一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法技术

本发明专利技术涉及一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，所述试剂盒包括：链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。本发明专利技术的试剂盒与现有试剂盒相比，制备工艺更简单，成本更低，检测范围宽，稳定性好。

A free thyroxine magnetic particle chemiluminescent immunoassay kit and its preparation method

The invention relates to a free thyroxine magnetic particle chemiluminescent immunoassay kit and a preparation method thereof. The kit comprises a magnetic particle suspension coated with streptavidin, an alkaline phosphatase labeled thyroxine derivative, a biotin labeled thyroxine antibody, a test diluent, and a thyroxine calibration. Quasi quality, thyroid quality control products. Compared with the existing kit, the kit has the advantages of simpler preparation process, lower cost, wide detection range and good stability.

【技术实现步骤摘要】
一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法
本专利技术属于免疫检测分析
，涉及检测血清中游离甲状腺素FT4含量的磁微粒化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。
技术介绍
四碘甲腺原氨酸（Tetraiodothyronine，T4）是由甲状腺滤泡上皮细胞合成和分泌的甲状腺激素，分子量为777，半衰期为6-7天，是通过甲状腺球蛋白酪氨酸残基的碘化合成的，通过酶解作用进入血液循，对人体的新陈代谢和生长发育有着重要的作用。T4的形成和释放受到促甲状腺激素（TSH）的调节。体内大部分的T4（99%以上）是与转运蛋白结合，包括甲状腺结合蛋白（TBG），前白蛋白（TBPA）和白蛋白，只有极少量的T4（约0.04%），才以游离的形式存在于血清中。TBG的浓度改变会使T4的浓度发生变化，但FT4的浓度不会受到影响。结合T4与游离T4之间呈可逆的平衡状态，只有游离T4才能进入靶细胞与受体结合发挥其生理功能。T4在体内影响蛋白质，脂和碳水化合物等物质的代谢，在外周组织，能进一步经5’脱碘作用代谢成更具活性甲状腺激素（T3）。血清/血浆中FT4浓度与有效的甲状腺素比率（ETR）呈高度的相关。甲状腺功能亢进，医源性或中毒性甲状腺功能亢进FT4会升高，各种原因所致TBG升高，如雌激素，肝炎等，也使T4升高但FT4不升高；各种原因所致的甲低病例中，FT4均显著低于正常范围。一般认为在临床诊断中，FT4测定的优点是不受其结合蛋白质浓度和结合特性变化的影响，最能反映甲状腺功能，与TSH联合检测更能提高诊断正确率。用于体内游离甲状腺素测定的主要方法有放射免疫分析法、酶联免疫吸附分析法、化学发光免疫分析法等。目前常用的放射免疫分析法（RIA）是用I125标记甲状腺素半抗原来实现的，其合成工艺复杂，有效期短，对环境有一定污染，影响检测结果的因素较多。近几年来，化学发光免疫分析技术发展迅速，灵敏度、特异性以及自动化程度均达到或超过了RIA水平，特别是标记物的稳定性和不污染环境是RIA法无法比拟的。目前各大中型医院均进口了全自动化学发光免疫分析系统，但是仪器和试剂价格昂贵。目前已有多件磁微粒化学发光方法检测甲状腺素的专利申请，申请号（201510518771）的专利申请使用的是异鲁米诺发光标记物标记甲状腺素抗体，检测灵敏度较低，稳定性较差。
技术实现思路
本专利技术要解决的问题是提供游离甲状腺素的化学发光免疫定量检测试剂盒及其制备方法，避免了放射性免疫分析的试剂有效期短、存在放射性污染、操作繁琐等缺点，且解决了灵敏度低，稳定性差，成本高的缺陷。本专利技术公开了一种制备工艺简单、成本低廉、稳定性好的游离甲状腺素的化学发光免疫定量检测试剂盒以及制备方法。一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的浓度为0.5mg/mL；所述碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物为碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，所述碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述生物素标记的甲状腺素抗体为生物素和甲状腺素抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，所述生物素和甲状腺素抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，所述甲状腺素抗体为小鼠单克隆抗体。所述甲状腺素校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为0，8.00，15.00，30.00，60.00，100.00pmol/L；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述甲状腺素质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为15.00，60.00pmol/L；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH值范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH值为7.4。优选地，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris缓冲液，PH为7.0；所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL。优选地，所述碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物为碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，所述碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:800；所述酶标记物缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4。优选地，所述甲状腺素抗体为生物素和甲状腺素抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，所述生物素和甲状腺素抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:500；所述生物素标记物缓冲液为20mM缓冲液，PH范围为8.0；所述甲状腺素抗体为小鼠单克隆抗体。优选地，所述甲状腺素校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为0，8.00，15.00，30.00，60.00，100.00pmol/L；校准品缓冲液为20mM缓冲液，PH为7.4；所述甲状腺素质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为15.00，60.00pmol/L；质控品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4。优选地，所述四碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和四碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式为：或者所述四碘甲状腺原氨酸衍生物为N-磺酸化羟基琥珀酰亚胺(Sulfo-NHS)和四碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式为：优选地，所述四碘甲状腺原氨酸衍生物采用以下工艺步骤制备的：S1.四碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯的制备：取四碘甲状腺原氨酸加入到蒸馏水中，加入硫酸铜，在100℃水浴中回流反应5小时，冷却至室温后，过滤除去固体杂质，然后将滤液冰浴降温2小时有结晶析出，用乙醇重结晶，得到白色片状结晶四碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯。S2.N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与四碘甲状腺原氨酸合成物的制备：取步骤S1制得的四碘甲状腺原氨酸-丁二酸酯溶解于50mM柠檬酸溶液（PH4.0）中，加入N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)，避光条件下2～8℃反应8h，过色谱柱收集N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与四碘甲状腺原氨酸合成物的洗脱液，浓缩后，用无水乙醇重结晶，得到白色针状结晶N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)与四碘甲本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。

