一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法技术

本发明专利技术属于玄参环烯醚萜类化合物分离纯化技术领域，公开了一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法，包括：称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；高速逆流色谱纯化。本发明专利技术具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已经广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。

Separation and purification of three iridoids from Radix sallow

The invention belongs to the technical field of separating and purifying Scrophularia scrophularis iridoids, and discloses a method for separating and purifying three iridoids from Scrophularia scrophularis. The method comprises: weighing 10 kg of Scrophularia scrophularis, adding 15 times purified water, adjusting pH value 3.5, crude separation, refluxing and extracting for 2 hours at 60 C, filtering and collecting filtrate, and filtering residue pressing The filtrate was extracted by the same method and combined with the filtrate collected twice. The extract was obtained by rotary evaporator with a yield of 31.5% and purified by high-speed counter-current chromatography. The invention has the characteristics of large separation amount, no loss of sample, high recovery rate, mild separation environment and solvent saving, and has been widely used in the preparation, separation and purification of chemical substances in the fields of biology, medicine, environmental protection, etc.

【技术实现步骤摘要】
一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法
本专利技术属于玄参环烯醚萜类化合物分离纯化
，尤其涉及一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法。
技术介绍
目前，业内常用的现有技术是这样的：玄参为玄参科植物玄参的干燥根，中医认为玄参味甘、苦、咸，其性微寒，具有滋阴凉血、泻火解毒等功效，一般用于热病烦躁，发斑、夜寐不宁，自汗盗汗，喉咙肿痛等症，为临床常用中药。现代医学表明，玄参中含有苷类、生物碱等成份，具有抗炎、抗肿瘤、保肝作用。现有技术一般采用普通色谱柱法、重结晶等传统的分离方法分离植物中的有效单体，不仅费时费力、污染环境，且所用固定相对样品有不可逆性吸附作用。综上所述，现有技术存在的问题是：普通色谱柱法、重结晶等传统的分离方法分离植物中的有效单体，不仅费时费力、污染环境，且所用固定相对样品有不可逆性吸附作用。解决上述技术问题的难度和意义：样品经过大孔吸附树脂粗分离后，样品中的大部分杂质被除去，样品纯度得到提高，紧接着再经过硅胶柱层析后，样品中的其它成分基本上被去除，只有极少数成分没有被分离，最后经过高速逆流色谱仪分离纯化后，样品纯度达到98％以上。在高速逆流色谱仪分离纯化前先经过大孔吸附树脂和硅胶柱层析去除大部分杂质，提高样品经过高速逆流色谱仪纯化后的纯度，同时高速逆流色谱仪分离成份分离峰较窄，利于收集样品。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题，本专利技术提供了一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法。本专利技术是这样实现的，一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法，包括以下步骤：步骤一，称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；步骤二，粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；步骤三，大孔吸附树脂层析，取玄参的提取浸膏1.8kg，以流速为5-10mL/min湿法上样已处理的大孔树脂上，水洗液后、5倍大孔吸附树脂的30％乙醇、4倍大孔吸附树脂的60％乙醇洗脱，得30％乙醇浸膏为380g、60％乙醇浸膏为173g；步骤四，硅胶柱层析，30％乙醇洗脱浸膏，以乙酸乙酯-甲醇50:1-2:1梯度洗脱；60％乙醇洗脱浸膏，氯仿-甲醇25:1-10:1梯度洗脱；步骤五，高速逆流色谱纯化。