一种CDK抑制剂及其应用制造技术

本发明专利技术公开了CDK在制备和筛选抗肝癌药物中的应用，以及New Tectorigenin作为一种CDK抑制剂在调节HepG2细胞周期中的应用。本申请的发明专利技术人发现New Tectorigenin能通过抑制HepG2细胞周期中的CDK2、CDK4与CDK6蛋白的合成从而抑制HepG2细胞的增殖，因此，New Tectorigenin可作为一种CDK抑制剂，从而抑制HepG2的增殖，这对开发新一代抗肝癌药物有重要的意义。

A CDK inhibitor and its application

The invention discloses the application of CDK in the preparation and screening of anticancer drugs, and the application of New Tectorigenin as a CDK inhibitor in regulating HepG2 cell cycle. The inventor of this application found that New Tectorigenin could inhibit the proliferation of HepG2 cells by inhibiting the synthesis of CDK2, CDK4 and CDK6 proteins in HepG2 cell cycle. Therefore, New Tectorigenin could be used as a CDK inhibitor to inhibit the proliferation of HepG2 cells.

【技术实现步骤摘要】
一种CDK抑制剂及其应用
本专利技术涉及细胞工程
，尤其是一种CDK抑制剂及其应用。
技术介绍
原发性肝癌(primarylivercancer,PLC)是一种病情发展快、病人生存期短的恶性肿瘤。在全球范围内，原发性肝癌的发病率和死亡率分别位列各种恶性肿瘤的第7位和第4位[1]。而我国肝癌发病率占全球的45％，发病率和病死率也逐年呈上升趋势。临床上有多种方法可用于治疗原发性肝癌。而目前，原发性肝癌的治疗方法可分为两大类：起根治作用的肝脏切除术和肝脏移植；以及抑制肝癌细胞生长增殖的放疗、化疗等。然而，大部分肝癌患者在病情确诊时，已经进入了癌症晚期，得到治愈的可能性非常低。鉴此，一种精确有效的肝癌治疗手段在延长处于晚期的肝癌患者寿命中变得极其重要。当下，临床上新颖有效的系统性治疗手段包括：全身系统性化疗、免疫治疗和分子靶向治疗等[2]。近年来，随着细胞生物学与分子生物学的深入发展，人们对细胞中与增殖与凋亡相关的信号通路有了更明确的了解，抗肝癌分子靶向治疗越来越受到科学家的青睐。以索拉非尼(Sorafenib)为代表的分子靶向药物在肝癌临床治疗中日益受到重视并得到广泛应用[3]。早在2007年，分子靶向药物Sorafenib已被美国FDA和欧洲药品评价局(EMEA)批准用于原发性肝癌的临床治疗，这确立了其用于治疗晚期原发性肝癌患者中的重要地位[4]。然而，有调查表明，存在部分患者在服用Sorafenib的过程中出现不良反应，因而必须进行减量或停药的情况[5]。而且一盒60片装的Sorafenib市场上售价高达上万元，无疑加重了肝癌患者及其家庭的负担。因此，开发一种安全性高，效果好，价钱实惠的抗肝癌分子靶向药物成为大势所趋。而NewTectorigenin(参见CN201710610860)是一种以抗肿瘤活性成分鸢尾黄素的化学结构为基础，利用电子等排设计的思想合成的具有良好抗肿瘤活性的新化合物，具有很好的开发前景。目前为止，细胞内死亡受体途径、P13K-AKT途径和线粒体途径是研究得比较透彻的与细胞凋亡相关通路。在开发分子靶向药物时，可以这些通路中的各种关键蛋白为靶点，定向诱导肝癌细胞的凋亡。而NewTectorigenin作为新抗肝癌药物，还未探讨其抗肝癌的具体机制。参考文献：[1]高珊,杨万水,高静等.原发性肝癌的分子流行病学研究进展[J].中国肿瘤,2012,21(2):136-144；[2]张晓媛,黄鹏,李燕京,白玉贤.晚期原发性肝癌治疗的研究进展[J].现代肿瘤医学,2017,25(10):1655-1659；[3]王晓东.皂荚提取物对肝癌大鼠新生血管细胞信号传导的影响及作用机理研究[D].湖北中医药大学,2015；[4]蒋昊,文颂,邵国良.原发性肝癌分子靶向药物临床研究进展[J].肿瘤防治研究,2016,43(05):427-434；[5]杨曼,祁兴顺,韩国宏.索拉菲尼在肝癌治疗中的不良反应[J].临床肝胆病杂志,2014,30(03):278-281。
技术实现思路
