一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法技术

本申请公开一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，包括：步骤一：样本采集：采血管一采集5.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并及时将采血管放置冰箱中；采血管二采集10.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并常温保存；步骤二：预冷低速离心机，放入采血管二，离心分钟，吸取上清血浆，转移至置于冰盒上的EP管中，标记相应的样品编号；步骤三：预冷高速离心机至温度稳定后，放入EP管并离心，枪头对着非白细胞沉淀处，在冰盒上吸取上清血浆，分装至置于冰盒上的EP管中，转入血浆，标记样品编号和血浆管数，放入冰箱中保存；步骤四：对步骤三中保存的样品进行质控和处理；标准明确，实践操作效果好，高效严谨。

Sampling and quality control of DNA in fetal chromosomal aneuploidy detection

The application discloses a method for DNA sampling and quality control in fetal chromosomal aneuploidy detection. The method comprises the following steps: sampling: collecting the peripheral blood of pregnant women with 5.0 mL, gently reversing the collection of blood vessels and putting the collection of blood vessels in the refrigerator in time; collecting the peripheral blood of pregnant women with 10.0 mL by collecting blood vessels, and collecting the peripheral blood of pregnant women with 5.0 mL. After that, the blood vessel was collected gently and stored at room temperature; Step 2: Pre-cooled low-speed centrifuge, put into the blood vessel, centrifuge for two minutes, take the supernatant plasma, transfer to the EP tube placed on the ice box, mark the corresponding sample number; Step 3: Pre-cooled high-speed centrifuge to temperature stability, put EP tube and centrifuge, the gun head against. In the non-white blood cell precipitation place, the supernatant plasma is taken from the ice box and packed into the EP tube placed on the ice box, then transferred into the plasma, labeled the sample number and the number of blood vessels, and stored in the refrigerator; Step 4: Quality control and treatment of the sample stored in step 3; Clear standards, good practical operation effect, efficient and rigorous.

