一种从云南蓍中分离纯化墙草碱的方法技术

本发明专利技术涉及一种从云南蓍中分离纯化墙草碱的方法，包括以下步骤：步骤S1、云南蓍药材粉碎成粗粉，加入95％乙醇，回流提取3次，每次2h；步骤S2、将步骤S1提取的粗提浸膏与硅胶拌样，上硅胶柱，进行硅胶柱层析，采用石油醚‑乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脱，收集洗脱液，每个梯度合并成1个部分；步骤S3、将石油醚‑乙酸乙酯[5：1]部分的洗脱液回收溶剂至干，得到富含墙草碱的粗品；步骤S4、将步骤S3墙草碱的粗品用适量石油醚‑乙酸乙酯(1:1)溶解后，静置24h；步骤S5、将步骤S4析出的晶体用乙酸乙酯溶解、静置、重结晶后得到墙草碱的纯品。该方法操作简单，提取收率高，提取制备成本低，具有较高的社会效益和经济效益。

【技术实现步骤摘要】
一种从云南蓍中分离纯化墙草碱的方法
本专利技术属于药用植物活性成分的提取
，具体涉及一种从云南蓍中分离纯化墙草碱的方法。
技术介绍
云南蓍AchilleawilsonianaHeimerlexHand.-Mazz为菊科蓍属植物，收载于《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版中，在贵州做蓍草使用，是苗药复方透骨香乳膏的组方药材。云南蓍地理分布较广，产量较大，产于云南、四川、贵州、湖南西北部、湖北西部、河南西北部、山西南部、陕西中南部、甘肃东部等均有广泛分布，产量较大，生于山坡草地或灌丛中。全草或地上部分均可药用，具有祛风止痛、活血解毒的功效，用于头风痛、牙痛；风湿痹痛，血瘀经闭，腹部痞块，跌扑损伤，蛇虫咬伤，痈肿疮毒。墙草碱为神经酰胺类天然产物，具有抗炎、解热、镇痛、抗菌、血管保护等作用，在菊科蓍属和胡椒科胡椒属等数种植物中有分布，但大多数植物中含量不高，一般低于千分之一，且分离制备困难，提取率不高，分离制备需采用多次柱层析并结合制备液相色谱方可得到较纯化合物。例如中国专利CN104434889A公开了“以墙草碱作为有效成分含有的接触性皮炎改善用组合物”，所用的墙草碱是从海风藤提取物中分离得到，具体分离纯化方法为：将干燥的海风藤(10.2kg)粉碎后利用80％丙酮在室温条件下萃取3次过滤后，将其萃取液减压浓缩获得提取物340g；再将其萃取液减压浓缩后利用70％甲醇-己烷(MeOH-Hexane)，70％甲醇-氯仿(MeOH-Chloroform)进行溶剂分馏，共分馏为3层(己烷层，氯仿层，70％甲醇层)；其中，对己烷层采用硅胶(Silicagel)柱层析法，溶剂按照己烷-乙酸乙酯＝1:0～0:1提高浓度，实施TLC后分馏为17层，其中，对Fr.9层实施DaiSogelODS-B和中压液相色谱(MPLC)(60％MeOH→100％MeOH,梯度系统)柱层析法，再将其分馏为6层(Fr.9-1～9-6)，其中，对Fr.9-3层采用硅胶柱层析法，溶剂以己烷:CHCl3:MeOH＝10:6:0.2使用，从而获得墙草碱(100mg)，该提取方法收率不足十万分之一，而且操作过程繁琐。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从云南蓍中分离纯化墙草碱的方法，以解决现有的墙草碱分离提取操作过程繁琐，提取收率低，无法规模化生产的技术难题。本专利技术通过研究发现云南蓍中墙草碱的含量较高，并且云南蓍药材分布广，因此尝试从云南蓍中提取分离墙草碱，本专利技术通过对有机溶剂合理的选择和使用，最后成功的将墙草碱提取分离出来。为实现上述目的，本专利技术具体是采用如下技术方案实现的：一种从云南蓍中提取分离墙草碱的方法，具体包括以下步骤：步骤S1、云南蓍药材粉碎成粗粉，加入其重量8-10倍量的体积百分比为95％的乙醇，回流提取2-3次，每次2-3h，合并提取液，浓缩，得粗提浸膏；步骤S2、将步骤S1得到的粗提浸膏与重量为粗体浸膏1.5-2倍的100～200目硅胶拌样后，上粗提浸膏10倍量，200～300目硅胶柱，进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脱，收集洗脱液，每个梯度合并成1个部分；步骤S3、将步骤S2得到的石油醚-乙酸乙酯[5：1]部分的洗脱液回收溶剂至干，得到富含墙草碱的粗品；步骤S4、将步骤S3析出的墙草碱的粗品用适量石油醚-乙酸乙酯＝1:1溶解后，静置至少24h，待析出较多晶体后，倾出上层液体；步骤S5、将步骤S4析出的晶体用乙酸乙酯溶解、静置、重结晶后得到墙草碱的纯品，纯度大于98％。本专利技术的优点和有益效果为：(1)本专利技术提供的从云南蓍药材中提取分离墙草碱的方法简单，提取收率较高，产率可达千分之一，提取制备成本低，适合工业化生产制备，具有很高的社会价值和经济价值。(2)本专利技术提取分离墙草碱时所采用的提取溶剂为石油醚、乙酸乙酯、甲醇和水，毒性小，工艺简便可行，适用于工业化大生产，且所用溶剂易回收、可反复使用，对环境污染较小，所得最终产物经减压回收后基本不含有机溶剂残留，所得的墙草碱纯品为下一步药物的研发和应用奠定了基础。