一种标记β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法技术

本发明专利技术公开了一种标记β‑D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其中包括载体系统的转化及对表达菌株的优化诱导，少量试验后对高表达菌株筛选培养，进行大量的蛋白纯化合成洗脱。本发明专利技术产品通过构建好的表达载体转化到表达菌株内，筛选菌落并进行PCR测序验证，得到阳性菌株，进行少量预实验后，同时进行SDS‑PAGE,确认目的蛋白的表达，筛选出高表达菌株，随后对该高表达菌株进行大量培养，再进一步进行大量蛋白纯化，该结合蛋白能够有效与真菌细胞壁成份β‑D葡聚糖进行免疫亲和，准确标记真菌表面β‑D葡聚糖抗原。

【技术实现步骤摘要】
一种标记β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法
本专利技术属于生物医学诊断
，具体涉及一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法。
技术介绍
真菌广泛分布于自然界，绝大多数对人类无害甚至有益，但其中400余种可引起人类疾病，亦即为我们所称致病性真菌。致病真菌可分为皮肤癣菌、酵母菌和霉菌。真菌引起的疾病称为真菌病，临床上真菌病可分为浅部真菌病和深部真菌病或系统性真菌病。浅部真菌病由只侵犯人体皮肤、毛发和甲等浅表组织的真菌引起。在我国90%以上的真菌病属于浅部真菌病。引起系统性真菌病的病原真菌包括组织胞浆菌、芽生菌、球孢子菌和副球孢子菌，这些都是双相真菌，在自然界中以霉菌形态菌如隐球菌属、念珠菌属、曲霉属等均可致严重的系统感染。随着器官移植的大量开展及免疫抑制剂、肿瘤患者化疗药物的广泛使用，糖皮质类固醇激素的长期使用，体腔内有创检查的大量开展，人口老龄化和糖尿病等慢性疾病患者的增多，真菌病的发病率和死亡率在逐年增加，对人类健康的危害日趋严重。然而，作为条件致病真菌及大自然中原本认为不致病的真菌种类，近年发现在逐年上升，由于对很多真菌感染的微生物学特性了解甚少，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种能够标记真菌细胞壁成份β‑D葡聚糖的结合蛋白，其特征在于其中包括载体系统转化及对表达菌株的优化诱导表达及菌株筛选后的大量纯化，所述载体序列为PTXB1 大肠杆菌表达载体，所述表达菌株为BL21(DE3)大肠杆菌。

【技术特征摘要】
1.一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白，其特征在于其中包括载体系统转化及对表达菌株的优化诱导表达及菌株筛选后的大量纯化，所述载体序列为PTXB1大肠杆菌表达载体，所述表达菌株为BL21(DE3)大肠杆菌。2.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述转化所用的载体系统PTXB1。3.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述载体系统转化后的表达菌株BL21(DE3)大肠杆菌进行优化诱导表达。4.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结合蛋白及其纯化合成方法，其特征在于所述转化表达条件为37℃，220rpm摇床震荡培养，待OD600=0.4-0.6之间时，加入终浓度为0.5mM的IPTG，18℃诱导表达10h。5.如权利要求1所述的一种能够标记真菌细胞壁成份β-D葡聚糖的结...

【专利技术属性】
技术研发人员：咸涛，
申请(专利权)人：江苏诺鬲生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏,32