一种烟碱标准物质及制备方法、烟碱溶液标准物质及应用技术

本发明专利技术涉及一种烟碱标准物质及制备方法、烟碱溶液标准物质及应用。该制备方法包括使用商业烟碱原料通过凝胶过滤色谱进行分离的步骤，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH系列或TSKgelAlpha系列。本发明专利技术提供的烟碱标准物质的制备方法，以商业粗烟碱为原料，通过选择具有疏水基团的凝胶过滤色谱填料，可以分离制得纯度＞99.5％的烟碱，经均匀性和稳定性检查，可以作为标准物质使用。该烟碱标准物质的制备方法的稳定性、可靠性好，可重复性强，大大简化了烟碱标准物质的制备方法，降低了烟碱标准物质的制造成本。

Nicotine standard substance and preparation method, nicotine solution standard substance and application thereof

The invention relates to a nicotine standard substance and a preparation method, a nicotine solution standard substance and an application thereof. The preparation method includes a step of separation by gel filtration chromatography using commercial nicotine raw materials, the fillers used in the gel filtration chromatography are the Sephadex LH series or the TSKgel Alpha series. The preparation method of nicotine reference material provided by the invention takes commercial crude nicotine as raw material, and by selecting the gel filtration chromatographic packing with hydrophobic group, the nicotine with purity > 99.5% can be separated and prepared. The nicotine can be used as reference material after homogeneity and stability test. The preparation method of the nicotine reference material is stable, reliable and repeatable, which greatly simplifies the preparation method of the nicotine reference material and reduces the manufacturing cost of the nicotine reference material.

