一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，包括以下步骤：(1)甘薯品种基因组DNA提取；(2)PCR扩增；扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物，则视为抗病品种。本发明专利技术利用分子标记技术进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可加快甘薯抗蔓割病育种的进程，提高甘薯抗蔓割病育种效率。与现有技术相比，本发明专利技术用于鉴定甘薯品种蔓割病抗性的周期短、效率高、可靠性更强。

A rapid molecular identification method for resistance of sweet potato varieties to Fusarium wilt disease

The invention belongs to the field of biotechnology and relates to a rapid molecular identification method for resistance of sweet potato varieties to vine cutting disease, which comprises the following steps: (1) genomic DNA extraction of sweet potato varieties; (2) PCR amplification; amplification products are separated by agarose electrophoresis; if 200 bp products can be amplified specifically according to the size of the amplified products, the method can be used to determine the specificity of the amplified products. It is considered a disease resistant variety. The invention uses molecular marker technology to screen sweet potato materials resistant to vine cutting disease, can accelerate the breeding process of Sweet Potato Resistance to vine cutting disease, and improve the breeding efficiency of Sweet Potato Resistance to vine cutting disease. Compared with the prior art, the invention has the advantages of short period, high efficiency and stronger reliability for identifying the resistance of sweet potato varieties to vine cutting disease.

