一种模拟移动床分离具有延缓衰老作用的花色苷的方法技术

本发明专利技术公开了一种从浆果果实中提取花色苷的方法。该方法包括下述步骤：(1)将浆果果实打成果浆，加入乙醇水溶液进行提取；将提取液依次经过大孔树脂纯化、旋蒸蒸发回收溶剂、浓缩提取液、真空冷冻干燥，得到花色苷粗提物；(2)采用模拟移动床色谱对所述花色苷粗提物溶液进行分离，得到花色苷提取物。本发明专利技术通过大孔树脂及模拟移动床对浆果中花色苷进行分离纯化，分离出杂质少的花色苷提取物，制备成用于抗衰老的花色苷提取物。该方法实现了花色苷提取物的工业化生产，从而提高了花色苷的生产效率。花色苷可以单独或复配在食品或药品中应用，制成任何剂型的保健品或药品，黑果腺肋花楸、桑葚、葡萄等花色苷具有延缓衰老的作用。

A simulated moving bed method for separating anthocyanins with anti-aging effect

The invention discloses a method for extracting anthocyanins from berries. The method comprises the following steps: (1) pulping berry fruits and adding ethanol aqueous solution for extraction; purifying the extract by macroporous resin, recovering solvent by rotary evaporation, concentrating the extract, and freeze-drying in vacuum to obtain crude anthocyanin extract; (2) dissolving the crude anthocyanin extract by simulated moving bed chromatography The anthocyanin extract was obtained by separating the liquid. The invention separates and purifies anthocyanins in berries by macroporous resin and simulated moving bed, and separates anthocyanins extracts with less impurities, and then prepares anthocyanins extracts for anti-aging. The method realizes the industrial production of anthocyanin extract and improves the production efficiency of anthocyanins. Anthocyanins can be used alone or in combination in food or medicine to make any dosage form of health care products or medicines. Anthocyanins such as Sorbus nigra, Mulberry and Grape have the effect of delaying aging.

