山茱萸提取莫诺苷、马钱苷和熊果酸的方法技术

本发明专利技术涉及一种山茱萸提取熊果酸、马钱苷和莫诺苷的方法，将山茱萸果实干燥粉碎，醇提，过滤，真空或减压浓缩，过滤得滤液，滤渣经枯草芽孢杆菌发酵，醇提，过滤得合并滤液，上AB‑8大孔树脂柱，得莫诺苷纯品；将滤渣和滤渣甲醇溶解，上硅胶柱分别获得熊果酸、马钱苷，结晶重结晶一次得纯品。

Extraction of Monod glycosides, loganin and ursolic acid from Cornus officinalis

The invention relates to a method for extracting ursolic acid, loganin and monoside from Cornus officinalis. The fruits of Cornus officinalis are dried and crushed, ethanol extracted, filtered, vacuum or vacuum concentrated, filtered to obtain filtrate. The filtrate residue is fermented by Bacillus subtilis, ethanol extracted and filtered to obtain combined filtrate, and then the monoside is purified by AB_8 macroporous resin column. The residue and filter residue were dissolved in methanol, and ursolic acid and brucine were obtained on silica gel column.

【技术实现步骤摘要】
山茱萸提取莫诺苷、马钱苷和熊果酸的方法
本专利技术属于天然产物提取
，涉及一种山茱萸提取熊果酸、马钱苷和莫诺苷的方法。
技术介绍
山茱萸的成熟干燥果实，去核后即为名贵药材山芋肉。果肉内含有16种氨基酸，另外，含有大量人体所必需的元素。另外，含有生理活性较强的皂甙原糖、多糖、苹果酸、酒石酸、酚类、树脂、鞣质和维生素A、C等成分。果肉入药，为收敛性补血剂及强壮剂；可健胃、补肝肾、治贫血、腰痛、神经及心脏衰弱等症。其性味酸涩、入肝、肾经。酸涩收敛，有滋肝补肾、固肾涩精的作用，适用于肝肾不足所致的腰膝酸软、遗精滑泄、眩晕耳鸣之症。莫诺苷主要来源于山茱萸，山茱萸的果肉内含有16种氨基酸，另外，含有大量人体所必需的元素。另外，含有生理活性较强的皂甙原糖、多糖、苹果酸、酒石酸、酚类、树脂、鞣质和维生素A、C等成分。其味酸涩，具有滋补、健胃、利尿、补肝肾，益气血等功效。主治血压高、腰膝酸痛、眩晕耳鸣、阳萎遗精、月经过多等症。熊果酸高含量为有光泽的棱柱状(无水乙醇)或细毛样针状结晶(稀乙醇)，低含量为棕黄色或黄绿色粉末，具特殊的气味，是存在于天然植物中的一种五环三萜类化合物。不溶于水，尚溶于甲醇，乙醇，丙酮，吡啶，石油醚。具有镇静、抗炎、抗菌、抗糖尿病、抗溃疡、降低血糖等多种生物学效应，熊果酸还具有明显的抗氧化功能，因而被广泛地用作医药和化妆品原料。熊果酸临床表现有显著而迅速降低谷丙转氨酶、血清转氨酶、消退黄疽、增进食欲、抗纤维化和恢复肝功能的作用，具有见效快、疗程短、效果稳定的特点。现已有较多文献资料公开了熊果酸提取纯化工艺研究。公开号为CN1569867的中国专利公开了一种山茱萸提取物莫诺苷的制备方法，包括下列步骤：山茱萸药材用乙醇提取，减压浓缩，浓缩液加水沉淀，上清液用大孔吸附树脂或活性炭进行柱层析，用水和稀醇洗去杂质，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，减压浓缩并干燥后，经反相硅胶分离得到粉末状山茱萸提取物莫诺苷。公开号为CN101385735的中国专利公开了一种莫诺苷的制备方法，`山茱萸药材粉碎后水洗醇沉；醇沉液浓缩，调节PH值至1～3上非极性～弱极性的大孔树脂，水洗至无色，再用10％～30％的乙醇溶液洗脱3～5倍柱体积，收集洗脱液，浓缩；浓缩液上非极性～弱极性的大孔树脂，水洗，再用10％～30％的乙醇溶液洗脱3～5倍柱体积，收集洗脱液，低温减压干燥，结晶即得。该方法在低pH条件下易发生莫诺苷水解，会造成其产率下降。公开号为CN101974048A的中国专利公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷的方法，包括以下几个步骤：1)超声醇提：将山茱萸原料粉碎加4‐15倍量乙醇，常温超声提取1‐3小时提取2‐3次；2)大孔树脂吸附：将提取液回收乙醇，过滤，加入大孔树脂柱吸附，水→醇梯度洗脱，收集莫诺苷流分；3)膜过滤：上述莫诺苷流分加入超滤膜超滤，再加入纳滤膜纳滤，收集浓缩液；4)萃取；将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取3‐5次，合并萃取液，减压浓缩，得浓缩浸膏；5)结晶：将浸膏溶于乙酸乙酯，除去不溶物和水层，加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯至小体积，滤过加入二氯甲烷，有白色沉淀析出至，放置结晶，重复结晶2‐3次，减压干燥即得莫诺苷产品。公开号为CN102127140A的中国专利公开了一种从山茱萸中联合提取莫诺苷、山茱萸多糖和熊果酸的方法，包含以下步骤：1)提取：将山茱萸粉碎，加入10‐15倍量水加热提取2‐3次，合并提取液，水提后的残渣加6‐8倍量90％醇回流提取，提取液浓缩；2)大孔树脂柱I吸附：把上述水提取液加入大孔树脂柱I吸附，收集下柱液，依次用水和乙醇溶液洗脱，将水洗脱液与下柱液合并，加醇沉淀，滤出沉淀干燥即得山茱萸多糖，收集醇洗脱液，浓缩无醇，加水分散，加等体积的正丁醇萃取2‐4次，正丁醇萃取液浓缩回收正丁醇，干燥即得莫诺苷；3)大孔树脂柱II吸附：上述醇提浓缩液上大孔树脂柱II吸附，用90％乙醇洗脱，收集洗脱液，洗脱液加入活性炭回流脱色，滤除活性炭，放冷结晶，滤出结晶，干燥即得熊果酸。