检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法技术

本发明专利技术公开了一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，属于食品安全分析领域中的样品前处理。本发明专利技术方法包括待检样品均质、离心、固相萃取柱的活化、上样、洗脱等步骤。本发明专利技术具有简便易行、快速高效、准确度及回收率高等优点，可作为水产品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫残留量的常规检测方法。

Pretreatment of malachite green, crystal violet and its metabolites in aquatic products

The invention discloses a pretreatment method for detecting malachite green, crystal violet and their metabolites in aquatic products, belonging to the sample pretreatment in the field of food safety analysis. The method comprises the steps of homogenization, centrifugation, activation, loading and elution of the sample to be tested. The method has the advantages of simplicity, high speed, high efficiency, accuracy and high recovery rate, and can be used as a conventional detection method for the residues of malachite green, recessive malachite green, crystal violet and recessive crystal violet in aquatic products.

【技术实现步骤摘要】
检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法
本专利技术属于食品安全分析领域，具体涉及一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及代谢产物的前处理方法。
技术介绍
孔雀石绿、结晶紫是一种合成的三苯基甲烷类工业染料，最早被应用于纺织工业，因其具有抗菌效果好、价格低廉等特点，又被广泛用于预防治疗鱼类养殖中常见的水霉病、鳃霉病、小瓜虫病等。但三苯甲烷类化合物具有高毒、高残留和致癌、致畸、致突变等危害，而且孔雀石绿和结晶紫经生物体代谢后会产生危害性更强的隐色孔雀石绿和隐色结晶紫。因此，我国及美国、加拿大、欧盟等国均禁止其作为人类食用鱼的兽药使用。然而，在众多水产品的养殖以及运输过程中仍在使用孔雀石绿。因此，为了保证食品安全以及满足进出口检测的要求，建立能够准确测定水产品中孔雀石绿、结晶紫及代谢产物的有效检测方法十分重要。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，其具有简便易行、快速高效、过滤后可直接上样等特点，可作为水产品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫残留量的常规检测方法。为实现此目的，本专利技术采用如下技术方案：一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，其包括以下步骤：（1）精密称取5g样品于离心管中，加入20mL混合有机溶剂，然后以10000rpm/min均质2min，再加入5g碱性氧化铝，振荡1min，然后4500rpm/min离心10min；所述混合有机溶剂是由乙腈、甲酸按体积比3:1混合而成；（2）取5mL步骤（1）所得上清液，加5mL水稀释，得10mL样品溶液；（3）C18-中性氧化铝固相萃取柱的活化：将C18-中性氧化铝固相萃取柱先用含2vol%甲酸的乙腈溶液淋洗，然后用含20vol%甲酸的乙腈溶液冲洗除杂，再用蒸馏水冲洗平衡后，使柱中水面高于柱面进行保存；C18-中性氧化铝固相萃取柱使用后的再生方法为：先用含20vol%甲酸的乙腈溶液冲洗除杂，再用蒸馏水冲洗平衡1~2次，最后使柱中水面高于柱面进行保存；（4）将样品溶液过柱，控制流速为1滴/s，滴完后用5mL含20vol%乙腈的水溶液淋洗，真空抽干，再用2.0mL含2vol%甲酸的乙腈溶液洗脱，收集洗脱液于5mL刻度试管中，加入0.1mol/L的乙酸铵溶液定容至2.5mL刻度；（5）涡旋混匀，过滤，上机检验。