一种胰腺导管腺癌标志物及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种胰腺导管腺癌相关的肿瘤标志物LINC01133，以及一种用于检测LINC01133的表达水平的试剂盒在胰腺导管腺癌检测和诊断或对患者预后评价中的应用。LINC01133的表达高低与胰腺导管腺癌临床病理学参数与患者预后密切相关，可作为一种胰腺导管腺癌检测的特异性肿瘤标志物及预后指标,具有重要的临床价值。

【技术实现步骤摘要】
一种胰腺导管腺癌标志物及其应用
本专利技术属于肿瘤诊断和分子靶向治疗领域，涉及一种胰腺导管腺癌相关的肿瘤标志物及应用。
技术介绍
近年来，胰腺导管腺癌(PancreaticDuctAdenocarcinoma)发病率在全球范围内呈逐年上升趋势。由于胰腺癌恶性度高、进展迅速，因此其预后极差，总体5年生存率不足5％。虽然根治性手术切除可改善预后、提高远期生存率，但由于胰腺癌起病隐匿、进展迅速、易复发转移等特性，根治性手术切除率仅有15％，且术后5年生存率不足20％。此外，胰腺癌尚缺乏特效的化疗药物和靶向治疗药物，其对化疗的敏感性不高，效果欠佳。总体来讲，目前胰腺癌的治疗依然十分困难，预后极差，严重危害人民的身体健康。因此，找到和研究新的胰腺导管腺癌生物标记物和防治靶标，为胰腺导管腺癌的诊断和靶向治疗打下了基础，为扭转胰腺癌治疗效果不理想这一难题开辟新途径，具有十分重要的科学意义及应用前景。人类基因组计划研究发现在组成人类基因的30亿个碱基对中，只有大约1.5％的核酸序列可以编码蛋白质，其余的不编码蛋白质的序列曾被认为是无功能的“噪音序列”。然而随后越来越多的证据证明，在高等物种中这类非编码蛋白质的基因组序列可以特异性转录成RNA，称为非编码RNA(non-codingRNA,ncRNA)，并发挥重要的生物学作用。近年来，长链非编码RNA(Longnon-codingRNA,lncRNA)已成为该领域的研究热点，人们逐渐发现lncRNA在疾病发生发展中具有重要作用。然而目前仅有极少数lncRNA的作用机制得到了阐明和证实，绝大部分lncRNA的功能机制及其与疾病的关系尚不明确。前期研究我们发现LINC01133在非小细胞肺癌中高表达，并且与肺鳞状细胞癌病人生存预后显著相关。另外，还发现LINC01133在TGF-β诱导的结直肠癌细胞上皮间质转化(EMT)中起到重要的调控作以及LINC01133在口腔癌中通过海绵吸附miR-422a从而促进肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移。但是LINC01133在胰腺癌中的表达情况和生物学功能均未见报道；经检索，目前亦没有针对胰腺导管腺癌中LINC001133基因作为生物肿瘤标志物的专利申请。
技术实现思路
本专利技术旨在克服现有技术的不足，提供一种胰腺导管腺癌肿瘤相关的肿瘤标志物，所述肿瘤标志物为LINC01133。本专利技术证实LINC01133基因在胰腺导管腺癌样本中高表达，在正常胰腺细胞系或组织样本中低表达。在胰腺导管腺癌组织中，LINC01133在胰腺导管腺癌样本及正常样本中的表达具有显著性差异，可作为胰腺导管腺癌的检测指标。且其表达量与肿瘤的临床病理学参数显著相关，表达水平与病人不良生存预后存在显著相关性，结果表明LINC01133是特异性的肿瘤标志。本专利技术提供一种胰腺导管腺癌检测试剂盒，所述试剂盒包括实时荧光定量SYBR染料，分子生物学级别H2O，还包括上游检测引物和下游检测引物，上游检测LINC01133引物序列为SEQIDNO：1，下游检测LINC01133引物序列为SEQIDNO：2。上游检测GAPDH引物序列为SEQIDNO：3，下游检测GAPDH引物序列为SEQIDNO：4，专利技术人发现，检测LINC01133的引物具有良好的特异性，用于诊断胰腺导管腺癌具有高准确率。为了验证专利技术的诊断有效性以及该标志物为胰腺导管腺癌靶点的准确性，本专利技术通过以下方法进行验证，采用RT-PCR、siRNA的方法验证癌症标志物的表达特征及其对癌症细胞生长功能的影响。实验方法主要包括以下几个部分：1.应用RT-PCR技术在细胞系和癌症组织样本中验证基因表达差异：提取胰腺导管腺癌及正常细胞系总RNA；设计引物，进行PCR反应；检测不同细胞系和癌症组织样本中LINC01133基因的表达变化。