公开号为CN102477053A的中国专利公开了一种从山茱萸中提取莫诺苷和马钱苷的方法，包括以下几个步骤：1)提取：将干燥山茱萸粉碎，用6‐8倍量的70％乙醇超声提取2‐3小时，提取2‐3次，合并提取液；2)萃取：将上述提取液浓缩至无醇，加水分散，加等体积的正丁醇萃取2‐4次，正丁醇萃取液浓缩回收正丁醇，至干，得到粗苷；3)高速逆流色谱分离：以正丁醇‐乙醇‐水为两相溶剂系统，将上述粗苷用下相溶解，以上相为固定相，下相为流动相，流出物分别减压蒸干；4)结晶：将上述干燥物正丁醇加热溶解，再加5‐8倍量乙酸乙酯结晶2‐3次，干燥即得产品。公开号为CN104987354A的中国专利公开了一种制备莫诺苷的方法，包括如下步骤：1)将山茱萸进行渗漉提取，得到山茱萸提取液；2)浓缩所述步骤1)得到的山茱萸提取液浓缩，得到山茱萸浸膏；3)得到所述山茱萸浸膏，与硅胶混匀、干燥、研细后，装填于色谱柱中；所述色谱柱中已装有柱层析用空白硅胶；4)用洗脱液对所述色谱柱进行洗脱并收集流分，再除去所述收集到的流分中的洗脱液，用甲醇溶解残留物，重结晶，得到所述莫诺苷。公开号为CN107286211A的中国专利公开了一种莫诺苷的制备方法，包括以下几个步骤：(1)原材料加乙醇采用微波、超声波协同提取法进行提取：将山茱萸原料粉碎加5‐10倍量乙醇，通过微波、超声波协助提取40‐60分钟，提取2‐3次；(2)采用大孔树脂吸附提取液：回收提取液中的乙醇，过滤后加入大孔树脂柱进行吸附，然后采用水‐醇梯度洗脱，最后收集莫诺苷流分；(3)莫诺苷流分通过过滤膜进行过滤操作：将莫诺苷流分加入超滤膜进行超滤，超滤完成后再加入纳滤膜进行过滤，然后收集浓缩液；(4)对收集到的浓缩液进行萃取操和结晶操作：将上述浓缩液加水饱和正丁醇萃取2‐4次，然后将萃取液合并，再进行减压浓缩，浓缩后可得到浓缩浸膏，将浸膏溶于乙酸乙酯来除去不溶物和水层，再加入无水硫酸钠回收乙酸乙酯，溶液经过过滤后加入二氯甲烷，随后可看到有白色沉淀析出，最后放置结晶，重复结晶3‐4次，采取减压干燥后即可得到莫诺苷产品。公开号为CN101422502的中国专利公开了一种含熊果酸的山茱萸提取物的制备方法，包括以下步骤：1)、将山茱萸粉与水相混合，然后接种山茱萸粉重量2％～4％的葡萄酒酵母菌进行摇床发酵，发酵温度为25～35℃，发酵时间4d～8d；得发酵液；2)、在发酵液中加入蒸馏水后于50～70℃水浴0.5～2h，然后在50～70℃和30～40KHZ的频率下超声波处理1～3次，每次的超声波处理时间为10～20min；3)、过滤步骤2)的所得物，在所得的滤渣中加入体积浓度为75％～95％乙醇，于40～60℃和30～40KHZ的频率下超声波萃取5～15min；然后抽滤浓缩，得浓缩液；4)、浓缩液用石油醚萃取，取下层液进行浓缩和干燥，得到含熊果酸的山茱萸提取物。公开号为CN101537029的中国专利公开了一种山茱萸的含熊果酸的提取物的制备方法，其特征是：在容器中加入茱萸粉和水，山茱萸粉/水的质量比为1/1～1/3.5，再加入山茱萸粉质量的0.02～0.04倍量酵母，摇床发酵，发酵温度为25℃～33℃，摇床转速110rpm～150rpm，本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从山茱萸中提取莫诺苷、马钱苷和熊果酸的方法，包括如下步骤：(1)将山茱萸果实进行干燥并粉碎，加入60～85％乙醇水溶液进行室温提取1～3h，过滤得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ，其中加入60～85％乙醇水溶液体积L与山茱萸干重比为2～5：1；(2)滤液Ⅰ在40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/10～1/25，过滤一次得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ；(3)向滤渣Ⅰ中加入少量的水，再接种10～15％的枯草芽孢杆菌，进行30℃～35℃发酵24～36h，得发酵物，其中加入水体积L与山茱萸干重比为3～10：50；(4)将发酵物加入乙醇进行室温提取1～3h，过滤得滤液Ⅲ和滤渣Ⅲ，其中加入乙醇体积L与酶解液体积L比为3～6：1，其中乙醇为95％以上的乙醇或无水乙醇；(5)滤液Ⅲ在40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/15～1/30，陶瓷膜过滤一次得滤液Ⅳ和滤渣Ⅳ；(6)将滤液Ⅱ和滤液Ⅳ合并后上AB‐8大孔树脂柱进行吸附，用四倍至六倍柱体积的20～40％乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液Ⅰ；(7)将洗脱液Ⅰ进行40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至干燥物A，得莫诺苷纯品；(8)将滤渣Ⅱ和滤渣Ⅳ加入无水甲醇溶解，上硅胶柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的甲醇水溶液进行柱洗脱，得到洗脱液Ⅱ，最后三倍至五倍柱体积氯仿‐甲醇溶液进行柱洗脱，得到洗脱液Ⅲ，洗脱液Ⅱ和洗脱液Ⅲ在50℃～65℃下进行真空或减压浓缩至干，分别获得干燥物B、干燥物C；(9)干燥物B加入乙醇溶液在40～45℃下保温15～30min，趁热陶瓷膜过滤1次，滤液放置冰箱中过夜，结晶重结晶一次得熊果酸纯品；(10)干燥物C加入丙酮在35～40℃下保温15～30min，趁热陶瓷膜过滤1次，滤液放置冰箱中过夜，结晶重结晶一次，得马钱苷纯品。...

