乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3、培养基及CTC-3的建立方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3、培养基及CTC‑3的建立方法和应用，涉及细胞技术领域，本发明专利技术提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3，其保藏编号为CCTCC NO：C201892。该细胞系性状稳定，可开展大规模基础研究与临床试验，从而进一步把握循环肿瘤细胞的特质、阐释肿瘤发展机制，为癌症患者临床分期、预后判断、个体化治疗提供依据。本发明专利技术提供的培养基，包括基础培养基和添加剂。该培养基可大量扩增高质量高纯度的循环肿瘤细胞。本发明专利技术提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3的建立方法，操作简单、成本低廉、普适性广，能够快速有效地实现乳腺癌循环肿瘤细胞的扩增培养。

Establishment and application of circulating tumor cell line CTC-3, medium and CTC-3 for breast cancer

The invention provides a method for establishing a circulating tumor cell line CTC_3, a culture medium and a CTC_3 of breast cancer, and an application thereof. The invention relates to the field of cell technology. The circulating tumor cell line CTC_3 of breast cancer provided by the invention has a storage number of CCTCC NO: C201892. The cell line is stable and can be used for large-scale basic research and clinical trials, so as to further grasp the characteristics of circulating tumor cells, explain the mechanism of tumor development, and provide the basis for clinical staging, prognosis judgment and individualized treatment of cancer patients. The medium provided by the invention includes a basal medium and an additive. The medium can amplify a lot of high quality and high purity circulating tumor cells. The invention provides a method for establishing a circulating tumor cell line CTC_3 of breast cancer, which has the advantages of simple operation, low cost and wide universality, and can rapidly and effectively realize the expansion and culture of circulating tumor cells of breast cancer.

