一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种中药材及其制剂的质量检测方法，具体地说，涉及一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法。本发明专利技术的方法采用高效液相色谱分离，通过一测多评技术，以积雪草苷为内标物，建立其与羟基积雪草苷、积雪草苷‑B的相对校正因子，并计算羟基积雪草苷和积雪草苷‑B含量的方法。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价积雪草药材及其提取物与制剂的质量，可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制药材及其制剂质量的问题，对控制质量和保证疗效具有重要意义。

A quality test method for Centella asiatica and its extracts and preparations

The invention relates to a quality detection method for Chinese medicinal materials and their preparations, in particular to a quality detection method for Centella asiatica and its extracts and preparations. The method of the invention adopts high performance liquid chromatography separation, and adopts asiaticoside as internal standard, establishes a relative correction factor with asiaticoside and asiaticoside B, and calculates the content of asiaticoside and asiaticoside B. The method has high sensitivity and good stability. It can evaluate the quality of Centella asiatica and its extracts and preparations objectively, comprehensively and accurately. It can solve the problem that the quality of Centella asiatica and its preparations can not be controlled objectively and reasonably because of the lack of reference substances. It is of great significance to control the quality and ensure the curative effect.

【技术实现步骤摘要】
一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法
本专利技术涉及一种中药材及其制剂的质量检测方法，具体地说，涉及一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法。
技术介绍
积雪草为伞形科Centellaasiatica(L.)Urb.的干燥全草，具有消炎、增强记忆力、促进胶原蛋白合成和抗癌等多种生理活性，目前认为，三萜皂苷类物质是积雪草的活性成分，主要包括积雪草苷(madecassoside)、羟基积雪草苷(asiaticoside)、以及积雪草苷-B(asiaticoside–B)三种化合物，其结构式如下所示，由于积雪草苷-B为羟基积雪草苷的同分异构体，分离制备大量高纯度的对照品难度较大，直接限制了用常规的外标或内标法来实现其多指标的质量控制，无法全面控制药材质量。对于积雪草总苷中有关成分的HPLC含量测定已有相关报道，均是在一般的HPLC条件下进行测定，而一般的甲醇-水或乙腈-水系统的流动相均无法有效分离羟基积雪草苷与其同分异构体积雪草苷B。“一测多评”是一种适合中药特点的多指标质量评价的新模式，它利用有效化学成分间内在的函数和比例关系，只测定1个成分(对照品可得到者)来实现对多个成分(对照品没有或难以得到者)的同步监控，克服对照品短缺这一问题，即只测定某个代表性成分(易得、廉价、有效)，同时可计算出其他待测有效成分的含量。