本发明专利技术公开了一种STAT3抑制剂、STAT5激活剂在增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力方面的应用。本领域技术人员知道，抑制肿瘤微环境内的STAT3可以促进NK细胞等免疫细胞对肿瘤的杀伤作用；STAT5既可促进肿瘤细胞的生长发育又可促进NK细胞的发育和细胞毒性，抑制NK细胞的STAT5水平不仅损害NK细胞的正常功能，而且促进肿瘤的生长，因而促进STAT5在NK细胞中的表达有利于对肿瘤的治疗。本发明专利技术发现，Flexilarin F或Flexilarin G为STAT3抑制剂、STAT5激活剂，Flexilarin F或Flexilarin G通过抑制STAT3的表达、激活STAT5的表达提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力；对比二萜Lobocrassin E不具备这种作用。
Application of a STAT3 inhibitor and STAT5 activator in enhancing the lethality of NK cells to tumor cells
The invention discloses an application of STAT3 inhibitor and STAT5 activator in enhancing the killing power of NK cells to tumor cells. As technicians in the field know, inhibition of STAT3 in tumor microenvironment can promote the killing effect of immune cells such as NK cells on tumor; STAT5 can not only promote the growth and development of tumor cells, but also promote the development and cytotoxicity of NK cells. Inhibition of STAT5 level of NK cells not only impairs the normal function of NK cells, but also promotes tumor. Therefore, the expression of STAT5 in NK cells is conducive to the treatment of tumors. Flexilarin F or Flexilarin G were found to be STAT3 inhibitors and STAT5 activators. Flexilarin F or Flexilarin G increased NK cell cytotoxicity by inhibiting the expression of STAT3 and activating the expression of STAT5.
【技术实现步骤摘要】
一种STAT3抑制剂、STAT5激活剂在增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力方面的应用
本专利技术属于免疫领域，涉及二萜类化合物及其衍生物在细胞免疫治疗方面的应用，具体涉及一种STAT3抑制剂、STAT5激活剂在增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力方面的应用。
技术介绍
近年来，肿瘤的免疫疗法在临床研究等方面取得了巨大的进展，但主要的研究都是针对特异性免疫系统中T细胞等展开的。然而，随着对属于固有免疫系统的自然杀伤(naturalkiller，NK)细胞研究的深入，其在肿瘤免疫疗法中的作用越来越受到重视。NK细胞是一类独立的淋巴细胞亚群，最近被发现是先天淋巴样细胞家族的初始成员。与T细胞和B细胞不同的是NK细胞不需要特异性的抗原刺激就可以杀伤靶细胞，具有免疫清除和免疫监视等功能。故NK细胞在抵御肿瘤，尤其是转移瘤细胞和微小肿瘤细胞的清除中起到重要作用。STAT3和STAT5是JAK-STAT通路的重要组成部分。激活STAT3会促进肿瘤细胞的增殖并减弱其对NK细胞等免疫细胞的敏感性。另外STAT3的激活还会抑制NK细胞等免疫细胞对肿瘤的杀伤作用，同时紊乱免疫细胞之间的调节，抑制免疫细胞向肿瘤的迁移。因此抑制肿瘤微环境内的STAT3信号通路或许是治疗某些肿瘤的途径之一。STAT5既可促进肿瘤细胞的生长发育又可促进NK细胞的发育和细胞毒性。抑制NK细胞的STAT5水平不仅损害NK细胞的正常功能，而且促进肿瘤的生长。因而促进STAT5在NK细胞中的表达有利于对肿瘤的治疗(参考文献：STAT3、STAT5在NK细胞中的抗肿瘤作用研究进展，转化医学电子杂志2017年第4期第5卷)。FlexilarinF、FlexilarinG为从一种珊瑚中分离得到的二萜类化合物，化学结构式如下(参考文献：CembranediterpenoidsfromtheTaiwanesesoftcoralSinulariaflexibillis.Tetrahedron,2009,65:9157-9164)。现有技术没有报道过FlexilarinF、FlexilarinG用作STAT3抑制剂、STAT5激活剂的用途，也没有报道过其可以提高NK细胞对肿瘤细胞的杀伤力。
技术实现思路