【技术实现步骤摘要】
一种烟碱标准物质及制备方法、烟碱溶液标准物质及应用
本专利技术属于烟碱标准品的制备领域，具体涉及一种烟碱标准物质及制备方法、烟碱溶液标准物质及应用。
技术介绍
烟碱是烟草及烟草制品的致瘾性成分，属于烟碱乙酰胆碱受体的典型受体激动剂。烟碱是烟草及烟草制品、卷烟烟气和电子烟液中需要检测的重要化学成分。烟碱含量的高低是影响烟叶和卷烟质量的一个重要指标，极大地影响卷烟抽吸的劲头。采用连续流动分析法测定烟草及烟草制品中的总植物碱时需要使用烟碱标准物质。由于绝大多数定量分析方法都是基于直接或间接与已知值比较而进行的，因此提供具有已知组成和性质的参考样品(即标准物质)供准确校正对于定量分析来说是非常必要的，这些标准物质在一种或多种性质方面具有高度一致的值。与常规的实验室试剂不同，在同一标准物质样品内部各部分之间以及同批次标准物质的不同样品之间具有高度一致性，从而使得这些标准物质能够用于在分析过程中校准分析仪器以及分析方法等。标准物质通常要求高纯度，其组成与化学式高度一致并且化学稳定。由于对标准物质的这种严格要求，标准物质的制备一般需要在高度受控的条件下制造，以达到这种高纯度，并尽可能避免所含杂质对后续测定的影响。因此，标准物质的制备比常规分析化学试剂往往要复杂得多，如公布号为CN102796076A的专利公开的烟碱标准物质的制备方法，即是通过复杂和高成本的多步骤高精度分离纯化方法而制得，其实际的制造成本极高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种烟碱标准物质的制备方法，从而解决现有制备方法存在的工艺复杂、制造成本高的问题。本专利技术还提供了上述制备方法制得的烟碱标准物质、烟碱溶液标准物质及应用。为实现上述目的，本专利技术所采用的技术方案是：一种烟碱标准物质的制备方法，包括使用商业烟碱原料通过凝胶过滤色谱进行分离的步骤，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH系列或TSKgelAlpha系列。本专利技术提供的烟碱标准物质的制备方法，以商业粗烟碱为原料，通过选择具有疏水基团的凝胶过滤色谱填料，可以分离制得纯度＞99.5％的烟碱，经均匀性和稳定性检查，可以作为标准物质使用。该烟碱标准物质的制备方法的稳定性、可靠性好，可重复性强，大大简化了烟碱标准物质的制备方法，降低了烟碱标准物质的制造成本。所述商业烟碱原料为食品添加剂级，纯度不低于95wt％。有众多厂商可以商业供应这种烟碱，例如湖北和诺生物工程股份有限公司、陕西天则生物技术有限责任公司等。该方法利用了凝胶过滤和反相色谱两方面的分离机理。通过凝胶过滤可以将烟碱与其它分子量差异较大的杂质分离开，同时反相色谱分离过程基于烟碱与杂质分子的极性差异将烟碱与杂质分子分离开。因此，本专利技术利用带有疏水基团的凝胶过滤色谱填料，同时利用至少上述两种分离机理，将烟碱与杂质分子分离开来，从而获得了可用作标准物质的烟碱产品。所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH-20、TSK-GELAlpha-4000中的至少一种。优选的，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH-20。SephadexLH系列填料由GEHealthCare商业供应，TSK-GELAlpha系列填料由TosohBiosciences商业供应。将填料使用甲醇溶胀后装柱，然后用水和甲醇交替清洗即可用于上样分离。商业烟碱原料的纯度仅仅为≥95％，其中还含有多种与烟碱具有相似结构和性质的杂质，采用上述色谱填料对商业烟碱进行分离，可方便获得足以用作标准物质的烟碱产品，从而大大降低烟碱标准物质的制造成本。凝胶过滤色谱的操作可参考现有技术。优选的，以商业烟碱原料和水配制烟碱水溶液，作为凝胶过滤色谱的上样溶液，以水或醇水混合物为洗脱剂。更优选的，所述烟碱水溶液的浓度为0.1-0.5g/mL。所述醇为甲醇、乙醇中的至少一种。进一步优选的，所述醇水混合物中，醇的体积百分比不大于30％。凝胶过滤色谱分离时，控制色谱柱的温度为20-30℃，调节流动相的流速为1-3ml/min。收集流分进行检测，即可得到纯度达到99.5％以上的烟碱流分，再经真空冷冻干燥，即得纯度为99.5％以上的烟碱标准物质。对含有较低纯度烟碱的其他流分，可再次进行凝胶过滤色谱分离，以获得更多的纯度为99.5％以上的烟碱标准物质。采用上述方法制得的烟碱标准物质，纯度大于99.5％，经均匀性检查，表明在置信概率95％水平下不存在显著性差异；经稳定性检查，表明在高温条件下稳定性良好，可以作为标准物质使用。可进一步将上述烟碱标准物质与溶剂混合，制备烟碱溶液标注物质。考虑到不同分析方法和分析仪器中使用不同的溶剂体系，所述烟碱溶液可以根据实际需要制备在各种溶剂中。在烟碱物质的常规检测过程中，所述溶剂可以为水或醇溶剂。所述醇溶剂为甲醇或异丙醇。在上述烟碱标准物质的基础上，可参考现有烟碱标准品的应用情形，将本专利技术的烟碱标准物质作为标准品应用。附图说明图1为实施例1的烟碱产品的液相色谱谱图；图2为实施例1的烟碱产品的气相色谱质谱联用谱图；图3为烟碱的NIST谱图信息；图4为实施例1的烟碱产品的1H-NMR谱图；图5为SDBS数据库中烟碱的1H-NMR谱图；图6为图5的化学位移数据；图7为实施例1的烟碱产品的红外谱图；图8为SDBS数据库中烟碱的红外谱图；图9为实施例1的烟碱产品的紫外谱图。具体实施方式下面结合具体对本专利技术的实施方式作进一步说明。以下实施例中，质谱仪：安捷伦7890-5975C(Agilent，USA)，EI离子源。核磁共振谱仪：Inova-500核磁共振仪，使用TMS为内标。红外色谱仪：布鲁克Tensor27。HPLC：Agilent1260Series高效液相色谱仪，配有四元梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器(DAD)，AgilentChemStation化学工作站。甲醇购于Fisher公司，色谱级；水为去离子水；醋酸铵为分析纯，购自北京化工厂。商业烟碱原料的纯度为95wt％，购自来自陕西天则生物技术有限责任公司。实施例1本实施例的烟碱标准物质，采用以下步骤进行制备：1)将商业烟碱原料10.03g，加入40mL去离子水，配制成浓度为0.25g/mL的烟碱水溶液；称取100gSephadexLH-20凝胶填料，加入300mL色谱级甲醇溶胀15min，待充分溶胀后进行装柱(柱长2米)，并用去离子水和色谱级甲醇交替清洗，重复3次。将烟碱水溶液进行上样，以去离子水作为流动相进行凝胶过滤色谱分离，控制色谱柱的温度为25℃，调节流动相的流速为2mL/min，每个流分接液100mL，所接流分均密封避光保存。2)对所有流分进行HPLC检测，其中检测条件为：色谱柱：ZORBAXEclipseXDB-C18(4.6mm×150mm,5um)；流动相：甲醇:乙醇体积比7:3；流速：1.0mL/min；检测波长：260nm；柱温：30℃；进样量：10μL。第5流分含有纯度达到99.5％以上的烟碱(如图1所示，谱图分析结果如表1所示)，经真空冷冻干燥机进行冷冻干燥，得到纯度为99.5％以上的烟碱标准物质。表1实施例1的烟碱产品的HPLC谱图分析结果保留时间，min峰面积(Area)浓度，％0.08371.590.255821.317618.599.5125本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种烟碱标准物质的制备方法，其特征在于，包括使用商业烟碱原料通过凝胶过滤色谱进行分离的步骤，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH系列或TSKgelAlpha系列。

【技术特征摘要】
1.一种烟碱标准物质的制备方法，其特征在于，包括使用商业烟碱原料通过凝胶过滤色谱进行分离的步骤，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH系列或TSKgelAlpha系列。2.如权利要求1所述的烟碱标准物质的制备方法，其特征在于，所述商业烟碱原料的纯度不低于95wt％。3.如权利要求1所述的烟碱标准物质的制备方法，其特征在于，所述凝胶过滤色谱所使用的填料为SephadexLH-20、TSK-GELAlpha-4000中的至少一种。4.如权利要求1所述的烟碱标准物质的制备方法，其特征在于，以商业烟碱原料和水配制烟碱水溶...

【专利技术属性】
技术研发人员：张洪非，庞永强，罗彦波，姜兴益，朱风鹏，李翔宇，侯宏卫，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：河南,41