基于上述问题，本申请的专利技术人在研究NewTectorigenin的抗癌机制的过程中，意外地发现NewTectorigenin具有CDK抑制剂的作用，NewTectorigenin能减少肿瘤细胞HepG2细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)的异常活化，从而抑制HepG2细胞的增殖，由此，专利技术人也提供了以CDK为靶点在制备和筛选抗肝癌药物中的应用。具体地，本专利技术的技术方案涉及以下几个方面：在第一个方面，本专利技术提供了CDK在制备和筛选抗肝癌药物中的应用。由此，通过筛选出CDK的抑制剂，就可能找到抗肝癌的药物，只要筛选出的CDK的抑制剂对人体的毒副作用较低或者没有毒副作用即可。优选地，所述CDK为CDK2、CDK4或CDK6。在第二个方面，本专利技术提供了CDK的抑制剂在制备抗肝癌药物中的应用。优选地，所述CDK的抑制剂为NewTectorigenin。在第三个方面，本专利技术提供了一种抗肝癌的药物，所述药物中含有CDK的抑制剂。优选地，所述CDK为CDK2、CDK4或CDK6。优选地，所述CDK的抑制剂为NewTectorigenin。更优选地，所述NewTectorigenin的浓度为24～32μM。本申请的专利技术人经多次试验发现，当NewTectorigenin的浓度为24～32μM时，CDK蛋白总量显著降低，表明在此浓度范围的NewTectorigenin可以明显地抑制HepG2细胞的增殖，进而抑制肝癌的进展。在第四个方面，本专利技术提供了一种CDK的抑制剂，所述CDK的抑制剂为NewTectorigenin。在第五个方面，本专利技术还提供了一种细胞周期调节试剂，所述细胞周期调节试剂为NewTectorigenin；以及NewTectorigenin在调节细胞周期中的应用。其中，所述细胞包括但是不限于HepG2细胞，还可以是其它细胞系。综上所述，本专利技术的有益效果为：本申请的专利技术人发现NewTectorigenin能通过抑制HepG2细胞周期中的CDK2、CDK4与CDK6蛋白的合成从而抑制HepG2细胞的增殖，因此，NewTectorigenin可作为一种CDK抑制剂，调节细胞周期，从而抑制HepG2的增殖，这对开发新一代抗肝癌药物有重要的意义。附图说明图1是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK4蛋白总量的变化图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM；图2是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK4蛋白总量的变化柱状图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM。与对照组相比*P＜0.05；图3是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK6蛋白总量的变化图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM；图4是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK6蛋白总量的变化柱状图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM。与对照组相比*P＜0.05；图5是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK2蛋白总量的变化图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM；图6是加入不同浓度NewTectorigenin后HepG2细胞内CDK2蛋白总量的变化柱状图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、24μM、32μM。与对照组相比*P＜0.05；图7是用流式细胞术检测经不同浓度NewTectorigenin处理后，处于细胞周期不同阶段的HepG2数量的变化图，从左往右NewTectorigenin的最终浓度依次为0μM、4μM、8μM、16μM、24μM、32μM。具体实施方式本申请对HepG2细胞进行传代分板，培养一段时间，再加入NewTectorigenin溶液，使得不同的孔浓度不一，培养一段时间，提取细胞蛋白，对提取本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.CDK在制备和筛选抗肝癌药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.CDK在制备和筛选抗肝癌药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述CDK为CDK2、CDK4或CDK6。3.CDK的抑制剂在制备抗肝癌药物中的应用。4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述CDK的抑制剂为NewTectorigenin。5.一种抗肝癌的药物，其特征在于，所述药物中含有CDK的抑制剂。6.根据权利要求5所述的药物，其特征在于，所述CDK为CDK2、C...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈鲲，马咏诗，黎裕麟，马祥，樊静，张继匀，刘琼玉，徐丹，
申请(专利权)人：广州大学，
类型：发明
国别省市：广东,44