【技术实现步骤摘要】
一种模拟移动床分离具有延缓衰老作用的花色苷的方法
本专利技术涉及一种模拟移动床分离具有延缓衰老作用的花色苷的方法。
技术介绍
花色苷属于植物多酚的类黄酮，是植物的次生代谢产物，其结构由C6-C3-C6骨架结构的花色素以糖苷键结合葡萄糖、半乳糖等糖苷而成。自然界中已知有20种花色素，食源性花色素主要有六种形式，多以葡萄糖酯化的形式存在。花色素与葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等，发生酯化形成花色苷；并可与咖啡酸、对香豆酸、芥子酸、对羟基苯甲酸、阿魏酸、丙二酸、苹果酸、琥珀酸和乙酸等发生酰化反应，形成酰化形式花色苷。花色素含有多个酚羟基，具有极强的抗氧化活性，作为自由基清除剂和抗氧化活性物质，因此也极不稳定，但是通过上述一系列的酯化、酰化结构形成的花色苷极好地保护了花色素。摄食后，在人体内酸性或酶的作用下会缓慢的水解，释放出花色素，表现出强烈的抗氧化活性。花色苷具有制癌细胞增殖、抗炎、抑制肥胖，糖尿病和心血管疾病等作用。在自然界中花色苷广泛存在于浆果类水果如桑葚、黑莓、树莓、覆盆子、黑醋栗、接骨木梅、蓝莓、黑加仑等，其中桑葚主要含有花青素-3-O-葡萄糖苷和花青素3-O-芸香糖苷，蓝莓主要含有花翠素-3-O-半乳糖苷，葡萄果实中主要含有3，5-二甲基花翠素-3-O-葡萄糖苷等。黑果腺肋花楸属于蔷薇科植物，主要种植在北美、欧洲及俄罗斯等地方，我国八十年代引进在辽宁等地种植，用于园林观赏植物。黑果腺肋花楸果实含有丰富的多酚类物质，其中矢车菊3-O-半乳糖苷、矢车菊3-O-阿拉伯糖苷、矢车菊3-O-木糖苷和矢车菊3-O-葡萄糖苷为主要花色苷，主要类黄酮包括槲皮素。但是目前黑果腺肋花楸开发利用度低，花色苷价值还未被完全开发，多酚类物质主要集中在降血脂、降血糖、抗氧化等方面，并且采用模拟移动床分离黑果腺肋花楸花色苷的工艺未见报道。模拟移动床色谱(Simulatedmovingbedchromatography,SMB)是连续色谱的一种，由色谱柱或类似色谱柱的固定床层串联起来的分离系统。目前，模拟移动床一类是由美国UOP公司开发的Sorbax系统，一类是采用旋转木马式，通过旋转阀与一系列柱串联而成。旋转阀由两个不锈钢盘构成，下部钢盘静止而上部钢盘每隔一定时间逆时针旋转一定角度，由此模拟固定相的逆流移动。系统中洗脱液、进样液的进口以及萃取液和残余液的出口位置均是固定的。模拟移动床色谱系统具有精细分离，常温操作，无热损伤，质耗低，能耗低、效率高等优点，适用于分离手性药物、热敏性物质，在食品、生物医药、化妆品及精细化工产品中广泛应用。
技术实现思路
本专利技术的一个目的是提供一种从浆果果实中提取花色苷的方法。本专利技术所提供的从浆果果实中提取花色苷的方法，包括下述步骤：(1)将浆果果实和/或皮渣打成果浆，加入乙醇水溶液进行提取，收集提取液；将所述提取液依次经过大孔树脂纯化、旋转蒸发回收乙醇，收集浓缩的提取液，真空冷冻干燥，得到花色苷粗提物；(2)将所述花色苷粗提物以体积分数为25％～30％的乙醇水溶液加0.1％～1％盐酸或柠檬酸为溶剂，配制成花色苷粗提物溶液；采用模拟移动床色谱对所述花色苷粗提物溶液进行分离，得到花色苷提取物；其中，所述模拟移动床色谱中的模拟移动床为IV带结构，每带由1-2根C18色谱柱串联组成；采用的流动相是体积分数为20％～50％的乙醇水溶液，其中加入质量分数1％～5％的盐酸或柠檬酸；进样液流速为0.4～1mL/min，洗脱液流速为4～15mL/min(优选为4～10mL/min)，萃取液流速为1～10mL/min(优选为1～5mL/min)，萃余液流速为4～10mL/min(优选为6～10mL/min)，阀切换时间为100～150s(优选为130～150s)，色谱操作的温度为20～32℃。上述方法步骤(1)中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40％-90％；所述超声提取至少进行1次，优选进行1-5次。所述提取中，所述果浆与所述乙醇水溶液的质量比(即料液比)为1:2～1:10。所述提取为超声辅助提取，所述提取的时间为15-30min，所采用的超声频率为200～400W。所述大孔树脂具体可选自下述任意一种：XAD-7HP、AB-8、D101和HPD。上述方法步骤(1)中，在提取前还向所述果浆中加入柠檬酸护色，所述柠檬酸的加入量为所述果浆和乙醇水溶液总质量的1％-5％。所述浆果包括但不限于下述物质：黑果腺肋花楸、葡萄、桑葚、蓝莓、黑加仑、黑莓、树莓、覆盆子、黑醋栗、接骨木梅、草莓、黑加仑、越橘、樱桃、黑李子、石榴和火龙果。当所述浆果为桑葚、黑果腺肋花楸、蓝莓、黑莓、树莓、覆盆子、黑醋栗和接骨木梅、草莓、黑加仑、越橘、樱桃等时，可选用其果实打浆；当所述浆果为葡萄、蓝莓、黑果腺肋花楸、黑李子、石榴、火龙果等时，可以选用皮渣，如酿酒后的葡萄皮渣。上述方法制备得到的花色苷提取物也属于本专利技术的保护范围。本专利技术的再一个目的是提供上述制备的花色苷提取物的应用。本专利技术所提供的花色苷提取物的应用包括下述方面：1)在制备延缓衰老产品中的应用；2)在制备预防和/或治疗阿尔茨海默病的产品中的应用；3)在制备改善学习记忆功能的产品中的应用；4)在制备对PC12细胞损伤保护用的产品中的应用。其中，所述PC12细胞损伤是由Aβ(β淀粉样蛋白)诱导引起的损伤。所述产品包括食品、药品或保健品。本专利技术提供的花色苷可以单独或复配在食品或药品中应用，制成任何剂型的保健品或药品，黑果腺肋花楸、桑葚、葡萄等花色苷具有延缓衰老的作用。本专利技术以模拟移动床分离技术为手段，通过大孔树脂及模拟移动床对浆果(黑果腺肋花楸)中花色苷进行分离纯化，分离出杂质少的花色苷提取物，制备成用于抗衰老的花色苷提取物。模拟移动床分离方法纯化效率高，可适用于连续化生产，纯度满足于食品或保健品的添加需求，该方法实现了花色苷提取物的工业化生产，从而提高了花色苷的生产效率。本专利技术采用浆果花色苷提取物为原料，利用Aβ诱导的PC12细胞凋亡，通过体外细胞增殖实验得出，花色苷提取物可以抑制Aβ对PC12细胞的凋亡作用，保护细胞免于Aβ的伤害。本专利技术采用黑果腺肋花楸花色苷提取物为原料，以快速老化小鼠SAMP8为模型，通过水迷宫实验得出，花色苷提取物提高小鼠行为认知能力，提升小鼠体力，减缓衰老。由此可见，浆果(如黑果腺肋花楸)花色苷提取物具有延缓衰老的作用，是开发天然、抗衰老保健品的优质原料。附图说明图1为实施例1中经大孔树脂纯化后得到的黑果腺肋花楸花色苷粗提物的液相色谱图。图2为实施例1中黑果腺肋花楸花色苷粗提物经模拟移动床纯化后萃取物的液相色谱图。图3为实施例1中黑果腺肋花楸花色苷粗提物经模拟移动床纯化后萃余物的液相色谱图。图4为黑果腺肋花楸花色苷提取物冷冻干燥产品图。图5为实施例5中不同种类的浆果花色苷提取物对PC12细胞保护作用。图6为实施例5中黑果腺肋花楸花色苷提取物对快速老化小鼠SAMP8的学习记忆能力的影响。具体实施方式下面通过具体实施例对本专利技术的方法进行说明，但本专利技术并不局限于此，凡在本专利技术的精神和原则之内所做的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本专利技术的保护范围之内。下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种从浆果果实中提取花色苷的方法，包括下述步骤：(1)将浆果果实和/或皮渣打成果浆，加入乙醇水溶液进行提取，收集提取液；将所述提取液依次经过大孔树脂纯化、旋蒸蒸发回收乙醇，浓缩提取液，得到花色苷粗提物；(2)将所述花色苷粗提物以体积分数为25％～30％乙醇溶液加质量分数0.1％～1％盐酸或柠檬酸为溶剂，配制成花色苷粗提物溶液；采用模拟移动床色谱对所述花色苷粗提物溶液进行分离，得到花色苷提取物；其中，所述模拟移动床色谱中的模拟移动床为IV带结构，每带由1‑2根C18色谱柱串联组成；采用的流动相是体积分数为20％‑50％的乙醇水溶液，其中加入质量分数1％～5％的盐酸或柠檬酸；进样液流速为0.4～1mL/min，洗脱液流速为4～15mL/min，萃取液流速为1～10mL/min，萃余液流速为4～6mL/min，阀切换时间为100～150s，色谱操作的温度为20～32℃。