“积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定”【陈云艳，邵燕，等.积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷-B含量的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志，2010，41(4)：276-279】以β-环糊精作为流动相添加剂，建立了HPLC法测定积雪草总苷原料中积雪草苷、羟基积雪草苷及同分异构体积雪草苷-B的含量。然而该方法是用来测定积雪草总苷中三种三萜皂苷类成分，而积雪草总苷是积雪草经过提取后再经过纯化工艺的成品，按照中国药典2010年版和2015年版的要求，其所含的羟基积雪草苷和积雪草苷的含量不得低于55％，可见，积雪草总苷中所含的物质成分复杂程度明显不及积雪草、积雪草提取物及其制剂。而且上述方法需要使用3种对照品，其中积雪草苷-B的对照品难以获得、分析成本过高等原因，限制了外标法进行多指标成分质量控制的实际应用。因此，为了控制好积雪草药材及其提取物与制剂的临床安全性，维护患者的利益，很有必要在现有技术的基础上研究设计出能准确检测多种有效成分的检测方法。有鉴于此特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题在于克服现有技术的不足，采用高效液相色谱分离，通过一测多评技术，以积雪草苷为内标物，建立其与羟基积雪草苷、积雪草苷-B的相对校正因子，并计算羟基积雪草苷和积雪草苷-B含量的方法。该方法检测灵敏度高，稳定性好，可以客观、全面、准确地评价积雪草药材及其提取物与制剂的质量，可解决因对照品缺乏而无法客观合理地控制药材及其制剂质量的问题，对控制质量和保证疗效具有重要意义。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下技术方案：一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法，其中，所述的方法包括如下步骤：(1)积雪草苷对照品溶液的制备称取积雪草苷，加甲醇溶解，摇匀，作为积雪草苷对照品储备溶液；吸取积雪草苷对照品储备溶液，加甲醇制成积雪草苷对照品溶液；(2)供试品溶液的制备称取积雪草药材、积雪草药材提取物或积雪草制剂，加入甲醇，超声处理，放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)积雪草苷的含量测定分别将积雪草苷对照品溶液及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定供试品溶液中积雪草苷的含量；(4)计算羟基积雪草苷、积雪草苷-B的含量利用羟基积雪草苷、积雪草苷-B与积雪草苷之间的校正因子与羟基积雪草苷、积雪草苷B峰面积计算供试品中羟基积雪草苷、积雪草苷-B的含量。上述方法中，其中，步骤(4)中，供试品中羟基积雪草苷、积雪草苷B的含量按下式计算：Ci＝fsi×(Ai/As)×Cs式中Ci为待测成分i的浓度，Ai为待测成分i的峰面积，As为参比成分s的峰面积，Cs为参比成分s的浓度，fsi为参比成分s对待测成分i的校正因子。进一步的，羟基积雪草苷、积雪草苷-B与积雪草苷之间的校正因子f积雪草苷/羟基积雪草苷、f积雪草苷/积雪草苷-B按如下方法计算得到：分别精密称定积雪草苷、积雪草苷-B和羟基积雪草苷3种对照品置于量瓶中，加甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液；然后分别量取不同体积单一对照品溶液，混合稀释制成系列浓度混合对照品溶液，备用；取上述制备得到的混合对照品溶液，进样2、4、6、8、10、15、20μl，用高效液相色谱测定色谱图并进行峰面积积分，选取积雪草苷为内标化合物，利用公式分别计算积雪草苷对羟基积雪草苷、积雪草苷-B的校正因子f积雪草苷/羟基积雪草苷、f积雪草苷/积雪草苷-B。以上所述的公式为：fsi＝fs/fi＝(As/Cs)/(Ai/Ci)，式中As为参比成分s的峰面积，Cs为参比成分s的浓度，Ai为待测成分i的峰面积，Ci为待测成分i的浓度。具体地说：f积雪草苷/羟基积雪草苷＝(A积雪草苷/C积雪草苷)/(A羟基积雪草苷/C羟基积雪草苷)式中：f积雪草苷/羟基积雪草苷——积雪草苷对羟基积雪草苷的校正因子；A积雪草苷——积雪草苷峰面积；C积雪草苷——积雪草苷浓度；A积雪草苷——羟基积雪草苷峰面积；C积雪草苷——羟基积雪草苷浓度。f积雪草苷/积雪草苷-B＝(A积雪草苷/C积雪草苷)/(A积雪草苷-B/C羟基积雪草苷-B)式中：f积雪草苷/积雪草苷-B——积雪草苷对积雪草苷-B的校正因子；A积雪草苷——积雪草苷峰面积；C积雪草苷——积雪草苷浓度；A积雪草苷——积雪草苷-B峰面积；C积雪草苷——积雪草苷-B浓度。