结果显示，胰腺导管腺癌细胞系和病例样本中均发现LINC01133高表达。2.在细胞水平验证该基因对胰腺导管腺癌细胞生长功能的影响：siRNA敲降基因表达；验证基因对细胞生长的影响。结果显示，敲降LINC01133基因的胰腺导管腺癌细胞生长能力显著下降。为了验证胰腺导管腺癌中实验做出的结果，本专利技术选取了GEO数据库挖掘工作，并通过TCGA收集癌症数据库中完整的转录组数据和临床数据，分析基因的差异表达和部分临床病理学参数相关性。筛选数据完整的胰腺导管腺癌样本信息；分析胰腺导管腺癌临床病理学参数信息、基因表达差异水平以及生存曲线差异，结果显示胰腺导管腺癌患者中，LINC01133的表达量在癌与癌旁组织有显著差异，生存曲线反映了胰腺导管腺癌中LINC01133高表达组的无瘤生存期及总体生存期更短。附图说明图1为选取GEO数据库中挖掘的三组基因芯片数据(GSE15471，GSE16515，GSE32676)进行分析，LINC01133在胰腺导管腺癌患者中癌与癌旁表达量的差异图2为TCGA数据库中胰腺导管腺癌组织LINC01133高表达与低表达组在无疾病生存时间(DFS)与总生存时间(OS)的差异图3为中山大学附属第一医院49例胰腺导管腺癌患者临床组织样本中LINC01133的表达差异情况；胰腺导管腺癌病人肿瘤细胞中LINC01133表达比例明显高于正常胰腺组织图4为siRNA敲降LINC0133效果图图5为敲降LINC01133对2种胰腺导管腺癌细胞系SW1990(ATCC编号CRL-2172),BXPC3(ATCC编号CRL-1687)增殖的影响，与胰腺导管腺癌对照组相比，胰腺导管腺癌LINC01133的增殖能力显著下降图6敲低LINC01133对胰腺导管腺癌SW1990和BXPC3细胞增殖的平板克隆实验，与胰腺导管腺癌对照组相比，胰腺导管腺癌LINC01133的增殖能力显著下降图7为敲除LINC01133对胰腺导管腺癌SW1990和BXPC3体内成瘤的影响；敲除LINC01133之后SW1990和BXPC3细胞生长速度显著降低，成胰腺导管腺癌的能力显著降低。具体实施方式下面结合附图与实施例对本专利技术作进一步的描述实施例1：通过数据库挖掘LINC01133基因与胰腺导管腺癌的关系，比较LINC01133基因在胰腺导管腺癌病人标本中癌与癌旁表达量的差异。TheCancerGenomeAtlas(TCGA)数据库包含了多种肿瘤类型多种层次的数据信息，包括：miRNA、mRNA、蛋白质谱、突变谱、临床诊断信息等。这些数据为肿瘤数据分析提供了丰富的资源。因此，我们首先借助TCGA数据库(https://tcga-data.nci.nih.gov/tcga/)对LINC01133基因与癌症的相关性进行分析。(1)、选取GEO数据库(https://www.ncbi.nlm.nih.gov/gds/)中挖掘的三组基因芯片数据(GSE15471，GSE16515，GSE32676)进行分析。其中，基因LINC01133在三组GEO芯片数据中癌与癌旁中均差异表达，LINC01133在癌组织中表达显著增高(图1)。(2)通过TCGA收集癌症数据库中完整的转录组数据和临床数据，筛选数据完整的胰腺导管腺癌样本信息，分析胰腺导管腺癌生存曲线结果显示：胰腺导管腺癌患者中，LINC01133的表达量在癌与癌旁组织有显著差异，生存曲线反映了胰本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种肿瘤生物标志物LINC01133作为胰腺导管腺癌相关的肿瘤标志物的用途，其特征在于LINC01133在胰腺导管腺癌中表达显著增高。

【技术特征摘要】
1.一种肿瘤生物标志物LINC01133作为胰腺导管腺癌相关的肿瘤标志物的用途，其特征在于LINC01133在胰腺导管腺癌中表达显著增高。2.如权利要求1所述肿瘤生物标志物在制备胰腺导管腺癌辅助诊断、疗效预测及预后判断试剂盒中的应用。3.一种肿瘤生物标志物LINC01133检测试剂盒，其通过检测LINC01133的表达产物检测LINC01133的表达水平，所述试剂盒中包括LINC01133的表达产物的特异性结合物。4.根据权利要求3所述的检测试剂盒，...

【专利技术属性】
技术研发人员：殷晓煜，赵蔚，黄晨松，
申请(专利权)人：中山大学附属第一医院，
类型：发明
国别省市：广东,44