胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂制造技术

本发明专利技术公开了一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为pH值为7.5的缓冲液，试剂2为包被有动物抗人CysC抗体的乳胶微球分散液，其特征在于：所述乳胶微球还包被有对应动物的Normal IgG，所述Normal IgG在抗体系统中占比30％

【技术实现步骤摘要】
胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂


[0001]本专利技术涉及一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，属于医学免疫领域。

技术介绍

[0002]胱抑素C(CysC)：也称半胱氨酸蛋白酶抑制剂C、γ
‑
微量蛋白或γ
‑
后球蛋白，广泛存在于各种组织的有核细胞和体液中，是一种低分子量、碱性非糖化蛋白质，分子量为13.3KDa，由122个氨基酸残基组成，可由机体所有有核细胞产生，产生率恒定。CysC血清浓度与肾功能损害程度高度相关，能够准确反映人体GFR的变化，是评估肾功能的一个重要指标。
[0003]免疫比浊法是目前检测CysC最主流的方法。在测定过程中，若所用抗原抗体反应速率过快时会导致试剂延展性不好，需要调整反应曲线至试剂兼顾灵敏度及延展性。为达到上述目的，通常单独或配合使用以下三种方法：一是降低抗体使用量，二是调试试剂2的粒子浓度，三是调整试剂在生化仪上计算吸光度差值的读点。但通过上述方法进行的调试通常会影响样本测值(尤其是高浓度范围)，导致试剂整体相关性变差(slope升高或降低，r降低)。

技术实现思路

[0004]本专利技术的目的是提供一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，通过在乳胶微球上连接一定比例的Normal IgG，达到在调整反应曲线，保证试剂灵敏度和/或延展性的基础上，还能确保样本测值准确性的目的。
[0005]为达到上述目的，本专利技术采用的技术方案为：一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为促进抗原和抗体反应的溶液，试剂2为包被有动物抗人CysC抗体的乳胶微球分散液，其特征在于：所述乳胶微球还包被有对应动物的Normal IgG，所述Normal IgG在抗体系统中占比30％
‑
60％，Normal IgG在抗体系统中占比30％
‑
60％是指Normal IgG占所有抗体重量的30
‑
60％。
[0006]优选的，所述Normal IgG为正常未免疫兔的IgG，所述CysC抗体为兔抗人CysC抗体。
[0007]优选的，所述Normal IgG为正常未免疫山羊的IgG，所述CysC抗体为山羊抗人CysC抗体。
[0008]优选的，所述试剂2还包括pH7.5的磷酸缓冲液0.1M，防腐剂Proclin300 0.01g/L及NaCl 0.1g/L。
[0009]优选的，所述试剂1还包括pH7.5的磷酸缓冲液0.1M，防腐剂Proclin300 0.01g/L及NaCl 0.1g/L。
[0010]本专利技术提供了一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，采用了乳胶微球上包被一定比例的Normal IgG与特异性抗体共同结合乳胶微球上的结合位点，减慢了特异性抗原抗体的反应速率，达到在调整反应曲线，保证试剂灵敏度和/或延展性的基础上，还能确保样本
测值准确性的目的。另外，不同批次抗体可通过调整与Normal IgG的比例，在一定程度上解决抗体批间差导致的试剂反应性差异的问题。
附图说明
[0011]图1为Rabbit Normal IgG占比为0％、40％及60％的试剂与在售试剂的反应性对比。
[0012]图2为Rabbit Normal IgG占比为40％及60％的试剂与在售试剂的样本相关性。
[0013]图3为Goat Normal IgG占比为0％、30％及50％的试剂与在售试剂的反应性对比。
[0014]图4为Goat Normal IgG占比为30％及50％的试剂与在售试剂的样本相关性。
具体实施方式
[0015]实施例1
[0016]配制试剂1：试剂1成分如下:
[0017]磷酸缓冲液0.1M/L 磷酸缓冲液pH 7.5
[0018]Tween20 0.01g/L
[0019]NaCl 0.1g/L
[0020]Proclin3000.01g/L。
[0021]配制试剂2：使用兔IgG系统，即兔抗人CysC多克隆抗体及正常未免疫兔的IgG(Rabbit Normal IgG)。
[0022](1)溶液制备
[0023]a.活化缓冲液：100mM/L磷酸缓冲液，pH7.5；
[0024]b.活化剂：按照10mg/ml的浓度称量EDC(1
‑
乙基
‑3‑
(3
‑
二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐),现用现配；
[0025]c.封闭液：10％(w/v)BSA；
[0026]d.复溶溶液(即R2缓冲液):磷酸缓冲液0.1M/L pH 7.5，NaCl 0.1g/L，Proclin3000.01g/L。
[0027](2)特异性兔抗人抗CysC多克隆抗体及兔Normal IgG的包被
[0028]①
取粒径为150nm的聚苯乙烯乳胶粒子10mg与活化缓冲液a按体积比1:20进行在37℃条件下混合后混匀10分钟；
[0029]②
向步骤
①
中加入0.5mg的混合抗体(特异性兔抗人抗CysC多克隆抗体及兔Normal IgG，其中Normal IgG蛋白占比不同)：配比1的Normal IgG占比0％(即CysC多克隆抗体0.5mg，Normal IgG 0.0mg)、配比2占比20％(即CysC多克隆抗体0.4mg，Normal IgG 0.1mg)、配比3占比40％(即CysC多克隆抗体0.3mg，Normal IgG 0.2mg)、配比4占比60％(即CysC多克隆抗体0.2mg，Normal IgG 0.3mg)、配比5占比80％即CysC多克隆抗体0.1mg，Normal IgG 0.4mg)，37℃条件下混合60分钟；
[0030]③
向步骤
②
加入100ul的活化剂b,37℃条件下混合60分钟；
[0031]④
向步骤
③
中加入0.5ml的封闭液c,37℃条件下混合60分钟；
[0032]⑤
步骤
④
反应完成后，离心并去除上清液。离心条件为转速15000rpm,离心时间为30分钟，温度设定10℃；
[0033]⑥
去除上清液，并用复溶溶液复溶，重悬乳胶微球，重悬过程可使用细胞破碎仪辅助重悬。试剂2制备完成。
[0034]检测方法
[0035]使用全自动生化分析仪东芝40FR来检测CysC。检测条件如下:
[0036]样本量3ul
[0037]试剂1量235ul
[0038]试剂2量50ul
[0039]主波长540nm
[0040]副波长700nm
[0041]在全自动生化分析仪东芝40FR上设置好以上参数，检测在售试剂及不同Normal IgG占比组(配比1、配比2、配比3、配比4、配比5)的吸光度，结果如表1所示。对比检测15例血清样本的浓度本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，包括试剂1和试剂2，所述试剂1为pH值为7.5的缓冲液，试剂2为包被有动物抗人CysC抗体的乳胶微球分散液，其特征在于：所述乳胶微球还包被有对应动物的Normal IgG，所述Normal IgG在抗体系统中占比30％
‑
60％。2.根据权利要求1所述的胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，其特征在于：所述Normal IgG为正常未免疫兔的IgG，所述CysC抗体为兔抗人CysC抗体。3.根据权利要求2所述的胱抑素C胶乳增强免疫比浊试剂，其特征在...

【专利技术属性】
技术研发人员：王二蒙，周淼，范可君，
申请(专利权)人：捷和泰北京生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：