进一步，所述高速逆流色谱纯化中得到哈巴俄苷的方法为：氯仿-正丁醇-甲醇-水(4:1:3:2)按比例混合后静置过夜，分层，取上层作为高速逆流色谱仪的固定相注入高速逆流色谱仪，待固定相充满高速逆流色谱仪的线圈后，再将下层作为流动相注入高速逆流色谱仪，待流动相从管柱出口流出，达到平衡时，将10mL硅胶柱层析得到的哈巴俄苷样品溶液(200mg/mL)注入高速逆流色谱仪，流速为2mL/min，检测波长为278nm，洗脱液每隔2分钟收集到试管中，进样分离样品后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测固定相的保留率(SR)通过HPLC对各个组分进行分析，得到哈巴俄苷139mg，纯度可达99.1％。进一步，所述高速逆流色谱纯化中得到桃叶珊瑚苷的方法为：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(4:2:2.5:2)按比例混合后静置过夜，分层，取上层作为高速逆流色谱仪的固定相注入高速逆流色谱仪，待固定相充满高速逆流色谱仪的线圈后，再将下层作为流动相注入高速逆流色谱仪，待流动相从管柱出口流出，达到平衡时，将10mL硅胶柱层析得到桃叶珊瑚苷溶液(200mg/mL)注入高速逆流色谱仪，流速为2mL/min，检测波长为210nm，洗脱液每隔2分钟收集到试管中，进样分离样品后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测固定相的保留率(SR)通过HPLC对各个组分进行分析，得到桃叶珊瑚苷132mg，纯度可达98.7％。进一步，所述高速逆流色谱纯化中得到哈巴苷的方法为：氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:2:2)按比例混合后静置过夜，分层，取上层作为高速逆流色谱仪的固定相注入高速逆流色谱仪，待固定相充满高速逆流色谱仪的线圈后，再将下层作为流动相注入高速逆流色谱仪，待流动相从管柱出口流出，达到平衡时，将10mL硅胶柱层析得到哈巴苷溶液(200mg/mL)注入高速逆流色谱仪，流速为2mL/min，检测波长为210nm，洗脱液每隔2分钟收集到试管中，进样分离样品后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测固定相的保留率(SR)通过HPLC对各个组分进行分析,得到哈巴苷128mg，纯度可达98.1％。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：现有高速逆流色谱高速逆流色谱是一种连续的无需固体支撑物的高效、快速的液液分配色谱分离技术，具有分离量大、样品无损失、回收率高、分离环境缓和、节约溶剂等特点，已经广泛应用于生物、医药、环保等领域化学物质的制备分离和纯化。综上所述，本专利技术的优点及积极效果为：将玄参药材中主要成分哈巴俄苷、桃叶珊瑚苷和哈巴苷分离纯化出来，得到纯度非常高的纯化样品；酶解提取液先经过大孔树脂富集分离得到粗品，再经过硅胶柱层析得到纯度较高的样品，最后经过高速逆流色谱分离得到纯度非常高的样品，与现有报道的玄参药材粉碎、乙醇提取液经大孔吸附树脂富集得到样品粗提物，粗提物再进行高速逆流色谱分离得到不同的粗品，各个粗品再分别通过中低压制备色谱或结合制备液相色谱制得纯度较高的样品，具有分离纯化制备量大，节约溶剂，降低成本(因为硅胶柱层析纯化成本远低于高效液相色谱纯化的成本，且制备量远大于高效液相色谱)。附图说明图1是本专利技术实施例提供的玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法流程图。具体实施方式为了使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本专利技术进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本专利技术，并不用于限定本专利技术。下面结合附图对本专利技术的应用原理作详细的描述。S101:称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；S102:粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；S103，大孔吸附树脂层析，取玄参的提取浸膏1.8kg，以流速为5-10mL/min湿法上样的大孔树脂上，水洗液后、5倍大孔吸附树脂的30％乙醇、4倍大孔吸附树脂的60％乙醇洗脱，得30％乙醇浸膏为380g、60％乙醇浸膏为173g；S104，硅胶柱层析，30％乙醇洗脱浸膏，以乙酸乙酯-甲醇(50：1-2:1)梯度洗脱；60％乙醇洗脱浸膏，氯仿-甲醇(25：1-10:1)梯度洗脱；S105:高速逆流色谱纯化。本专利技术实施例提供的高速逆流色谱纯化中得到哈巴俄苷的方法为：氯仿-正丁醇-甲醇-水(4:1:3:2)按比例混合后静置过夜，分层，取上层作为高速逆流色谱仪的固定相注入高速逆流色谱仪，待固定相充满高速逆流色谱仪的线圈后，再将下层作为流动相注入高速逆流色谱仪，待流动相从管柱出口流出，达到平衡时，将10mL硅胶柱层析得到的哈巴俄苷样品溶液(200mg/mL)注入高速逆流色谱仪，流速为2mL/min，检测波长为278nm，洗脱液每隔2分钟收集到试管中，进样分离样品后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测固定相的保留率(SR)通过HPLC对各个组分进行分析，得到哈巴俄苷139m本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法，其特征在于，所述的玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法包括以下步骤：步骤一，称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；步骤二，粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；步骤三，大孔吸附树脂层析，取玄参的提取浸膏1.8kg，以流速为5‑10mL/min湿法上样已处理的大孔树脂上，水洗液后、5倍大孔吸附树脂的30％乙醇、4倍大孔吸附树脂的60％乙醇洗脱，得30％乙醇浸膏为380g、60％乙醇浸膏为173g；步骤四，硅胶柱层析，30％乙醇洗脱浸膏，以乙酸乙酯‑甲醇50：1‑2:1梯度洗脱；60％乙醇洗脱浸膏，氯仿‑甲醇25：1‑10:1梯度洗脱；步骤五，高速逆流色谱纯化。

