一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法技术

本发明专利技术公开了一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，通过将多聚甘氨酸包被的磁微粒与核心抗原包被的磁微粒混合使用，以保持类病毒颗粒自组装和去组装速率的相对平衡，减少检测过程中各种机械力对类病毒颗粒自组装所依赖的静电作用、疏水相互作用和氢键的影响，进而保证类病毒颗粒上的实际抗原表位数接近理论数，减少多次重复检测时结合于固相载体上类病毒颗粒的抗体标志物数量差异，提高核心抗体免疫分析的精密度。进一步地，基于上述方法，本发明专利技术还提供了一种核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，可显著提高核心抗体免疫分析精密度。

A method to improve the precision of chemiluminescence immunoassay for core antibody microparticles

The invention discloses a method for improving the precision of chemiluminescent immunoassay of core antibody magnetic particles. By mixing polyglycine coated magnetic particles with core antigen coated magnetic particles, the relative balance of self-assembly and disassembly rate of virus-like particles can be maintained, and various mechanical force pairs can be reduced in the detection process. The self-assembly of virus particles depends on the effects of electrostatic interaction, hydrophobic interaction and hydrogen bonding, thus ensuring that the actual epitopes on virus-like particles are close to the theoretical number, reducing the number of antibody markers combined with virus-like particles on solid-phase carriers during repeated detection, and improving the precision of core antibody immunoassay. Degree. Further, based on the above method, the invention also provides a core antibody magnetic particle chemiluminescence immunoassay kit, which can significantly improve the precision of core antibody immunoassay.

