一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法技术

本发明专利技术提供了一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法，该引物包括位于rs2230500位点的引物、位于rs266729位点的引物、位于rs822391位点的引物以及位于rs822396位点的引物。采用该引物检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，包括以下步骤：(1)采集样品并提取DNA；(2)采用上述引物分别进行目的基因的PCR扩增、胶回收；(3)测定胶回收产物的浓度，进行荧光标记PCR反应，并对反应产物进行纯化；(4)将纯化产物上机测序，并对SNP检测结果进行分析。该引物特异性好、灵敏度高、准确性好，检测方法简单，可预测受检者患脑中风的风险。

【技术实现步骤摘要】
一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法
本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法。
技术介绍
脑中风又称作脑卒中或脑血管病，是由于大脑里面的血管突然破裂出血或因血管堵塞造成大脑缺血、缺氧而引起。临床表现以突发意识障碍或口眼歪斜、半身不遂、口齿不清、认知障碍为主要特征。卒中包括缺血性卒中(短暂性脑缺血发作、动脉粥样硬化性血栓性脑梗塞、腔隙性脑梗塞、脑栓塞)与出血性卒中(脑出血、蛛网膜下腔出血)。根据“中国心脑血管病流行病学协作研究组”发表的数据，我国卒中患者中缺血性卒中占62.4％，脑出血占27.5％，蛛网膜下腔出血占1.8％。随着我国人口老龄化和群众生活方式的改变，近年脑卒中的发病率呈显著的上升趋势。据流行病学调查资料显示：中国目前约有700万脑卒中患者，每年新发脑卒中200万人，每年死于中风的患者约达150万，平均每15秒钟就有一例新发病人，每21秒钟死一人。随着生活方式发生的巨变，心脑血管疾病迅猛攀升，其中脑血管病已经超过肿瘤和冠心病，在全国死亡、致残疾病中名列第一位，目前，发病率仍以接近每年9％的速度上升。国际间比较研究提示：中国人群脑血管病的发病率和死亡率高于国际平均水平。脑血管病以其高发病率、高复发率、高致残率、高死亡率以及越来越高的诊治费用，给国家和社会造成巨大的经济损失，已成为严重影响我国国计民生的重要公共卫生问题，防治需求极其迫切，必需引起高度重视。通过检测与脑中风易感性相关的SNP，就能够帮助脑中风易感人群了解其患脑中风的风险，提前做好预防工作，避免脑中风的发生，脑中风越早发现并及时诊治，治愈机会就越大。通过检测与脑中风易感性相关的SNP位点的多态性，不仅可以从分子遗传学水平上了解细胞癌变机制，而且对脑中风的预测、预防、遗传咨询等具有重要意义。
技术实现思路
针对现有技术中存在的上述问题，本专利技术提供一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法，其引物特异性好，检测方法准确性高，可用于脑中风的风险评估，为脑中风的疾病预防提供指导。为实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物，这些引物包括位于PRKCH基因的rs2230500位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs266729位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs822391位点的引物以及位于ADIPOQ基因的rs822396位点的引物；其中，rs2230500位点的引物为F：5′-ACTGTTTGGGTTGAAGTAAG-3′(SEQIDNo：1)和R：5′-GTCTCAGCTCTGTAAGAAAAG-3′(SEQIDNo：2)；rs266729位点的引物为F：5′-GCCTAATGTGACTTCTCTTG-3′(SEQIDNo：3)和R：5′-CCTGTTTTTCCAGTTCCTT-3′(SEQIDNo：4)；rs822391位点的引物为F：5′-CAAGTCTCAGGTTCTCCTAC-3′(SEQIDNo：5)和R：5′-CCCAGAAATCACCTCAC-3′(SEQIDNo：6)；rs822396位点的引物为F：5′-TTACAATCAGAGTCCGTTC-3′(SEQIDNo：7)和R：5′-TAAACTTCCTCACTGCTTG-3′(SEQIDNo：8)。采用上述引物检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，包括以下步骤：(1)采集样品并提取其基因组DNA；(2)采用上述引物分别对基因组DNA进行目的基因的PCR扩增，并对扩增产物进行胶回收；(3)对胶回收产物进行浓度测定，计算模板量，然后进行PCR扩增(荧光标记反应)并纯化；(4)将步骤(3)中的纯化产物在3730型全自动序列分析仪(美国AppliedBiosystems公司)上样，用Chromas软件对SNP分型进行分析。进一步地，步骤(2)中PCR扩增体系为：DNA模板含量为100-150ng，浓度为5pmol/μL的正向引物3.0μL，浓度为5pmol/μL的反向引物3.0μL，PrimeSTARMAX25.0μL，用ddH2O补足体积至50μL。进一步地，步骤(2)中PCR扩增反应条件为：95℃预变性5min，95℃变性30s，55℃退火15s，72℃延伸15s，进行30个循环，最后72℃延伸5min。进一步地，步骤(3)中PCR扩增体系为：DTCSMasterMix2.5μL，浓度为5pmol/μL的反向引物1.0μL，DNA模板20ng，用ddH2O补足体积至10μL。进一步地，步骤(3)中PCR扩增反应条件为：94℃预变性30s，94℃变性25s，55℃退火25s，60℃延伸3min，30个循环，最后60℃延伸20min。本专利技术提供的用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物及检测方法，具有以下有益效果：(1)本专利技术提供了用于检测脑中风易感基因相关位点的引物，该引物具有特异性高、准确性好的优点，实现了脑中风易感性相关的SNP位点的检测，提高了检测效率。(2)本专利技术还提供了一种检测脑中风易感性相关的SNP位点的方法，该方法为直接测序法，本检测方法简单，其检测结果也具有特异性好，灵敏度高，准确性好等优点，可以为脑中风的疾病预防提供指导。附图说明图1为不同受检者血液DNA样品在4种不同引物下进行PCR扩增所得产物的琼脂糖凝胶电泳图；图2为rs2230500位点多态性检测的测序结果图；图3为rs266729位点多态性检测的测序结果图；图4为rs822391位点多态性检测的测序结果图；图5为rs822396位点多态性检测的测序结果图；图6为rs2230500位点多态性检测结果的荧光验证图；图7为rs266729位点多态性检测结果的荧光验证图；图8为rs822391位点多态性检测结果的荧光验证图；图9为rs822396位点多态性检测结果的荧光验证图。具体实施方式实施例1设计扩增SNP位点的引物针对脑中风易感性相关的SNP位点设计了大量的引物，通过引物反应条件的优化和比较，筛选出特异性好的四对引物，包括：位于PRKCH基因的rs2230500位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs266729位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs822391位点的引物以及位于ADIPOQ基因的rs822396位点的引物；其中，rs2230500位点的引物为F：5′-ACTGTTTGGGTTGAAGTAAG-3′(SEQIDNo：1)和R：5′-GTCTCAGCTCTGTAAGAAAAG-3′(SEQIDNo：2)；rs266729位点的引物为F：5′-GCCTAATGTGACTTCTCTTG-3′(SEQIDNo：3)和R：5′-CCTGTTTTTCCAGTTCCTT-3′(SEQIDNo：4)；rs822391位点的引物为F：5′-CAAGTCTCAGGTTCTCCTAC-3′(SEQIDNo：5)和R：5′-CCCAGAAATCACCTCAC-3′(SEQIDNo：6)；rs822396位点的引物为F：5′-TTACAATCAGAGTCCGTTC-3′(SEQIDNo：7)和R：5′-TAAACTTCCTCACTGCTTG-3′(SEQ本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物，其特征在于，所述引物包括位于PRKCH基因的rs2230500位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs266729位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs822391位点的引物以及位于ADIPOQ基因的rs822396位点的引物；其中，rs2230500位点的引物为F：5′‑ACTGTTTGGGTTGAAGTAAG‑3′和R：5′‑GTCTCAGCTCTGTAAGAAAAG‑3′；rs266729位点的引物为F：5′‑GCCTAATGTGACTTCTCTTG‑3′和R：5′‑CCTGTTTTTCCAGTTCCTT‑3′；rs822391位点的引物为F：5′‑CAAGTCTCAGGTTCTCCTAC‑3′和R：5′‑CCCAGAAATCACCTCAC‑3′；rs822396位点的引物为F：5′‑TTACAATCAGAGTCCGTTC‑3′和R：5′‑TAAACTTCCTCACTGCTTG‑3′。