作为优选方案，高效液相色谱仪测定的条件为：色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：乙腈-β-环糊精水溶液；流速：0.9-1.1ml/min，优选1.0ml/min；柱温：35℃；检测波长：205nm；洗脱程序：梯度洗脱。本专利技术针对积雪草药材、积雪草药材提取物或积雪草制剂有效成分，通过全波长扫描，确定积雪草皂苷类有效成分在205nm处有较大的吸收，灵敏度高，因此本专利技术采用205nm作为检测波长，可以准确灵敏的检测到各有效化合物。“积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定”【陈云艳，邵燕，等.积雪草总苷及其制剂的含量研究.Ⅱ.积雪草总苷中积雪草苷、羟基积雪草苷和积雪草苷B含量的HPLC法测定[J].中国医药工业杂志，2010，41(4)：276-279】采用等度洗脱方式，而本专利技术采用梯度洗脱方式。由此产生的积极效果在于：通过实验证明，等度洗脱方式所测得积雪草苷-B、积雪草苷、羟基积雪草苷目标峰的对称因子分别为1.20、0.99、0.99，理论塔板数分别为10622、12800、15199；而梯度洗脱方式所测得积雪草苷-B、积雪草苷、羟基积雪草苷目标峰的对称因子分别为0.98、0.99、1.02，理论塔板数分别为79321、106335、149860。首先，由上数据可以判断等度洗脱方式所测得积雪草苷-本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)积雪草苷对照品溶液的制备称取积雪草苷，加甲醇溶解，摇匀，作为积雪草苷对照品储备溶液；吸取积雪草苷对照品储备溶液，加甲醇制成积雪草苷对照品溶液；(2)供试品溶液的制备称取积雪草药材、积雪草药材提取物或积雪草制剂，加入甲醇，超声处理，放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)积雪草苷的含量测定分别将积雪草苷对照品溶液及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定供试品溶液中积雪草苷的含量；(4)计算羟基积雪草苷、积雪草苷‑B的含量利用羟基积雪草苷、积雪草苷‑B与积雪草苷之间的校正因子与羟基积雪草苷、积雪草苷‑B峰面积计算供试品中羟基积雪草苷、积雪草苷‑B的含量。

【技术特征摘要】
1.一种积雪草药材及其提取物与制剂的质量检测方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤：(1)积雪草苷对照品溶液的制备称取积雪草苷，加甲醇溶解，摇匀，作为积雪草苷对照品储备溶液；吸取积雪草苷对照品储备溶液，加甲醇制成积雪草苷对照品溶液；(2)供试品溶液的制备称取积雪草药材、积雪草药材提取物或积雪草制剂，加入甲醇，超声处理，放冷，称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(3)积雪草苷的含量测定分别将积雪草苷对照品溶液及供试品溶液注入高效液相色谱仪，测定供试品溶液中积雪草苷的含量；(4)计算羟基积雪草苷、积雪草苷-B的含量利用羟基积雪草苷、积雪草苷-B与积雪草苷之间的校正因子与羟基积雪草苷、积雪草苷-B峰面积计算供试品中羟基积雪草苷、积雪草苷-B的含量。2.根据权利要求1所述的质量检测方法，其特征在于，步骤(4)中，供试品中羟基积雪草苷、积雪草苷-B的含量按下式计算：Ci＝fsi×(Ai/As)×Cs式中Ci为待测成分i的浓度，Ai为待测成分i的峰面积，As为参比成分s的峰面积，Cs为参比成分s的浓度，fsi为参比成分s对待测成分i的校正因子。3.根据权利要求2所述的质量检测方法，其特征在于，羟基积雪草苷、积雪草苷B与积雪草苷之间的校正因子f积雪草苷/羟基积雪草苷、f积雪草苷/积雪草苷-B按如下方法计算得到：分别精密称定积雪草苷、积雪草苷-B和羟基积雪草苷3种对照品置于量瓶中，加甲醇溶解稀释，制得各单一对照品储备液；然后分别量取不同体积单一对照品溶液，混合稀释制成系列浓度混合对照品溶液，备用；取上述制备得到的混合对照品溶液，进样2、4、6、8、10、15、20μl，用高效液相色谱测定色谱图并进行峰面积积分，选取积雪草苷为内标化合物，利用公式分别计算积雪草苷对羟基积雪草苷、积雪草苷B的校正因子f积雪草苷/羟基积雪草苷、f积雪草苷/...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹节明，刘曲山，
申请(专利权)人：桂林三金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45