【技术实现步骤摘要】
一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法
本专利技术属于无创产前筛查检测领域，具体是指一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法。
技术介绍
生命体遗传信息的快速获得对于生命科学的研究有着十分重要的意义。第一代测序仪对电泳分离技术的依赖，使其难以进一步提高分析的速度和并行化程度，也难以通过微型化降低测序成本。经过不断的技术开发和改进，21世纪初，以Roche454技术、illumina公司的GenomeAnalyzer技术和ABI公司的Solid技术为标记的第二代测序技术诞生了。第二代技术大大降低了测序成本，还大幅度提高了测序速度并保持了高准确性。其中，illumina公司的第一台测序仪于2006年问世，之后开发出来一系列的测序仪，如Hiseq2000、Hiseq2500、Miseq、HiseqX等，在准确性、通量、成本和速度方面表现更优秀，而使其成为全球使用量最大的第二代测序仪。在第二代测序平台不断完善的同时，以对单分子DNA进行非PCR测序为主要特征的第三代测序技术也初显端倪。但由于其关键技术问题尚待解决，目前还未得到广泛应用。唐氏综合征，又称21-三体综合征或者先天愚型，是由新生儿染色体异常所引起的先天性疾病。唐氏综合征的发病概率大约在1/800～1/600，在小儿三体型染色体疾病中占的比重最高，约为70％～80％，而且该病的发病率会随着产妇生育年龄的增高而上升。产前诊断筛查对于筛查唐氏综合症是很重要而且很有实用性的一部分，大家所熟知的产前诊断筛查方法主要是传统的一些筛查方法，如羊膜腔穿刺抽取羊水、绒毛膜取样以及穿刺抽取脐带血等方法。这些方法带有一定的创伤性，对孕妇和胎儿也会造成一定的危险，严重者甚至可能会带来流产的风险。而且，穿刺抽取羊水要在孕妇孕周达到16周以后才能进行，因为孕周16周后胎儿才能达到一定的成熟度，易于检测。如果此时诊断结果显示胎儿染色体异常，则已经错过了最佳的流产时期，可能需要通过引产来解决，这大大增加了孕妇的痛苦且增加了并发症发生的可能。上世纪九十年代，有研究报道了孕妇的血液循环中有胎儿游离DNA(cff-DNA)的存在，后来有研究也报道发现孕妇血浆中存在胎儿核糖核酸(RNA)，这些重大的临床研究发现为无创性产前筛查胎儿染色体异常提供了新的可能性。近年来无创性产前筛查诊断取得了巨大的突破和进展，胎儿游离细胞已经成功地应用于非侵入性产前诊断胎儿性别和Rh血型鉴定，这些重大的研究和成果都是建立在对母体血浆中cff-DNA序列测定的基础上实现的。但是在孕妇血浆中，母源性游离DNA含量占整个游离DNA的绝大部分，cff-DNA只占孕妇血浆中游离DNA总量的3％～5％，所以传统的DNA提取技术及PCR等方法难以对胎儿唐氏综合征进行准确的判断。因此，高效、准确的检测判断胎儿染色体是否为非整倍体就显得极为重要，同时也成为了无创产前筛查技术的关键。按照目前现有的样本采集流方法，样本采集过程不标准，样品保存和质控不合格、容易导致样本失效、采样量不够、血浆分离不彻底等问题，影响后续的检测和后续环节的成功率。因此，如何研发一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，能够解决上述问题，便成为亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本申请解决的主要问题是提供一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，操作简单、流程科学，标准明确，实践操作效果好，样品合格率更高、保存和质控更合理明晰。以解决一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法成本高、流程不科学，标准不明确，实践操作效果不佳、操作难度高、难以复制操作、样本采集过程不标准，样品保存和质控不合格、容易导致样本失效、采样量不够、血浆分离不彻底等问题，影响后续的检测和后续环节的成功率的技术问题。为了解决上述技术问题，本专利技术公开了一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其技术方案如下：一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其特征在于，包括：本申请提供的胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法操作简单便利并且灵活，流程科学，标准明确，实践操作效果好。为后续操作提供了合格的样本，高效严谨。具体实施方式如在说明书及权利要求当中使用了某些词汇来指称特定组件。本领域技术人员应可理解，硬件制造商可能会用不同名词来称呼同一个组件。本说明书及权利要求并不以名称的差异来作为区分组件的方式，而是以组件在功能上的差异来作为区分的准则。说明书后续描述为实施本申请的较佳实施方式，然所述描述乃以说明本申请的一般原则为目的，并非用以限定本申请的范围。本申请的保护范围当视所附权利要求所界定者为准。实施例一：一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其特征在于，包括：步骤一：样本采集：采血管一采集5.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管4次并及时将采血管放置4.0℃冰箱中，须在8小时内进行血浆分离；采血管二采集10.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管10次并常温保存，须在72小时内进行血浆分离；步骤二：预冷低速离心机至4.0℃，待温度稳定后，放入采血管二，1，600g离离心15分钟，吸取上清血浆，转移至置于冰盒上的2.0mLEP管中，标记相应的样品编号；步骤三：预冷高速离心机至4.0℃，待温度稳定后，放入上步所得2.0mLEP管，16，000g离心10分钟，枪头对着非白细胞沉淀处，在冰盒上吸取上清血浆，分装至置于冰盒上的1.5mLEP管中，每管转入400uL血浆，标记样品编号和血浆管数，立即放入-20.0℃C或-80.0℃冰箱中保存；步骤四：对所述步骤三中保存的样品进行质控和处理。所述样本类型为12～24周孕妇外周血或血浆，样本采集孕妇外周静脉全血，提取血浆。所述采血管一为紫盖EDTA抗凝管，所述采血管二为EDTA抗凝，VangenesCell-FreeDNA采血管。全血样本EDTA抗凝管的外周血在生物冰袋或4.0℃条件下运输保存送检，须在8小时内送达样本接收处交与实验人员进行血浆分离；所述采血管二即VangenesCell-FreeDNA采血管的外周血常温(18.0～25.0℃)运输，72小时内完成送检且完成血浆分离。血浆样本应在干冰条件下运输，并确保样本送达时有足够量的干冰剩余，到达后及时存放于-80.0℃冰箱中。所述血浆样本在-20.0℃存放不能超过7天，长期保存需转至80.0℃保存。保存时间不少于3年，冻融次数不超过3次。所述质控和处理具体包括对下述情况下的样品进行拒收：a、标本采集流程问题；b、样本采集人群有以下情况：①染色体异常胎儿分烧史，夫妇一方有明确染色体异常的孕妇；②孕妇1年内接受过异体输血、移植手术、细胞治疗或接受过免疫治疗等对高通量基因测序产前筛查与诊断结果将造成干扰的；③胎儿影像学检查怀疑胎儿有微缺失微重复综合征或其他染色体异常可能的；④各种基因病的高风险人群。所述采血管一样本拒收类型：①全血离体超过8小时；②未在4℃冰袋条件下保存或运输；③使用肝素抗凝管；④样本严重溶血。所述采血管二样本拒收类型：①全血离体超过72小时方进行血浆分离；②样本严重溶血；③样本采集后在4℃条件下放置；④低于8℃或高于30℃环境下常温运输。所述血浆样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其特征在于，包括：步骤一：样本采集：采血管一采集5.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并及时将采血管放置冰箱中；采血管二采集10.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并常温保存；步骤二：预冷低速离心机至温度稳定后，放入采血管二，离心分钟，吸取上清血浆，转移至置于冰盒上的2.0mLEP管中，标记相应的样品编号；步骤三：预冷高速离心机至温度稳定后，放入上步所得2.0mLEP管并离心，枪头对着非白细胞沉淀处，在冰盒上吸取上清血浆，分装至置于冰盒上的1.5mLEP管中，每管转入400uL血浆，标记样品编号和血浆管数，立即放入冰箱中保存；步骤四：对所述步骤三中保存的样品进行质控和处理。

【技术特征摘要】
1.一种胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其特征在于，包括：步骤一：样本采集：采血管一采集5.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并及时将采血管放置冰箱中；采血管二采集10.0mL孕妇外周血，采集完毕后，轻柔颠倒采血管并常温保存；步骤二：预冷低速离心机至温度稳定后，放入采血管二，离心分钟，吸取上清血浆，转移至置于冰盒上的2.0mLEP管中，标记相应的样品编号；步骤三：预冷高速离心机至温度稳定后，放入上步所得2.0mLEP管并离心，枪头对着非白细胞沉淀处，在冰盒上吸取上清血浆，分装至置于冰盒上的1.5mLEP管中，每管转入400uL血浆，标记样品编号和血浆管数，立即放入冰箱中保存；步骤四：对所述步骤三中保存的样品进行质控和处理。2.根据权利要求1所述的胎儿染色体非整倍体检测中DNA的样本采集及质控方法，其特征在于，所述步骤四具体包括对下述情况下的样品进行拒收：a、标本采集流程问题；b、样本采集人群有以下情况：①染色体异常胎儿分烧史，夫妇一方有明确染色体异常的孕妇；②孕妇1年内接受过异体输血、移植手术、细胞治疗或接受...

【专利技术属性】
技术研发人员：龚强，刘岱璿，
申请(专利权)人：长沙金域医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43