调控C4B基因表达的非编码RNA及其用途制造技术

本发明专利技术涉及调控C4B基因表达的非编码RNA及其用途，更具体的涉及非编码RNA—ENSG00000233627、miR‑1197、miR‑1269a、miR‑182‑5p及其在诊治骨肉瘤转移中的应用。发明专利技术人对骨肉瘤转移患者、原发患者及正常人群，从mRNA到miRNA到lncRNA进行多维度研究，提供与骨肉瘤转移密切相关的C4B基因、调控C4B基因表达的lncRNA和miRNA，为骨肉瘤机制研究提供很好的思路，为骨肉瘤临床诊断提供新的分子标志物，具有重要的意义。

Non coding RNA regulating C4B gene expression and its uses

The present invention relates to non-coding RNA regulating C4B gene expression and its application, and more specifically to non-coding RNA-ENSG00000233627, microRNA1197, microRNA1269a, microRNA182_5p and their application in the diagnosis and treatment of osteosarcoma metastasis. Inventors have conducted multidimensional studies of osteosarcoma metastases, primary patients and normal people from mRNA to microRNAs to lncRNAs, providing C4B genes closely related to osteosarcoma metastasis, lncRNA and microRNAs that regulate the expression of C4B genes, providing good ideas for the study of the mechanism of osteosarcoma, and providing new molecular markers for clinical diagnosis of osteosarcoma. Ambition is of great significance.