【技术实现步骤摘要】
一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法
本专利技术涉及免疫分析
，更具体的说是涉及一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法。
技术介绍
乙型肝炎是世界上波及面最广的传染性公共卫生问题之一，乙型肝炎病毒已经感染了世界上20亿人口，其中3.6亿人转为慢性乙型肝炎，每年约造成60万人死亡。在感染人体的过程中，乙型肝炎核心抗原(HBcAg)是乙型肝炎病毒免疫原性最强的部分，其为由多个拷贝的C蛋白组成的颗粒，是乙肝病毒的核衣壳，在电子显微镜下，该核衣壳呈现出正二十面体的拓扑结构。所有感染过乙肝病毒的病人体内都会产生高滴度的核心抗体(anti-HBc)，并且不论预后的情况如何，该抗体仍然持续存在。因此，核心抗体被视为乙肝病毒感染最可靠的血清标志物。基于感染物的抗原与其刺激产生的抗体之间的特异性，双抗原夹心法成为临床上较为常用的检测方法。对于核心抗体的双抗原夹心法免疫检测来说，包被到固相载体上的抗原的活性形式是由C蛋白二聚体组装形成的类病毒颗粒。二聚体之间在自组装过程中和组装完成后不存在共价键的相互作用，只存在接触结构域间的非共价键结合。在正二十面体的拓扑结构表面之上，遍布着由C蛋白二聚体的四螺旋束形成的钉状突起，而核心抗体标志物的抗原表位就位于钉状突起顶端的两段螺旋间的回环区。结合目前临床上应用的全自动化学发光免疫分析仪，采用磁性微粒子作为固相包被和分离的载体，在磁场的作用下即可实现游离抗原或抗体与抗原抗体复合物的快速分离，达到快速、精确检测的目的。然而，由于类病毒颗粒自组装所依赖的静电作用、疏水相互作用和氢键等非共价键对于自动化免疫分析仪各反应步骤的各种机械力敏感，会产生对自动化免疫分析仪精密度指标的干扰，尤其是对重复检测的精密度干扰，表现为衡量精密度的指标CV值升高；具体的干扰作用产生机制如下：1)C蛋白二聚体的自组装和去组装在试剂的保存和使用过程中同时进行，并且由于组装机制自发地避免动力学陷阱而保持相当数量的游离二聚体；2)C蛋白的自组装和去组装在试剂的制备时即磁微粒与C蛋白的偶联过程中同时进行，并且由于组装机制自发地避免动力学陷阱而保持相当数量的游离二聚体；3)重复检测间游离二聚体的浓度由于自组装和去组装的速率相对不平衡而发生偏差，从而使得包被于固相载体上类病毒颗粒的抗原表位数量发生相应的反偏差；4)重复检测间游离二聚体的浓度由于自组装和去组装的速率相对不平衡而发生偏差，从而使得结合于固相载体上类病毒颗粒的抗体标志物数量发生相应的反偏差。C蛋白在体外条件下自组装成类病毒颗粒后仍然存在相当数量的游离C蛋白二聚体，并且由非共价相互作用组装起来的类病毒颗粒一旦受到外力破坏，便会使得自组装和去组装的平衡向去组装的方向倾斜，最终类病毒颗粒上的实际抗原表位数要少于理论抗原表位数，并且还会在重复检测间产生波动，对检测精密度造成严重干扰。因此，如何改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度是本领域技术人员亟需解决的问题。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术提供了一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，通过将多聚甘氨酸包被的磁微粒与核心抗原包被的磁微粒混合使用，降低自动化免疫分析仪各反应步骤的各种机械力对类病毒颗粒自组装的影响。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，其特征在于，将多聚甘氨酸包被的磁微粒与核心抗原包被的磁微粒混合使用。通过多聚甘氨酸包被磁微粒，避免类病毒颗粒自组装和去组装的平衡向去组装的方向倾斜，进而保证类病毒颗粒上的实际抗原表位数接近理论数，减少多次重复检测时结合于固相载体上类病毒颗粒的抗体标志物数量差异。进一步地，所述多聚甘氨酸包被磁微粒的过程为：通过多肽合成技术合成多聚甘氨酸，将多聚甘氨酸偶联到磁微粒表面；或甘氨酸通过交联剂相互交联成多聚甘氨酸，多聚甘氨酸偶联到磁微粒表面；或甘氨酸的相互交联、甘氨酸磁微粒的偶联同时进行。一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法制备的核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒包括M试剂，R1试剂和R2试剂；所述M试剂包括多聚甘氨酸包被的磁微粒，核心抗原包被的磁微粒和磁微粒缓冲液；所述R1试剂为TE缓冲液；所述R2试剂包括PB缓冲液以及添加于所述PB缓冲液中的标记有吖啶酯或吖啶磺酰胺的核心抗原。进一步地，所述磁微粒缓冲液为HEPES缓冲液。进一步地，所述PB缓冲液还可包含BSA、酪蛋白等降低检测本底值的组分。进一步地，所述PB缓冲液还可包含吐温类表面活性剂的组分。进一步地，所述含有标记吖啶酯或吖啶磺酰胺的核心抗原的形式为类病毒颗粒，其一级结构可与包被磁微粒的核心抗原相同或不同。进一步地，所述多聚甘氨酸通过共价偶联的方式包被到磁微粒表面；所述核心抗原通过共价偶联或单纯物理吸附的方式包被到磁微粒表面。优选地，针对于通过多肽合成技术合成多聚甘氨酸，所述多聚甘氨酸包被磁微粒的反应体系包括：包被缓冲液，磁微粒，多聚甘氨酸，交联剂和磁微粒缓冲液；所述包被缓冲液为MES缓冲液；所述磁微粒表面带有可产生共价连接的活性基团，如-COOH等；所述交联剂包括含有碳二亚胺结构的交联剂；所述磁微粒缓冲液为HEPES缓冲液。进一步优选地，所述含有碳二亚胺结构的交联剂为EDC。进一步优选地，所述交联剂还包括琥珀酰亚胺(NHS)，EDC与NHS同时使用可延长EDC半衰期，使有效反应时间延长。具体的操作方法为：在非磁力搅拌的包被缓冲液中加入磁微粒、多聚甘氨酸和交联剂，2-8℃下反应过夜，集磁，弃液体，加入磁微粒缓冲液洗涤3次以上，集磁，弃液体，加入磁微粒缓冲液2-8℃下保存。优选地，对于甘氨酸通过交联剂相互交联成多聚甘氨酸，多聚甘氨酸再偶联到磁微粒表面的过程，其具体反应体系包括：包被缓冲液，甘氨酸，交联剂，磁微粒和磁微粒缓冲液；所述包被缓冲液为MES缓冲液；所述交联剂包括含有碳二亚胺结构的交联剂；所述磁微粒表面带有可产生共价连接的活性基团，如-COOH等；所述磁微粒缓冲液为HEPES缓冲液。进一步优选地，所述含有碳二亚胺结构的交联剂为EDC。进一步优选地，所述交联剂还包括琥珀酰亚胺(NHS)，EDC与NHS同时使用可延长EDC半衰期，使有效反应时间延长。具体的操作方法为：在非磁力搅拌的包被缓冲液中加入甘氨酸和交联剂，2-8℃下进行交联反应；随后加入磁微粒，2-8℃下反应过夜，集磁，弃液体，加入磁微粒缓冲液洗涤3次以上，集磁，弃液体，加入磁微粒缓冲液2-8℃下保存。多聚甘氨酸的长度取决于甘氨酸的浓度，交联剂的浓度以及反应时间。优选地，对于甘氨酸的相互交联、甘氨酸磁微粒的偶联同时进行的过程，其具体反应体系包括：包被缓冲液，甘氨酸，交联剂，磁微粒和磁微粒缓冲液；所述包被缓冲液为MES缓冲液；所述交联剂包括含有碳二亚胺结构的交联剂；所述磁微粒表面带有可产生共价连接的活性基团，如-COOH等；所述磁微粒缓冲液为HEPES缓冲液。进一步优选地，所述含有碳二亚胺结构的交联剂为EDC。进一步优选地，所述交联剂还包括NHS。具体的操作方法为：在非磁力搅拌的包被缓冲液中加入磁微粒、甘氨酸和交联剂，2-8℃下反应过夜，集磁，弃液体，加入磁微粒缓冲液洗涤3次以上，集磁，弃液体，加本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，其特征在于，将多聚甘氨酸包被的磁微粒与核心抗原包被的磁微粒混合使用。