【技术实现步骤摘要】
一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法
本专利技术属于生物
，尤其涉及一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法。
技术介绍
甘薯(Ipomoeabatatas(L.)Lam,2n＝6X＝90)是重要的粮食、饲料和工业原料用作物。我国是甘薯种植大国，年均种植面积为367万hm2左右，年均产量约占全球总产量的75.3％。甘薯蔓割病又称镰刀菌枯萎病(Fusariumwilt)，在世界大多数甘薯产区发生流行。该病是中国南方薯区发生广、危害重的真菌性维管束枯萎病，主要分布在浙江、福建、广东、广西、台湾和海南等省(自治区)，一般减产10％～20％，重者达50％以上。受该病影响，甘薯的植株根、主蔓、支蔓、叶柄等不同部位均可见纵裂症状，但多发生在近土壤的拐头部分，拐头发病危害最大，发病愈早受害愈重，种植感病品种是引起该病流行的重要条件。解决甘薯生产上蔓割病发生最根本、经济有效的方法就是推广抗蔓割病甘薯品种，可有效减轻此病的发病面积和危害程度。目前的甘薯常规抗蔓割病育种在获得F1代种子及其实生苗之后需要进行甘薯抗病性鉴定，传统的抗病鉴定方法所需环节繁琐，包括实生苗播种、扩繁、剪苗、接种、栽种、调查等环节，周期长(从播种出苗到鉴定完毕大概要100天左右)、结果可靠性差，另外甘薯是高度杂合的同源六倍体植物，遗传背景复杂，亲本的选择和组配有一定盲目性。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，在于提供一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，利用分子标记技术进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可加快甘薯抗蔓割病育种的进程，提高甘薯抗蔓割病育种效率。本专利技术是这样实现的：一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，包括以下步骤：(1)甘薯品种基因组DNA提取；(2)利用以下特异引物进行PCR扩增：上游引物：CTGCGTACGAATTACATCCTCAAAACTTTTAGATA下游引物：GAGTCCAAACCGGATTAACTCAATCGAAATGGACG；(4)扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物，则视为抗病品种。进一步地，步骤(2)所述PCR扩增的反应体系总体积为20μL，其中上、下游引物各1μL，模板DNA1.5μL、TaqPCRMasterMix10μL、ddH2O6.5μL；反应程序为：94℃5min，94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，55℃1min，72℃10min，35个循环。本专利技术具有如下优点：1、提高效率：与现有技术相比，本专利技术用于鉴定甘薯品种蔓割病抗性的周期短、效率高，相比原有的传统接种鉴定，时间节省90天左右(传统的鉴定技术自种子播种出苗算起时间大概在100天左右)；利用分子标记技术在甘薯育种的早期通过分子标记技术对F1代实生苗进行抗蔓割病甘薯材料的筛选，可有效提高甘薯抗蔓割病育种效率，缩短甘薯抗蔓割病育种的进程。2、提高可靠性：由于本专利技术的分子鉴定方法是通过甘薯基因组DNA经特异引物扩增目的片段来实现的，所以得出的结论可靠性更强，远胜于传统鉴定方法。附图说明下面参照附图结合实施例对本专利技术作进一步的说明。图1为对14个抗病品种进行扩增的电泳图。图2为对16个感病品种进行扩增的电泳图。具体实施方式实施例1(1)材料来源：14个抗病品种、16个感病品种(30个品种均来自新种花×金山57组合杂交获得的F1代，经过抗性鉴定，得到品系编号为福薯1001—福薯1014的12个高抗品种、2个抗病品种，品系编号为福薯2001—福薯2016的12个高感品种，4个感病品种)；(2)基因组DNA提取；(3)抗蔓割病分子鉴定：特异引物扩增，目标片段的获得(目的片段大小在200bp左右)，扩增出此片段者视为抗病品种，扩增不出此片段则视为感病品种。引物序列如下：上游引物：CTGCGTACGAATTACATCCTCAAAACTTTTAGATA下游引物：GAGTCCAAACCGGATTAACTCAATCGAAATGGACG扩增的条件如下：反应体系：总体积为20μL，其中上、下游引物各1μL，模板DNA1.5μL、MIX(酶)10μL、ddH2O6.5μL。反应程序为：94℃5min，94℃1min，35℃1min，72℃1min，5个循环；94℃1min，55℃1min，72℃10min，35个循环，4℃保存。(4)结果：如图1所示，用设计的引物对14个抗病品种进行扩增，均扩增出目的片段；如图2所示，用设计的引物对16个感病品种进行扩增，均未扩增出目的片段。说明本专利技术设计的引物具有很强的特异性。因此该方法可被用于生产实践中甘薯品种蔓割病抗性的快速可靠的鉴定。注：步骤(2)DNA提取参照以下方法：李强,揭琴,刘庆昌,等.甘薯基因组DNA高效快速提取方法[J].分子植物育种,2007,5(5):743-746。虽然以上描述了本专利技术的具体实施方式，但是熟悉本
的技术人员应当理解，我们所描述的具体的实施例只是说明性的，而不是用于对本专利技术的范围的限定，熟悉本领域的技术人员在依照本专利技术的精神所作的等效的修饰以及变化，都应当涵盖在本专利技术的权利要求所保护的范围内。序列表<110>福建省农业科学院作物研究所<120>一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法<160>2<170>SIPOSequenceListing1.0<210>1<211>35<212>DNA<213>(人工序列)<400>1ctgcgtacgaattacatcctcaaaacttttagata35<210>2<211>35<212>DNA<213>(人工序列)<400>2gagtccaaaccggattaactcaatcgaaatggacg35本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)甘薯品种基因组DNA提取；(2)利用以下特异引物进行PCR扩增：上游引物：CTGCGTACGAATTACATCCTCAAAACTTTTAGATA下游引物：GAGTCCAAACCGGATTAACTCAATCGAAATGGACG；(3)扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物，则视为抗病品种。

【技术特征摘要】
1.一种甘薯品种蔓割病抗性快速分子鉴定方法，其特征在于：包括以下步骤：(1)甘薯品种基因组DNA提取；(2)利用以下特异引物进行PCR扩增：上游引物：CTGCGTACGAATTACATCCTCAAAACTTTTAGATA下游引物：GAGTCCAAACCGGATTAACTCAATCGAAATGGACG；(3)扩增产物用琼脂糖电泳分离，根据扩增产物的大小判定结果，如果能特异性地扩增出200bp的产物...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘中华，邱思鑫，邱永祥，李华伟，许泳清，张鸿，李国良，林赵淼，林志坚，
申请(专利权)人：福建省农业科学院作物研究所，
类型：发明
国别省市：福建,35