一种三叶青低聚糖的制备方法及其应用技术

本发明专利技术涉及中医药技术领域，公开了一种三叶青低聚糖的制备方法及其应用制备方法包括：1）摘取三叶青全草，洗净后置于太阳下晒干，然后烘干至恒重，打粉过筛；称取三叶青粗粉，加入到乙醇溶液中并超声提取；抽滤，弃滤液；2）取滤渣，加入到双蒸水中回流提取，每次提取后对提取液进行过滤，合并滤液，减压浓缩至后，采用Sevag法去蛋白；3）向去蛋白后的提取液加入乙醇溶液，静置过夜后，离心，弃沉淀；向上清液加入乙醇溶液后再次沉淀，静置过夜，离心，将沉淀减压干燥后得三叶青低聚糖。本发明专利技术方法制得的三叶青低聚糖安全无毒，且具有抗肿瘤、改善肠道菌群，保护胃肠道等作用，上述发现扩大了三叶青低聚糖的药用用途。

【技术实现步骤摘要】
一种三叶青低聚糖的制备方法及其应用
本专利技术涉及中医药
，尤其涉及一种三叶青低聚糖的制备方法及其应用。
技术介绍
三叶青(TetrastigmahemsleyanumDielselGilg)是我国特有的葡萄科崖爬藤属珍稀名贵植物，地下块根或全草均可入药。三叶青作为民间常用的中草药，拥有“药王”、“抗癌神草”等美誉，具有清热解毒、活血祛风等功效。现代药理学研究亦证明三叶青具有解热、抗炎、抗肿瘤、抗病毒、保肝、免疫调节等多种药理作用，具有良好的开发利用前景。三叶青中化学成分种类繁多，有关三叶青药效物质的研究主要集中在三叶青中的黄酮类、酚酸类、脂肪酸类化合物等，目前普遍认为三叶青中具有抗肿瘤等上述功效的活性成分为上述化合物，如申请号为CN201210252136.2的中国专利公开了一种高三叶青黄酮、多糖、山奈酚含量三叶青茶的制作方法。该方法制得的三叶青茶产品天然绿色，汤色亮绿，叶底嫩绿，不含咖啡因，含丰富的三叶青黄酮、多糖、山奈酚等成分能有效抑制肿瘤细胞增殖，促进肿瘤细胞凋亡，具良好的抗肿瘤作用，且无毒副作，易于吸收，有益健康。但是关于其他组分特别是低聚糖的研究目前尚未见报道。低聚糖，又称寡糖，在大自然中广泛存在，有着低热量、稳定、安全无毒、无残留等优点。某些植物中的低聚糖对胃肠道具有调节作用已有一些研究报道，如香蕉低聚糖、芦笋低聚糖、大豆低聚糖等，但是只有少数的几种的植物低聚糖具有类似功效，而有关三叶青低聚糖是否具有其同样功效尚未见报道。随着人们生活水平的提高、饮食结构的变化等因素影响，肿瘤、胃肠道功能障碍等疾病的发病率呈逐渐增高的趋势，且患者需要药物治疗。由于大多药物具有依赖性和广谱性，易产生头痛、消化道出血、认知功能障碍等诸多不良反应。因此，开发研究一种药效明确且安全的药物十分必要。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供了一种三叶青低聚糖的制备方法及其应用。本专利技术方法制得的三叶青低聚糖为天然物质，安全无毒，且具有抗肿瘤、改善肠道菌群，保护胃肠道等作用，上述发现扩大了三叶青低聚糖的药用用途。本专利技术的具体技术方案为：一种三叶青低聚糖的制备方法，包括以下步骤：1)摘取三叶青全草，洗净后置于太阳下晒干，然后烘干至恒重，打粉过筛；称取三叶青粗粉，按料液比1g∶15-25mL加入到乙醇溶液中并超声提取至少2次；抽滤，弃滤液。2)取滤渣，按料液比1g∶10-20mL加入到双蒸水中回流提取至少2次，每次提取后对提取液进行过滤，合并滤液，减压浓缩至后，采用Sevag法去蛋白至少3次。