【技术特征摘要】
1.一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，其特征在于，将多聚甘氨酸包被的磁微粒与核心抗原包被的磁微粒混合使用。2.根据权利要求1所述的一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法，其特征在于，所述多聚甘氨酸包被磁微粒的过程为：通过多肽合成技术合成多聚甘氨酸，将多聚甘氨酸偶联到磁微粒表面；或甘氨酸通过交联剂相互交联成多聚甘氨酸，多聚甘氨酸偶联到磁微粒表面；或甘氨酸的相互交联、甘氨酸磁微粒的偶联同时进行。3.根据权利要求1所述的一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法制备的核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒包括M试剂，R1试剂和R2试剂；所述M试剂包括多聚甘氨酸包被的磁微粒，核心抗原包被的磁微粒和磁微粒缓冲液；所述R1试剂为TE缓冲液；所述R2试剂包括PB缓冲液以及标记有吖啶酯或吖啶磺酰胺的核心抗原。4.根据权利要求3所述的一种改善核心抗体磁微粒化学发光免疫分析精密度的方法制备的核心抗体磁微粒化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于，所述多聚甘氨酸包被磁微粒的反应体系包括：包被缓冲液，磁微粒，多聚甘氨酸，交联剂和磁微粒缓冲液；所述包被缓冲液为MES缓冲液；所述交联剂包括含有含有碳二亚胺结构的交联剂；所述磁微粒表面带有可产生共价连接的活性基团；所述磁微粒缓冲液为HEPES缓冲液。5.根据权利要求3所述的一种改善...

【专利技术属性】
技术研发人员：翁宇，
申请(专利权)人：捷和泰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11