本专利技术目的在于提供一种STAT3抑制剂、STAT5激活剂在增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力方面的应用。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：FlexilarinF或FlexilarinG用作STAT3抑制剂的用途。FlexilarinF或FlexilarinG用作STAT5激活剂的用途。FlexilarinF或FlexilarinG用于增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的用途。进一步地，所述肿瘤为胃癌。一种STAT3抑制剂或STAT5激活剂，含有FlexilarinF或FlexilarinG，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。进一步地，药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料；药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂。一种用于增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的药物制剂，含有FlexilarinF或FlexilarinG，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。进一步地，药学上可以接受的载体或赋形剂包括一种或多种固体、半固体或液体辅料；药学上可以接受的剂型包括片剂、胶囊剂、颗粒剂、注射剂、丸剂、糖浆剂、散剂、膏剂。进一步地，所述肿瘤为胃癌。本专利技术的技术效果：本专利技术发现，FlexilarinF或FlexilarinG为STAT3抑制剂、STAT5激活剂，FlexilarinF或FlexilarinG通过抑制STAT3的表达、激活STAT5的表达提高NK细胞对肿瘤细胞杀伤力。附图说明图1为各组NK细胞STAT3、STAT5表达量及对胃癌细胞SGC-7901、BCG-823杀伤力。具体实施方式下面结合附图和实施例具体介绍本专利技术实质性内容，但并不以此限定本专利技术的保护范围。实施例1：一、实验材料RPMI-1640、胎牛血清(FBS)购自GIBCO公司；NK细胞培养基购自德国CellGro。重组人白细胞介素2(rhIL-2)购自双鹭药业；淋巴细胞分离液购自NycomedPharma。人胃癌细胞SGC-7901、BCG-823购自中国科学院上海细胞库。二、实验方法1、单个核细胞分离、分组及NK细胞培养采集健康志愿者外周血，Ficoll密度梯度离心，分离获得外周血单个核细胞(PBMC)。Day0，用含有5％自体血浆、80U/ml庆大霉素的NK细胞培养液将PBMC调至起始细胞数为1.0×106/L，将细胞均分为对照组和给药组，对照组常规培养：day0加入500U/ml的rhIL-2，置于37℃，5％CO2培养箱培养，以后每2天半量换液1次，将细胞数控制为1.0×106/L。给药组(FlexilarinF组、FlexilarinG组、LobocrassinE组)与对照组培养方法基本一致，仅在day0额外添加10μM的FlexilarinF、FlexilarinG或LobocrassinE。2、Westernblot测定各组NK细胞中STAT3、STAT5的表达量收集Day10各组NK细胞，用细胞裂解液裂解细胞提取总蛋白。配制12％SDS-丙烯酰胺凝胶，将蛋白与5×loadingbuffer混合后上样，浓缩胶中恒压60V，分离胶加至120V，待电泳完成，将蛋白转至PVDF膜上(恒流150mA，3h)。用5％脱脂牛奶将膜封闭2h后用TBST洗膜3次，每次10min，一抗以工作浓度1:500，4℃孵育过夜，加入辣根过氧化酶标记的二抗(STAT3、STAT5为兔抗1:10000；β-actin为鼠抗1:12000)。孵育2h，用ECL发光剂压胶片发光、显影，以STAT3、STAT5与内参β-actin的灰度比值作为STAT5表达量。将对照组STAT3、STAT5表达量归一化，计算各给药组STAT3、STAT5表达量的归一化值。3、NK细胞对胃癌细胞SGC-7901的杀伤力测定胃癌细胞SGC-7901的培养：从液氮中取出SGC-7901细胞株，置于温水中快速复苏，接种于含10％胎牛血清RPMI-1640培养基的50mL培养瓶中，37℃，5％CO2环境培养，每2d半量换液，观察细胞生长情况并及时换液和传代。各组NK细胞对胃癌细胞SGC-7901的杀伤力测定：Day10，以SGC-7901细胞为靶细胞(2×104/孔，100μl/孔)，10:1效靶比加入96孔板，另设靶细胞组和效应细胞组。每组设3复孔，置于CO2培养箱。18h后，每孔加入20μlCCK-8试剂，继续培养4h。酶标仪在450nm波长下检测吸光度，杀伤率用以下公式来计算：杀伤率(％)＝(实验组OD值-效应细胞组OD值)/靶细胞组OD值×100％。4、NK细胞对胃癌细胞BCG-823的杀伤力测定胃癌细胞BCG-823的培养：从液氮中取出BCG-823细胞株，置于温水中快速复苏，接种于含10％胎牛血清RPMI-1640培养基的50mL培养瓶中，37℃，5％CO2环境培养，每2d半量换液，观察细胞生长情况并及时换液和传代。各组NK细胞对胃癌细胞BC本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.Flexilarin F或Flexilarin G用作STAT3抑制剂的用途。
【技术特征摘要】
1.FlexilarinF或FlexilarinG用作STAT3抑制剂的用途。2.FlexilarinF或FlexilarinG用作STAT5激活剂的用途。3.FlexilarinF或FlexilarinG用于增强NK细胞对肿瘤细胞杀伤力的用途。4.根据权利要求3所述的用途，其特征在于：所述肿瘤为胃癌。5.一种STAT3抑制剂或STAT5激活剂，其特征在于：含有FlexilarinF或FlexilarinG，还含有药学上可以接受的载体或赋形剂，制成药学上可以接受的剂型。6.根据权利要求5所述的药物制剂，其特征在于：所述药学上可以接受的载体或赋形剂包括一...
【专利技术属性】
技术研发人员：徐军，
申请(专利权)人：徐军，
类型：发明
国别省市：江苏,32
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