【技术特征摘要】
1.一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：它包括链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液，碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物，生物素标记的甲状腺素抗体，测试稀释液，甲状腺素校准品，甲状腺素质控品。2.根据权利要求1所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为20mM～200mMTris（三羟甲基氨基甲烷）缓冲液，所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.1mg/mL～1.0mg/mL，优选的浓度为0.5mg/mL；所述碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物为碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，所述碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:400～1:2000；所述酶标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0；所述生物素标记的甲状腺素抗体为生物素和甲状腺素抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，所述生物素和甲状腺素抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:200～1:1000；生物素标记物缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，所述甲状腺素抗体为小鼠单克隆抗体；所述甲状腺素校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为0，8.00，15.00，30.00，60.00，100.00pmol/L；所述校准品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH为7.4；所述甲状腺素质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为15.00，60.00pmol/L；所述质控品缓冲液为20mM～200mMTris缓冲液，PH值范围为6.5～8.0，优选的浓度为20mM，优选的PH值为7.4。3.根据权利要求2所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液为表面包裹带有链霉亲和素的粒径为1um～1.5um的四氧化三铁悬浮于磁微粒包被物缓冲液中所形成的悬浮液，所述磁微粒包被物缓冲液为100mMTris缓冲液，PH为7.0；所述链霉亲和素包被的磁微粒悬浮液的浓度为0.5mg/mL。4.根据权利要求2所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述碱性磷酸酶标记的甲状腺素衍生物为碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物稀释于酶标记物缓冲液中所形成，所述碱性磷酸酶和甲状腺素衍生物的偶联物与酶标记物缓冲液的稀释比例为1:800；所述酶标记物缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4。5.根据权利要求2所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述甲状腺素抗体为生物素和甲状腺素抗体的偶联物稀释于生物素标记物缓冲液中所形成，所述生物素和甲状腺素抗体的偶联物与生物素标记物缓冲液的稀释比例为1:500；所述生物素标记物缓冲液为20mM缓冲液，PH范围为8.0；所述甲状腺素抗体为小鼠单克隆抗体。6.根据权利要求2所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述甲状腺素校准品为含20%胎牛血清的校准品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为0，8.00，15.00，30.00，60.00，100.00pmol/L；校准品缓冲液为20mM缓冲液，PH为7.4；所述甲状腺素质控品为含20%胎牛血清的质控品缓冲液，将甲状腺素纯品稀释至工作浓度，分别为15.00，60.00pmol/L；质控品缓冲液为20mMTris缓冲液，PH为7.4。7.根据权利要求2所述的一种游离甲状腺素磁微粒化学发光免疫定量检测试剂盒，其特征在于：所述四碘甲状腺原氨酸衍生物为N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和四碘甲状腺原氨酸的化学合成物质，其化学结构式为：或者所述四碘甲状腺原氨酸衍生物为N-磺酸化羟基琥...

【专利技术属性】
技术研发人员：李明勇，姜雪莲，周燕香，张玲，胡洁，黄伟，
申请(专利权)人：湖南远璟生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43