所述代谢产物包括隐性孔雀石绿、隐性结晶紫。本专利技术所涉及的一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫的前处理新方法的显著特点归结如下：1）本专利技术在行业标准SN/T1768-2006以及国际标准的基础上增加了固相萃取柱技术，固相萃取柱具有极高的吸附作用，并且能很快的洗脱下来，可显著提高检测的准确性与高效性；2）本专利技术具有简便易行、快速高效、准确度及回收率高等优点，可作为水产品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫残留量的常规检测方法。具体实施方式为了使本专利技术所述的内容更加便于理解，下面结合具体实施方式对本专利技术所述的技术方案做进一步的说明，但是本专利技术不仅限于此。混合标准液的配制：分别准确称取20.0mg孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫标准品，分别用乙腈溶解定容到100mL，得到混合标准储备液；准确移取适量混合标准储备液，用乙腈稀释成使用标准溶液。混合内标溶液的配制：准确移取1.0mL孔雀石绿和隐性孔雀石绿标准溶液，用乙腈稀释定容到50mL，得到混合内标储备液；准确移取适量混合内标储备液，用乙腈稀释成使用内标溶液。实施例一种检测鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，其包括以下步骤：（1）精密称取5g样品于离心管中，加入20mL混合有机溶剂，然后以10000rpm/min均质2min，再加入5g碱性氧化铝，振荡1min，然后4500rpm/min离心10min；所述混合有机溶剂是由乙腈、甲酸按体积比3:1混合而成；（2）取5mL步骤（1）所得上清液，加5mL水稀释，得10mL样品溶液（若样品溶液浑浊可以10000rpm/min再离心3min）；（3）C18-中性氧化铝固相萃取柱的活化：将C18-中性氧化铝固相萃取柱先用2mL含2vol%甲酸的乙腈溶液淋洗，然后用5mL含20vol%甲酸的乙腈溶液冲洗除杂，再用3mL蒸馏水冲洗平衡后，剩余1mL水于柱中，关闭阀门，在柱上装一30mL扩容管备用；（4）将样品溶液过柱，控制流速为1滴/s，滴完后用5mL含20vol%乙腈的水溶液淋洗，真空抽干，再用2.0mL含2vol%甲酸的乙腈溶液洗脱，收集洗脱液于5mL刻度试管中，加入0.1mol/L的乙酸铵溶液定容至2.5mL刻度；（5）涡旋混匀，过滤，上机检验。本专利技术对空白鳗鱼样品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫、隐性结晶紫的检出限为0.1μg/kg，符合国家标准。采用本专利技术方法检测鳗鱼中孔雀石绿、结晶紫、隐性孔雀石绿、隐性结晶紫的回收率，结果如下：以上所述仅为本专利技术的较佳实施例，凡依本专利技术申请专利范围所做的均等变化与修饰，皆应属本专利技术的涵盖范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）精密称取5 g样品于离心管中，加入20mL混合有机溶剂，然后以10000 rpm/min均质2 min，再加入5g碱性氧化铝，振荡1 min，然后4500 rpm/min离心10 min；（2）取5 mL步骤（1）所得上清液，加5 mL水稀释，得10mL样品溶液；（3）C18‑中性氧化铝固相萃取柱的活化：将C18‑中性氧化铝固相萃取柱先用含2vol%甲酸的乙腈溶液淋洗，然后用含20vol%甲酸的乙腈溶液冲洗除杂，再用蒸馏水冲洗平衡后，使柱中水面高于柱面进行保存；（4）将样品溶液过柱，控制流速为1滴/s，滴完后用5 mL含20vol%乙腈的水溶液淋洗，真空抽干，再用2.0 mL含2vol%甲酸的乙腈溶液洗脱，收集洗脱液于5 mL刻度试管中，加入0.1 mol/L的乙酸铵溶液定容至2.5 mL刻度；（5）涡旋混匀，过滤，上机检验。

【技术特征摘要】
1.一种检测水产品中孔雀石绿、结晶紫及其代谢产物的前处理方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）精密称取5g样品于离心管中，加入20mL混合有机溶剂，然后以10000rpm/min均质2min，再加入5g碱性氧化铝，振荡1min，然后4500rpm/min离心10min；（2）取5mL步骤（1）所得上清液，加5mL水稀释，得10mL样品溶液；（3）C18-中性氧化铝固相萃取柱的活化：将C18-中性氧化铝固相萃取柱先用含2vol%甲酸的乙腈溶液淋洗，然后用含20vol%甲酸的乙腈溶液冲洗除杂，再用蒸馏水冲洗平衡后，使柱中水面高于柱面进行保存；（...

【专利技术属性】
技术研发人员：李昊，曾青竹，李孟研，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：福建,35