【技术特征摘要】
1.一种从浆果果实中提取花色苷的方法，包括下述步骤：(1)将浆果果实和/或皮渣打成果浆，加入乙醇水溶液进行提取，收集提取液；将所述提取液依次经过大孔树脂纯化、旋蒸蒸发回收乙醇，浓缩提取液，得到花色苷粗提物；(2)将所述花色苷粗提物以体积分数为25％～30％乙醇溶液加质量分数0.1％～1％盐酸或柠檬酸为溶剂，配制成花色苷粗提物溶液；采用模拟移动床色谱对所述花色苷粗提物溶液进行分离，得到花色苷提取物；其中，所述模拟移动床色谱中的模拟移动床为IV带结构，每带由1-2根C18色谱柱串联组成；采用的流动相是体积分数为20％-50％的乙醇水溶液，其中加入质量分数1％～5％的盐酸或柠檬酸；进样液流速为0.4～1mL/min，洗脱液流速为4～15mL/min，萃取液流速为1～10mL/min，萃余液流速为4～6mL/min，阀切换时间为100～150s，色谱操作的温度为20～32℃。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述方法步骤(1)中，所述乙醇水溶液中乙醇的体积分数为40％-90％；所述提取中，所述果浆与所述乙醇水溶液的质量比为1:2～1:10。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：所述提取为超声辅助提取，所述提取的时间为15-30mi...

【专利技术属性】
技术研发人员：李景明，温海超，马丽艳，倪元颖，田贺贺，
申请(专利权)人：中国农业大学，
类型：发明
国别省市：北京,11