3)向去蛋白后的提取液加入乙醇溶液，静置过夜后，离心，弃沉淀；向上清液加入乙醇溶液后再次沉淀，静置过夜，离心，将沉淀减压干燥后得三叶青低聚糖。在现有技术中，公开有对三叶青中黄酮类、酚酸类、脂肪酸类等物质的提取方法，一般也是醇提、水提法等。但是由于现有技术中对于三叶青中低聚糖的研究几乎没有，因此并未有文献公开提取三叶青中低聚糖的方法。本专利技术先后采用醇提、水提法，虽然提取溶剂与现有技术类似，但是本专利技术团队发现，对于不同的提取目标，料液比、溶剂浓度、时间等参数的不同，会直接使得三叶青中活性物质在溶剂中的溶解度的不同，导致最终提取所得的物质截然不同。由于目前并未有提取三叶青中低聚糖的先例，因此对于本领域技术人员来说，并不知晓要如何设计提取工艺才能提取获得三叶青低聚糖。作为优选，步骤1)中，烘干温度为50-60℃。作为优选，步骤1)中，打粉后过40目筛。作为优选，步骤1)和步骤3)中，所述乙醇溶液浓度为90-98wt％。作为优选，步骤2)中，每次回流提取时间为1-2h。作为优选，步骤3)中，第一次添加乙醇溶液时，使乙醇的体积占比达75％。作为优选，步骤3)后，还包括步骤4)：用高效液相色谱法测定三叶青低聚糖的分子量。作为进一步优选，步骤4)的具体过程为：将三叶青低聚糖配制成1mg/mL的供试品溶液，设定色谱条件：色谱柱为规格为7.8×300mm的WatersUltrahydrogel120，柱温35℃，漂移管温度为100℃，流动相为300mmol/L乙酸铵，流速0.8mL/min，进样量10μL。本专利技术团队经过研究发现，三叶青低聚糖具有抗肿瘤功效，因此能够作为抗肿瘤药物。本专利技术团队经过研究发现，由于人体缺乏代谢酶系，三叶青低聚糖食后不被小肠消化吸收，可直接进入大肠从而被大肠中广泛存在的微生物菌群所利用，发酵产生有机酸，从而降低肠道中的pH值，抑制腐败作用，减少有毒有害物质的产生，促进双歧杆菌等有益菌的生长和活性，进而调节肠道菌群，保护胃肠道。因此，三叶青低聚糖还具有改善胃肠道能工的功效，因此可作为用于改善胃肠道功能的药物。在现有技术中，虽然已经公开了三叶青具有抗肿瘤以及改善胃肠道的功能，但是人们对于其中起关键作用的活性成分尚未完全掌握，按照普遍观点，通常认为三叶青中起到上述功效的物质集中在三叶青中的黄酮类、酚酸类、脂肪酸类化合物等(上述物质含量较高)，但是关于其他组分特别是低聚糖的研究目前尚未见报道。本专利技术通过建立4T1乳腺癌小鼠模型、体外肠道微生物实验、盐酸洛哌丁胺制小鼠便秘模型等，发现三叶青低聚糖具有抗肿瘤、促进人体肠道内有益菌增殖、保护肠道微生态、润肠通便、增加免疫等多种药理作用，因此三叶青低聚糖可作为有效成分与药学上可接受的辅料制成口服剂、胶囊剂、片剂等各种剂型，在肿瘤、自身免疫、肠道疾病等疾病防治中都具有一定应用价值。与现有技术对比，本专利技术的有益效果是：1、本专利技术方法可有效提取得到三叶青低聚糖，三叶青低聚糖的平均提取率为1.586％。2、本专利技术制备的三叶青低聚糖通过药理实验发现具有抗肿瘤、促进人体肠道内有益菌增殖、保护肠道微生态、润肠通便、增加免疫等生理功能，在医药工业具有广泛的应用前景。附图说明图1是实施例1中制得的三叶青低聚糖分子量的标准曲线；图2是实施例1中水提醇沉分离三叶青低聚糖95％醇沉部位HPLC分析图；图3是给药三叶青低聚糖后各组小鼠乳腺癌肿瘤实体图片；图4是干酪乳杆菌24h生长曲线；图5是不同浓度三叶青低聚糖对干酪乳杆菌体外生长影响结果图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术作进一步的描述。