗脱，馏分经循环制备高效液相色谱以甲醇-乙腈-水(1:1:2.5)纯化，得到化合物A(20mg)和B(2mg)。馏分2(100:5)经硅胶柱色谱以二氯甲烷-甲醇(100:5)洗脱，馏分经循环制备高效液相色谱以甲醇-乙腈-水(1:1:3)纯化，得到化合物C(6mg)。结构鉴定1)化合物A，褐色无定型粉末(甲醇)，三氯化铁-铁氰化钾反应阳性，提示结构中有酚羟基存在。HR-ESI-MS：m/z363.0751[M-H]-。1H-NMR(400MHz,MeOD)δ6.35结合13C-NMR(100MHz,MeOD)δ105.4，129.4，132.7及145.6，表明结构中存在连三氧取代的苯环。1H-NMRδ5.96(1H,s)为苯环氢信号。δ2.55(1H,dd,J＝6.8,16.0Hz)，2.75(1H,dd,J＝4.8,16.0Hz)为一组亚甲基氢信号，HMBC谱中与δ66.6和81.9的两个连氧sp3碳原子相关。而δ66.6连接的氢原子位于δ4.72(1H,d,J＝6.8Hz)与上述连三氧取代苯环中δ129.4的碳原子相关。综上推测化合物可能为黄烷类化合物，且具备没食子儿茶素的典型结构特征。此外，δ3.99(3H,s)及δ51.5和170.3提示结构中存在甲氧甲酰基的结构片段，通过与没食子儿茶素的结构进行对照，该基团只能连接在化合物A环的6位或8位，其具体的连接位置需在A环碳信号归属的基础上进行。A环中三个化学位移相近的连氧碳原子(5,7和9位)可通过HMBC确认：δ4.72(1H,d,J＝6.4Hz,H-2)与δ160.2相关，而2.55(1H,dd,J＝6.8,16.0Hz,H-4a)及2.75(1H,dd,J＝4.8,16.4Hz,H-4b)与δ159.7和160.2相关，因此C-5和C-9分别位于δ159.7和160.2。余下的δ160.7为C-7信号。由于A环唯一的氢原子δ5.96(1H,s)与160.2(C-9)相关但与C-5不相关，因此δ5.96(1H,s)归属为8位氢信号。因此甲氧甲酰基位于A环的6位。综上，化合物A的平面结构确认为6位甲氧本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.如下的黄烷‑3‑醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物：
【技术特征摘要】
1.如下的黄烷-3-醇衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物：2.如权利要求1所述衍生物及其药学上可接受的盐、异构体或溶剂化物的制备方法，其特征在于，步骤如下：1)提取：将安化黑茶干燥粉碎，加入溶剂提取；2)浓缩：提取液浓缩或减压浓缩得到浓缩液；3)萃取：将浓缩液以石油醚萃取除去低极性杂质后，余下浓缩液以乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯萃取液；4)浓缩：将3)中所得乙酸乙酯萃取液浓缩或减压浓缩得干燥萃取物；5)纯化：步骤4)所得萃取物经反复硅胶柱层析，并以制备高效液相色谱法纯化得到化合物，所述的经硅胶柱层析以二氯甲烷/三氯甲烷-甲醇100:0-0:100梯度洗脱。3.根据权利要求2所述的制备方法。其特征在于，步骤1)所述的提取方法为热回流提取法，所用溶剂为50％-70％乙醇水溶液，提取温度为80-90℃，提取1-3次，每次2-3小时。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，步骤3...
【专利技术属性】
技术研发人员：任旭红，许永男，刘建宇，范艳华，
申请(专利权)人：沈阳药科大学，
类型：发明
国别省市：辽宁,21
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