【技术特征摘要】
1.一种从山茱萸中提取莫诺苷、马钱苷和熊果酸的方法，包括如下步骤：(1)将山茱萸果实进行干燥并粉碎，加入60～85％乙醇水溶液进行室温提取1～3h，过滤得滤液Ⅰ和滤渣Ⅰ，其中加入60～85％乙醇水溶液体积L与山茱萸干重比为2～5：1；(2)滤液Ⅰ在40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/10～1/25，过滤一次得滤液Ⅱ和滤渣Ⅱ；(3)向滤渣Ⅰ中加入少量的水，再接种10～15％的枯草芽孢杆菌，进行30℃～35℃发酵24～36h，得发酵物，其中加入水体积L与山茱萸干重比为3～10：50；(4)将发酵物加入乙醇进行室温提取1～3h，过滤得滤液Ⅲ和滤渣Ⅲ，其中加入乙醇体积L与酶解液体积L比为3～6：1，其中乙醇为95％以上的乙醇或无水乙醇；(5)滤液Ⅲ在40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至原有体积的1/15～1/30，陶瓷膜过滤一次得滤液Ⅳ和滤渣Ⅳ；(6)将滤液Ⅱ和滤液Ⅳ合并后上AB‐8大孔树脂柱进行吸附，用四倍至六倍柱体积的20～40％乙醇水溶液进行洗脱，收集洗脱液Ⅰ；(7)将洗脱液Ⅰ进行40℃～55℃下进行真空或减压浓缩至干燥物A，得莫诺苷纯品；(8)将滤渣Ⅱ和滤渣Ⅳ加入无水甲醇溶解，上硅胶柱进行吸附，用三倍至五倍柱体积的甲醇水溶液...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗婵，
申请(专利权)人：长沙爱扬医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南,43