【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种烟草制品潜在强化效应的比较方法，属于烟草制品烟气检测。
技术介绍
1、烟碱被认为是导致烟草制品使用的主要物质。以往研究表明维持奖赏脑区多巴胺浓度水平在烟碱强化中起关键作用，多巴胺的含量由多巴胺的释放和代谢共同决定。烟碱通过作用于中脑边缘多巴胺奖赏通路来促进多巴胺释放，单胺氧化酶(mao)通过代谢多巴胺使其浓度降低。mao抑制剂已被证明能够增强烟碱自给药，烟草及卷烟烟气中存在潜在mao抑制成分，mao抑制作用可能会直接影响烟碱的强化效应。
2、但单独的烟碱在啮齿动物中的奖赏较弱，烟草或烟雾中的其他物质可能与烟草依赖的建立和维持相关。而烟气成分较为复杂，典型的卷烟烟气被证明含有超过5000种化学成分，对mao起到抑制作用的成分难以一一辨别，进行定量。因此，在比较不同卷烟潜在强化效应时，难以通过对烟气化学成分的一一辨别分析实现。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种烟草制品潜在强化效应的比较方法，无需对烟气化学成分的一一辨别分析即可实现对不同烟草制品潜在强化效应进行比较。
2、为了实现以上目的，本专利技术所采用的技术方案是：
3、一种烟草制品潜在强化效应的比较方法，包括以下步骤：
4、1)将待比较的两种烟草制品分别通过吸烟机抽吸并抽吸的过程中采用滤片捕集烟气中的粒相物，然后将滤片捕集的粒相物转移至二甲基亚砜溶液中，得到粒相物溶液；每种烟草制品采用吸烟机抽吸时设置3个以上的平行样；所述烟草制品为卷烟或加热不燃烧卷烟；
5、2)将两种烟草制品对应的粒相物溶液采用二甲基亚砜溶液分别稀释出相同的梯度烟碱浓度溶液，各粒相物溶液稀释出的梯度溶液中烟碱的浓度为10-5～1mmol/l；
6、3)将等体积的两种烟草制品的各梯度溶液、生理盐水分别与等量的单胺氧化酶底物和等量的单胺氧化酶采用同等条件混合反应，反应完成后，在各反应体系中分别加入等量荧光素检测物在相同条件孵育后测定发光信号强度；
7、4)计算两种烟草制品各梯度溶液与生理盐水的发光信号强度的比值，将比值作为对应梯度溶液的单胺氧化酶活性，然后判断用于比较的两种烟草制品是否存在至少连续两个同烟碱浓度梯度溶液的单胺氧化酶活性具有显著性差异；若是，则判定为两种烟草制品潜在强化效应具有差异；否则，则认为两种烟草制品的潜在强化效应处于同一水平。
8、本专利技术的烟草制品潜在强化效应的比较方法跳开化学成分检测，直接捕集烟气气溶胶中的粒相物，通过体外试验对单胺氧化酶的抑制效果进行测试，通过对不同烟草制品的烟气对单胺氧化酶活性进行横向对比，根据比较差异性是否显著从单胺氧化酶抑制层面判断烟草制品潜在强化效应的差异。本专利技术的比较方法无需对烟气成分进行繁复的化学分析，工艺简单，易于实现，对于烟草与健康研究领域具有重要的研究意义。
9、可以理解的是，所述单胺氧化酶底物能够在单胺氧化酶的作用下转化为荧光素；转化成的荧光素能够与荧光素检测物发生化学发光反应。所述单胺氧化酶底物、单胺氧化酶、荧光素检测物以溶液形式加入时，各梯度溶液、生理盐水中加入的单胺氧化酶底物溶液体积相同、单胺氧化酶溶液的体积相同、荧光素检测物溶液的体积相同。例如，所述单胺氧化酶底物为甲虫荧光素的衍生物。所述的荧光素检测物包括荧光素酶。所述单胺氧化酶为(单胺氧化酶a)mao-a。进一步地，所述的单胺氧化酶底物、单胺氧化酶和荧光素检测物均由市售的单胺氧化酶检测试剂盒提供。例如所述市售的单胺氧化酶检测试剂盒为mao-glotm检测试剂盒产品。
10、可以理解的是，为了能够真实地反应各梯度溶液的单胺氧化酶活性，单胺氧化酶底物、单胺氧化酶以及荧光素检测物的应当是适量的，不能过多或过少。例如，每12.5μl梯度溶液中加入12.5μl的浓度4mmol/l单胺氧化酶底物溶液，25μl的浓度3mg蛋白质/ml的单胺氧化酶溶液。对于mao-glotm检测试剂盒，每12.5μl梯度溶液中加入50μl将检测试剂盒中全部的萤光素检测试剂和全部的萤光素检测缓冲液混合的溶液。
11、进一步地，将滤片捕集的粒相物转移至二甲基亚砜溶液中，是通过采用二甲基亚砜溶液对滤片上的粒相物进行震荡萃取转移到二甲基亚砜溶液中。所述滤片为剑桥滤片。
12、进一步地，各粒相物溶液稀释出的梯度溶液中的烟碱的浓度依次为10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mmol/l。
13、进行一步地，采用气相色谱法测定粒相物溶液中烟碱浓度。所述气相色谱法中气相色谱仪采用fid检测器，色谱柱采用hp-5或其等效柱。
14、进一步地，所述二甲基亚砜溶液的质量浓度为8～12％，例如为10％。本专利技术中的二甲基亚砜溶液以水作为溶剂。
15、进一步地，吸烟机抽吸时采用的是hci抽吸模式。
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1.一种烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：各粒相物溶液稀释出的梯度溶液中的烟碱的浓度依次为10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mmol/L。
3.根据权利要求1所述的烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：所述二甲基亚砜溶液的质量浓度为8～12％。
4.根据权利要求1所述的烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：吸烟机抽吸时采用的是HCI抽吸模式。
【技术特征摘要】
1.一种烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：包括以下步骤：
2.根据权利要求1所述的烟草制品潜在强化效应的比较方法，其特征在于：各粒相物溶液稀释出的梯度溶液中的烟碱的浓度依次为10-5、10-4、10-3、10-2、10-1、1mm...
【专利技术属性】
技术研发人员：李翔宇，姜兴益，庞永强，罗彦波，张洪非，朱风鹏，夏友明，张晨龙，
申请(专利权)人：国家烟草质量监督检验中心，
类型：发明
国别省市：
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