【技术实现步骤摘要】
调控C4B基因表达的非编码RNA及其用途
本专利技术涉及分子生物学领域，具体的涉及调控C4B基因表达的非编码RNA及其用途，更具体的涉及非编码RNA—ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a、miR-182-5p及其在诊治骨肉瘤转移中的应用。
技术介绍
C4B基因位于第六号染色体短臂，现有的研究显示其与食管鳞癌转移相关(Clinicalsignificanceofmannose-bindinglectin-associatedserineprotease-2expressioninesophagealsquamouscellcarcinoma，Int.J.Cancer:118,2930-2935(2006))。人类基因绝大部分可发生转录，但产物大多数为非编码RNA(ncRNA)，部分ncRNA可通过影响基因及表观遗传学对生命活动起调节作用，长链非编码RNA(lncRNA)与微小RNA(miRNA)是其中最重要的两类，它们在多种生命活动中扮演重要角色。lncRNA为一类转录本长度大于200nt，缺少有效开放性阅读框，不编码蛋白质的RNA分子。其受RNA聚合酶Ⅱ催化转录合成，主要分布于细胞核，少量存在于细胞浆中。研究发现，lncRNA多倾向于折叠成热力学稳定的二级或更高级结构行使功能，部分lncRNA经过剪接成为具有类似于mRNA的polyA尾与启动子结构，且其可在组织器官分化过程中动态的表达与不同的剪接方式，因此lncRNA具有时间及空间特异性。目前lncRNA按转录位置的不同可分为5类:位于基因间区的lncRNA；天然反义链lncRNA；内含子区lncRNA；正义链lncRNA；双向lncRNA。miRNA是一类不具有开放性阅读框架、长度为18-25nt的非编码短序列RNA，其广泛存在于真核生物中。成熟的miRNA5'端有一磷酸基团3'端为羟基，这一特点使它与大多数寡核苷酸和功能RNA的降解片段区别开来.绝大多数miRNA具有高度的保守性、时序性和组织特性。很多研究表明miRNA是lncRNA发挥作用的一个重要环节，在很多疾病的病变细胞中发现某一lncRNA与某些miRNA存在一定的数量关系，且它们的数量变化与相关疾病的发生发展密切相关(FunctionalinteractionsamongmicroRNAsandlongnoncodingRNAs,SeminCellDevBiol，2014，34:9-14)。lncRNA与miRNA都有各自的调控网络，但是两者的调控网络并不是独立存在的，很多时候在一种疾病的发生发展中lncRNA与miRNA的调控是相互依存、相互交织的，共同形成了一个复杂的调控网络。申请人之前曾采用高通量测序研究转移性骨肉瘤患者及健康人的miRNA的表达数据，发现miR-4520-3p、miR-1299和骨肉瘤转移相关(ZL2016100688631和ZL2016100686566)，本申请中，专利技术人进一步对骨肉瘤转移患者、原发患者及正常人群，从mRNA到miRNA到lncRNA进行多维度研究。本专利技术提供与骨肉瘤转移密切相关的C4B基因、调控C4B基因表达的lncRNA和miRNA，为骨肉瘤机制研究提供很好的思路，为骨肉瘤临床诊断提供新的分子标志物，具有重要的意义。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供检测C4B基因及调控其表达的非编码RNA制剂在制备诊断骨肉瘤转移试剂中的应用，所述非编码RNA为lncRNA和/或miRNA。进一步，lncRNA为ENSG00000233627；miRNA为miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p。ENSG00000233627的序列见序列表SEQIDNO1。miR-1197的序列见序列表SEQIDNO2。miR-1269a的序列见序列表SEQIDNO3。miR-182-5p的序列见序列表SEQIDNO4。进一步，诊断骨肉瘤转移试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p转录或基于免疫检测方法检测样本中C4B蛋白的表达情况。优选的，采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p的转录；采用ELISA和/或胶体金试纸条检测样本中C4B蛋白的表达情况。优选的，基于定量PCR方法包括特异性扩增C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p的引物；基于探针杂交方法包括与C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p的核酸序列杂交的探针；所述免疫检测方法包括与C4B蛋白特异性结合的抗体。本专利技术的目的在于提供一种防治骨肉瘤转移试剂，包括下调miR-1269a的转录和/或抑制miR-1269a的活性的试剂，或者下调ENSG00000233627的转录和/或抑制ENSG00000233627的活性的试剂，或者上调miR-1197或miR-182-5p的转录和/或促进miR-1197或miR-182-5p活性的试剂。优选的，采用反义寡核苷酸、miRNA抑制剂、antagomiRs、miRNA海绵、miRNAErasers、TargetMasking和/或多靶点反义寡核苷酸的方法下调miR-1269a的转录和/或阻断miR-1269a的活性。优选的，采用基于RNA的microRNA功能获得性技术和/或基因特异性miRMimics技术上调miR-1197或miR-182-5p的转录和/或促进miR-1197或miR-182-5p的活性。优选人工合成短发夹RNA或通过调控启动子上调miR-1197或miR-182-5p。优选的，采用siRNA或构建干扰载体下调ENSG00000233627的转录和/或抑制ENSG00000233627的活性。进一步，所述试剂还包含药剂学上能接受的载体。本专利技术的目的在于提供上述防治骨肉瘤转移试剂在制备治疗骨肉瘤转移药物或制剂中的应用。本专利技术的目的在于提供上述骨肉瘤转移诊断制剂在制备骨肉瘤转移诊断工具中的应用。定义：现阶段检测miRNA的表达水平的方法主要包括基于高通量测序技术、基于核苷酸杂交和基于PCR的miRNA检测方法。基于探针杂交技术的miRNA检测方法是一种直接检测法，不需要对样本RNA进行预扩增，包括northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术等技术。(1)Northern杂交又称RNA印迹技术为最经典的检测真核生物RNA大小，估计其丰度的实验方法。基本原理如下：首先在载体(如硅片、微球或膜等)上固定miRNA样本，再与经过标记的探针杂交，洗涤多余的杂交探针后进行信号检测；也可以在载体上先固定与靶miRNA序列互补的DNA探针，然后与经过标记的样本miRNA杂交，再进行信号检测。信号标记的方法包括同位素标记、荧光标本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.检测C4B基因或调控其表达的非编码RNA制剂在制备诊断骨肉瘤转移试剂中的应用，所述非编码RNA为ENSG00000233627或靶向ENSG00000233627的miRNA。

【技术特征摘要】
1.检测C4B基因或调控其表达的非编码RNA制剂在制备诊断骨肉瘤转移试剂中的应用，所述非编码RNA为ENSG00000233627或靶向ENSG00000233627的miRNA。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，miRNA为miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p。3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，诊断骨肉瘤转移试剂包括基于高通量测序方法和/或基于定量PCR方法和/或基于探针杂交方法检测样本中C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p转录或基于免疫检测方法检测样本中C4B蛋白的表达情况。4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，采用northern杂交方法、miRNA表达谱芯片、核酶保护分析技术、RAKE法、原位杂交、基于微球的流式细胞术检测样本中C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p的转录；采用ELISA和/或胶体金试纸条检测样本中C4B蛋白的表达情况。5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，基于定量PCR方法包括特异性扩增C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182-5p的引物；基于探针杂交方法包括与C4B、ENSG00000233627、miR-1197、miR-1269a或miR-182...

【专利技术属性】
技术研发人员：石小峰，常鹏，马翠，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11