【技术特征摘要】
1.一种玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法，其特征在于，所述的玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法包括以下步骤：步骤一，称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；步骤二，粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；步骤三，大孔吸附树脂层析，取玄参的提取浸膏1.8kg，以流速为5-10mL/min湿法上样已处理的大孔树脂上，水洗液后、5倍大孔吸附树脂的30％乙醇、4倍大孔吸附树脂的60％乙醇洗脱，得30％乙醇浸膏为380g、60％乙醇浸膏为173g；步骤四，硅胶柱层析，30％乙醇洗脱浸膏，以乙酸乙酯-甲醇50：1-2:1梯度洗脱；60％乙醇洗脱浸膏，氯仿-甲醇25：1-10:1梯度洗脱；步骤五，高速逆流色谱纯化。2.一种由权利要求1所述玄参中三种环烯醚萜类成分的分离纯化方法分离的哈巴俄苷、桃叶珊瑚苷、哈巴苷。3.一种如权利要求2所述玄参中哈巴俄苷的分离纯化方法，其特征在于，所述玄参中哈巴俄苷的分离纯化方法包括：步骤一，称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；步骤二，粗分离，在温度60℃回流提取2h，过滤收集滤液，滤渣按照以上方法同法提取滤液，合并两次收集的滤液，旋转蒸发仪上蒸发得浸膏，浸膏得率约为31.5％；步骤三，大孔吸附树脂层析，取玄参的提取浸膏1.8kg，以流速为5-10mL/min湿法上样已处理的大孔树脂上，水洗液后、5倍大孔吸附树脂的30％乙醇、4倍大孔吸附树脂的60％乙醇洗脱，得30％乙醇浸膏为380g、60％乙醇浸膏为173g；步骤四，硅胶柱层析，30％乙醇洗脱浸膏，以乙酸乙酯-甲醇50：1-2:1梯度洗脱；60％乙醇洗脱浸膏，氯仿-甲醇25：1-10:1梯度洗脱；步骤五，高速逆流色谱纯化；氯仿-正丁醇-甲醇-水＝4:1:3:2按比例混合后静置过夜，分层，取上层作为高速逆流色谱仪的固定相注入高速逆流色谱仪，待固定相充满高速逆流色谱仪的线圈后，再将下层作为流动相注入高速逆流色谱仪，待流动相从管柱出口流出，达到平衡时，将10mL硅胶柱层析得到的哈巴俄苷样品溶液200mg/mL注入高速逆流色谱仪，流速为2mL/min，检测波长为278nm，洗脱液每隔2分钟收集到试管中，进样分离样品后，停止主机转动，用氮气将固定相推出，测固定相的保留率通过HPLC对各个组分进行分析。4.一种如权利要求2所述玄参中桃叶珊瑚苷的分离纯化方法，其特征在于，所述玄参中桃叶珊瑚苷的分离纯化方法包括：步骤一，称取玄参药材10kg，加入15倍量纯化水，调节pH值3.5；步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈章宝，刘娇娇，
申请(专利权)人：西南大学，
类型：发明
国别省市：重庆,50