总实施例一种三叶青低聚糖的制备方法，包括以下步骤：1)摘取三叶青全草，洗净后置于太阳下晒干，然后在50-60℃下烘干至恒重，打粉过40目筛；称取三叶青粗粉，按料液比1g∶15-25mL加入到90-98wt％的乙醇溶液中并超声提取至少2次；抽滤，弃滤液。2)取滤渣，按料液比1g∶10-20mL加入到双蒸水中回流提取至少2次，每次提取102h，每次提取后对提取液进行过滤，合并滤液，减压浓缩至后，采用Sevag法去蛋白至少3次。3)向去蛋白后的提取液加入90-98wt％的乙醇溶液，使乙醇的体积占比达75％；静置过夜后，离心，弃沉淀；向上清液加入90-98wt％的乙醇溶液后再次沉淀，静置过夜，离心，将沉淀减压干燥后得三叶青低聚糖。4)用高效液相色谱法测定三叶青低聚糖的分子量：将三叶青低聚糖配制成1mg/mL的供试品溶液，设定色谱条件：色谱柱为规格为7.8×300mm的WatersUltrahydrogel120，柱温35℃，漂移管温度为100℃，流动相为300mmol/L乙酸铵，流速0.8mL/min，进样量10μL。实施例本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种三叶青低聚糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）摘取三叶青全草，洗净后置于太阳下晒干，然后烘干至恒重，打粉过筛；称取三叶青粗粉，按料液比1g:15‑25mL加入到乙醇溶液中并超声提取至少2次；抽滤，弃滤液；2）取滤渣，按料液比1g:10‑20mL加入到双蒸水中回流提取至少2次，每次提取后对提取液进行过滤，合并滤液，减压浓缩至后，采用Sevag法去蛋白至少3次；3）向去蛋白后的提取液加入乙醇溶液，静置过夜后，离心，弃沉淀；向上清液加入乙醇溶液后再次沉淀，静置过夜，离心，将沉淀减压干燥后得三叶青低聚糖。

【技术特征摘要】
1.一种三叶青低聚糖的制备方法，其特征在于包括以下步骤：1）摘取三叶青全草，洗净后置于太阳下晒干，然后烘干至恒重，打粉过筛；称取三叶青粗粉，按料液比1g:15-25mL加入到乙醇溶液中并超声提取至少2次；抽滤，弃滤液；2）取滤渣，按料液比1g:10-20mL加入到双蒸水中回流提取至少2次，每次提取后对提取液进行过滤，合并滤液，减压浓缩至后，采用Sevag法去蛋白至少3次；3）向去蛋白后的提取液加入乙醇溶液，静置过夜后，离心，弃沉淀；向上清液加入乙醇溶液后再次沉淀，静置过夜，离心，将沉淀减压干燥后得三叶青低聚糖。2.如权利要求1所述的一种三叶青低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤1）中，烘干温度为50-60℃。3.如权利要求1或2所述的一种三叶青低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤1）中，打粉后过40目筛。4.如权利要求1或2所述的一种三叶青低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤1）和步骤3）中，所述乙...

【专利技术属性】
技术研发人员：丁志山，应航，陆金健，钱朝东，丁兴红，周芳美，
申请(专利权)人：浙江中医药大学，
类型：发明
国别省市：浙江,33