(3)本专利技术制备的墙草碱纯度高(大于98％)，可作为蓍属或胡椒属药材的质量控制指标性成分，采用本专利技术的墙草碱作为蓍草含量测定用的标准物质时，有效解决由于菊科属植物大部分都含有绿原酸成分，导致现有蓍草药材含量项下选择绿原酸为测定成分专属性不强的技术问题。附图说明图1是本专利技术墙草碱的氢谱图。图2是本专利技术墙草碱的碳谱图。具体实施方式以下结合附图和具体实施方式对本专利技术作进一步的阐述，以便本领域的技术人员更了解本专利技术，但并不以此限制本专利技术。仪器与试药仪器：BUKERAV500Mz核磁共振谱仪，沃特世SYNNAPTQ-TOF质谱；薄层和柱色谱用硅胶均为青岛海洋化工厂出品；色谱用试剂均为上海沪试化工厂生产，AR级。试药与试剂：云南蓍药材(产地：贵州黔南州)；甲醇、乙酸乙酯、石油醚为分析纯；水为超纯水。实施例1一种从云南蓍中提取分离墙草碱的方法，具体包括以下步骤：步骤S1、云南蓍药材10kg粉碎成粗粉，加入其重量10倍量的95％(v/v)乙醇，回流提取3次，每次2h，提取液合并，浓缩，得粗提浸膏约800g；步骤S2、将步骤S1得到的粗提浸膏与重量为粗体浸膏1.5-2倍的100～200目硅胶拌样后，上粗提浸膏10倍量，200～300目硅胶柱(柱内径为20cm)，进行硅胶柱层析，采用石油醚-乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脱，每个梯度洗脱80L，收集洗脱液，每个梯度合并成1个部分；步骤S3、将步骤S2得到的石油醚-乙酸乙酯[5：1]部分的洗脱液回收溶剂至干，得到富含墙草碱的粗品45g，含量在80％左右；步骤S4、将步骤S3析出的墙草碱的粗品用石油醚-乙酸乙酯(1:1)约300ml溶解后，静置24h，待析出较多晶体后，倾出上层液体；步骤S5、将步骤S4析出的晶体用尽量少的乙酸乙酯(约100ml)溶解、静置、重结晶后得到墙草碱的纯品12g，纯度大于98％。墙草碱的结构鉴定：白色晶体(石油醚–丙酮)，ESI-MSm/z224[M+H]+。1H-NMR(CDC13,500MHz)δ:7.20(1H,dd,J＝10.0,15.0Hz,H-3)，6.10(1H,m,H-4)，6.07(1H,m,H-5)，5.75(1H,d,J＝15.0Hz,H-2)，3.16(2H,t,J＝6.5Hz,H-1′)，2.14(2H,q,J＝7.0Hz,H-6)，1.80(1H,m,H-2′)，1.41(2H,m,H-7)，1.30(6H,m,H-7,8,9)，0.92(6H,d,J＝6.5Hz,H-3′,4′)，0.88(3H,t,J＝7.0Hz,H-10)；13C-NMR(CDC13,125MHz)δ:166.6(C-1)，121.9(C-2)，143.4(C-3)，128.4(C-4)，141.5(C-5)，33.1(C-6)，31.5(C-7)，28.8(C-8)，22.6(C-9)，14.1(C-10)，47.1(C-1′)，28.8(C-2′)，20.3(C-3′,4′)。以上数据与文献[许剑侠，丁丽琴，姜苗苗，邱峰.黄芩非黄酮类成分研究[J].中国药物化学杂志，2016,26(6)：480-489.对照，鉴本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从云南蓍药材中提取分离墙草碱的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤S1、云南蓍药材粉碎成粗粉，加入其重量8‑10倍量的体积百分比为95％的乙醇，回流提取2‑3次，每次2‑3h，合并提取液，浓缩，得粗提浸膏；步骤S2、将步骤S1得到的粗提浸膏与重量为粗体浸膏1.5‑2倍的100～200目硅胶拌样后，上粗提浸膏10倍量，200～300目硅胶柱，进行硅胶柱层析，采用石油醚‑乙酸乙酯[1：0→5：1→3：1]梯度洗脱，收集洗脱液，每个梯度合并成1个部分；步骤S3、将步骤S2得到的石油醚‑乙酸乙酯[5：1]部分的洗脱液回收溶剂至干，得到富含墙草碱的粗品；步骤S4、将步骤S3析出的墙草碱的粗品用石油醚‑乙酸乙酯＝1:1溶解后，静置至少24h，待析出较多晶体后，倾出上层液体；步骤S5、将步骤S4析出的晶体用乙酸乙酯溶解、静置、重结晶后得到墙草碱的纯品。

【技术特征摘要】
1.一种从云南蓍药材中提取分离墙草碱的方法，其特征在于，具体包括以下步骤：步骤S1、云南蓍药材粉碎成粗粉，加入其重量8-10倍量的体积百分比为95％的乙醇，回流提取2-3次，每次2-3h，合并提取液，浓缩，得粗提浸膏；步骤S2、将步骤S1得到的粗提浸膏与重量为粗体浸膏1.5-2倍的100～200目硅胶拌样后，上粗提浸膏10倍量，200～300目硅胶柱，进行硅胶柱层析，采用石油醚...

【专利技术属性】
技术研发人员：孙艳涛，赵磊，李晓甜，王路宏，高秀红，张进，李文君，
申请(专利权)人：吉林师范大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22