【技术特征摘要】
1.一种用于检测脑中风易感性相关的SNP位点的引物，其特征在于，所述引物包括位于PRKCH基因的rs2230500位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs266729位点的引物、位于ADIPOQ基因的rs822391位点的引物以及位于ADIPOQ基因的rs822396位点的引物；其中，rs2230500位点的引物为F：5′-ACTGTTTGGGTTGAAGTAAG-3′和R：5′-GTCTCAGCTCTGTAAGAAAAG-3′；rs266729位点的引物为F：5′-GCCTAATGTGACTTCTCTTG-3′和R：5′-CCTGTTTTTCCAGTTCCTT-3′；rs822391位点的引物为F：5′-CAAGTCTCAGGTTCTCCTAC-3′和R：5′-CCCAGAAATCACCTCAC-3′；rs822396位点的引物为F：5′-TTACAATCAGAGTCCGTTC-3′和R：5′-TAAACTTCCTCACTGCTTG-3′。2.采用权利要求1所述的引物检测脑中风易感性相关的SNP位点多态性的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)采集样品并提取其基因组DNA；(2)采用所述引物分别对基因组DNA进行目的基因的PCR扩增，并对扩增产物进行胶回收；(3)对胶回收产物进行浓度测定，计算模板量，然后进...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭柯又，张蓉，谭遥，谭玉华，
申请(专利权)人：成都中创清科医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51