【技术实现步骤摘要】
乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3、培养基及CTC-3的建立方法和应用
本专利技术涉及细胞
，尤其是涉及一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3、培养基及CTC-3的建立方法和应用。
技术介绍
循环肿瘤细胞(Circulatingtumorcell，CTC)是从实体肿瘤脱落而进入外周血液循环的肿瘤细胞，它存在于乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌等多种恶性肿瘤中。循环肿瘤细胞作为表征恶性肿瘤转移潜能的重要生物学标志，在血液中的存在及数量能够反映肿瘤恶性程度、肿瘤治疗的效果及预后。因CTC检测具有微创、实时等特点，被称为“液态活检”。目前CTC检测的主要方法包括依赖肿瘤相关标志物检测的免疫学检测技术和基于形态学富集的膜过滤技术(Isolatingbysizeofepithelialtumorcells，ISET)。前者是基于细胞表面表达不同抗原标志，将针对肿瘤细胞表面抗原的特异性抗体EpCAM、CK等包被于磁珠表面以完成肿瘤细胞的特异性识别，借助外加磁场筛选富集CTCs。该技术的优势在于特异度较高，已有商品化的半自动检测设备(CellSearch)；但肿瘤特异性抗原表达的缺失会造成假阴性结果。后者是根据细胞大小的差异，利用过滤的方法将体积较大的肿瘤细胞筛选富集。该技术的优势在于方法简单、价格低廉，分离获得的CTCs具有活性可用于后续研究；但由于缺乏形态学诊断金标准，该富集技术特异性相对较差。因此，开发一种稳定的循环肿瘤细胞系及相应的操作简单的循环肿瘤细胞系的培养方法，用以基础研究和临床试验尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，该细胞系性状稳定，可多次稳定传代，可用于进行基础研究与临床试验。本专利技术的第二个目的在于提供一种用于培养上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，该培养基能够有效促进单个循环肿瘤细胞的增殖，可大量扩增高质量高纯度的循环肿瘤细胞。本专利技术的第三个目的在于提供上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，以缓解现有技术中存在的富集循环肿瘤细胞易造成假阴性或特异性较差的技术问题。本专利技术的第四个目的在于提供上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3在建立循环肿瘤细胞分离培养体系中的应用。本专利技术提供了一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，所述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的保藏编号为CCTCCNO：C201892。本专利技术还提供了用于培养上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，所述培养基包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基包括体积比为1:0.5-5的DMEM培养基和PRMI1640培养基；所述添加剂包括1-5mM的L-谷氨酰胺；优选地，所述培养基还包括胎牛血清；优选地，所述培养基还包括双抗；本专利技术还提供了上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，所述建立方法包括：利用上述的培养基培养外周血单个核细胞，得到细胞簇，将所述细胞簇进行传代，得到所述乳腺癌循环肿瘤细胞系。进一步地，将外周血单个核细胞加入上述的培养基中培养2-3天后进行换液，去除悬浮细胞。进一步地，于37℃，5％CO2和饱和湿度条件下培养外周血单个核细胞。进一步地，所述外周血单个核细胞采集于乳腺癌患者的外周血；优选地，离心所述乳腺癌患者的外周血，得到全血细胞，将所述全血细胞经密度梯度离心，得到所述外周血单个核细胞；优选地，所述密度梯度离心为聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心。进一步地，离心后还包括裂解红细胞的步骤。进一步地，所述建立方法还包括鉴定得到的所述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的步骤。进一步地，利用免疫荧光技术鉴定所述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3；优选地，所述免疫荧光技术鉴定的指标为CK(+)DAPI(+)CD45(-)。另外，本专利技术还提供了上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3在建立循环肿瘤细胞分离培养体系中的应用。本专利技术提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，其保藏编号为CCTCCNO：C201892。该细胞系成克隆生长，性状稳定，可多次稳定传代，因此，可开展大规模基础研究与临床试验，在检测细胞表面标志物的同时进行基因水平上的探索，可以从分子生物学水平上进一步把握循环肿瘤细胞的特质、阐释肿瘤发展机制，为癌症患者临床分期、预后判断、个体化治疗提供依据。本专利技术提供的用于培养上述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，包括体积比为1:0.5-5的DMEM培养基和PRMI1640培养基以及1-5mM的L-谷氨酰胺。该培养基能够有效促进单个循环肿瘤细胞的增殖，可大量扩增高质量高纯度的循环肿瘤细胞，能够大规模培养研究提供有力保障。本专利技术提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，包括：利用本专利技术提供的培养基培养外周血单个核细胞，得到细胞簇，将细胞簇进行传代，得到乳腺癌循环肿瘤细胞系。该方法操作简单、成本低廉、普适性广，能够快速有效地实现乳腺癌循环肿瘤细胞的扩增培养。附图说明为了更清楚地说明本专利技术具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本专利技术的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为本专利技术实施例1提供的培养外周血单个核细胞培养至14天左右出现的细胞簇图；图2为本专利技术实施例1提供的消化传代后细胞培养7天左右出现的细胞簇图；图3为本专利技术实施例2提供的免疫荧光鉴定结果图；图4为本专利技术实施例4提供的CTC-3体外培养生长曲线图；图5为本专利技术实施例5提供的CTC-3体外成球能力的实验结果图；图6为本专利技术实施例6提供的CTC-3体外成瘤能力的实验结果图。具体实施方式下面将结合实施例对本专利技术的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本专利技术一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本专利技术中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本专利技术保护的范围。本专利技术提供的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，于2018年04月25日保藏在中国典型培养物保藏中心，保藏单位地址湖北省武汉市武昌区八一路299号武汉大学校内(武汉大学第一附小对面)，武汉大学保藏中心，保藏编号为CCTCCNO：C201892。该细胞系成克隆生长，性状稳定，可多次稳定传代，细胞恶性程度高，增值能力强，体外生长速度快，因此，可开展大规模基础研究与临床试验，在检测细胞表面标志物的同时进行基因水平上的探索，可以从分子生物学水平上进一步把握乳腺癌循环肿瘤细胞的特质、阐释乳腺癌肿瘤发展机制，为癌症患者临床分期、预后判断、个体化治疗提供依据。本专利技术还提供了用于培养上述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，该培养基包括基础培养基和添加剂；基础培养基包括体积比为1:0.5-5的DMEM培养基和PRMI1640培养基，DMEM培养基和PRMI1640培养基的体积比例如可以为，但不限于1:0.5、1:1、1:2、1:3、1:4或1:5；添加剂包括1-5mM的L-谷氨酰胺，例如可以为，但不限于1mM、2mM、3mM、4mM或5mM。该培养基能够有效促进单个循环肿瘤细胞的增殖，可大量扩增高质量高纯度的循环肿本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC‑3，其特征在于，所述乳腺癌循环肿瘤细胞系的保藏编号为CCTCC NO：C201892。

【技术特征摘要】
1.一种乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3，其特征在于，所述乳腺癌循环肿瘤细胞系的保藏编号为CCTCCNO：C201892。2.用于培养权利要求1所述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的原代细胞的培养基，其特征在于，所述培养基包括基础培养基和添加剂；所述基础培养基包括体积比为1:0.5-5的DMEM培养基和PRMI1640培养基；所述添加剂包括1-5mM的L-谷氨酰胺；优选地，所述培养基还包括胎牛血清；优选地，所述培养基还包括双抗。3.如权利要求1所述的乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3的建立方法，其特征在于，所述建立方法包括：利用权利要求2所述的培养基培养外周血单个核细胞，得到细胞簇，将所述细胞簇进行传代，得到所述乳腺癌循环肿瘤细胞系CTC-3。4.根据权利要求3所述的建立方法，其特征在于，将外周血单个核细胞加入权利要求2所述的培养基中培养2-3天后进行换液，去除悬浮细胞。5.根据权利要求3所述的...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹畅，赵盼，周文斌，王建红，
申请(专利权)人：邹畅，赵盼，
类型：发明
国别省市：广东,44