抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用制造技术

本发明专利技术涉及杂交瘤细胞株及其所分泌单克隆抗体，所述抗体能与人IgM特异性结合，并可用于人IgM的体外检测，尤其适合用于乙型肝炎病毒的早期诊断。本发明专利技术还涉及包括所述杂交瘤细胞株或单克隆抗体的试剂盒。

Anti human IgM monoclonal antibody, hybridoma cell line and its application

The invention relates to a hybridoma cell line and the monoclonal antibody secreted by the hybridoma cell line. The antibody can specifically bind to human IgM and can be used for in vitro detection of human IgM, especially for early diagnosis of hepatitis B virus. The invention also relates to a kit comprising the hybridoma cell line or monoclonal antibody.

【技术实现步骤摘要】
抗人IgM单克隆抗体、其杂交瘤细胞株及应用
本专利技术涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人IgM的单克隆抗体。
技术介绍
免疫诊断试剂是体外诊断试剂的主要类型之一。其利用抗原与抗体互相结合的特异性反应来进行定性或定量的诊断，无论是技术还是市场，此类试剂在目前所有诊断试剂产品中发展最快。病原微生物感染人体后，在刺激诱导体液免疫应答的过程中IgM型抗体最先产生，感染性疾病的早期诊断是进行早期、有效治疗的前提，特别是对于起病急，病情凶险的感染性疾病，早期诊断尤为重要，由于感染后机体最先出现的抗体为IgM型抗体，故检测发病初期患者血液中特异性IgM抗体在临床早期诊断中具有重要的意义。近年来，存在一些关于抗人IgM单克隆抗体的研究，如专利文献WO2010026758A1中公开了一种抗人IgM单克隆抗体，该专利旨在解决多克隆抗体特异性低的问题，并着重考察了单克隆抗体诱导人IgM之间凝集的性质并验证了其抑制非特异反应的效应，但并未关注于该抗人IgM单克隆抗体用于体外诊断试剂时的系统性评价(如、抗体效价、交叉反应性、稳定性、检测灵敏度及特异性等)，因而，该抗体是否适于制备体外诊断试剂是不明确的。又例如，厦门波生生物抗人IgM单克隆抗体是常见的商品化抗人IgM单克隆抗体，但是其稳定性欠佳，从而在用于免疫诊断抗体时存在不足。实际上，筛选用于制备体外诊断试剂的单克隆抗体是一个复杂的过程，首先要获得很好的抗原，来制备足够多的抗体，然后对抗体进行系统的评价，获得具有临床相关性的候选抗体，再开发成检测试剂。其中，抗体效价、交叉反应性、稳定性和临床效果等均是重要的评价因素，如抗体效价高低反映了一定浓度下与抗原反应的最低滴度，滴度越低效价越高；抗体交叉反应性可影响该抗体的特异性；抗体的稳定性会直接影响最终结果的可靠性，而稳定性较差的抗体对保存条件、操作条件要求更高，从而降低了其作为诊断试剂的实用性及结果的可靠性，并不可避免地引起成本的上升；临床试验则用来说明抗体在诊断某种特定疾病时的效果。因此，为了在体外诊断方面的应用，本领域急需系统性评价结果较佳，且尤适用于病原感染的早期诊断的单克隆抗体。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种抗人IgM单克隆抗体、分泌该抗体的杂交瘤细胞株、含上述单克隆抗体或杂交瘤细胞株的试剂盒以及它们在检测人IgM中的用途。通过系统性评价，所述抗体在各方面均有较佳表现，从而适合作为免疫诊断试剂用于制备体外诊断试剂盒，尤其适合制备检测乙型肝炎病毒的早期诊断试剂盒。为此，本专利技术人进行了大量研究，通过人IgM来免疫小鼠，细胞融合后经有限稀释法克隆至少4次，直到达到单克隆，从得到的众多克隆中筛选到1株能稳定分泌抗体的新型杂交瘤细胞株(Hybridoma)IgM-10，并于2018年3月8日将其保藏于中国典型培养物保藏中心，湖北省武汉市武昌珞珈山武汉大学，保藏编号为CCTCCNO:C201852，从而完成了本专利技术。在第一个方面，本专利技术提供了一种杂交瘤细胞株，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201852。在第二个方面，本专利技术提供了一种单克隆抗体，所述单克隆抗体能够与人IgM特异性结合。在一个实施方式中，所述单克隆抗体不与人IgG、鼠IgG、兔IgG或牛IgG结合。在另一个实施方式中，所述单克隆抗体的中值效价为296600且在反复冻融、长期保存、热加速恶劣条件下具有更优的稳定性和可靠性。在一个优选的实施方式中，所述单克隆抗体是由本专利技术的杂交瘤细胞株分泌的抗体。在第三个方面，本专利技术提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本专利技术的杂交瘤细胞株或单克隆抗体。在一个具体实施方式中，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。在一个优选的实施方式中，所述试剂盒为化学发光试剂盒。在另一个实施方式中，所述试剂盒为微流体芯片。在第四个方面，提供了本专利技术的杂交瘤细胞株或单克隆抗体在制备试剂盒中的用途。在一个实施方式中，所述试剂盒是基于免疫检测的试剂盒，优选的，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒。在一个优选的实施方式中，所述试剂盒为化学发光试剂盒。在另一个实施方式中，所述试剂盒是微流体芯片，优选的，所述微流体芯片所基于免疫检测的。在一个实施方式中，所述试剂盒用于检测人IgM。在一个优选的实施方式中，所述人IgM为乙型肝炎病毒核心IgM抗体。在一个具体的实施方式中，所述病原为乙型肝炎病毒。此外，还提供了本专利技术的杂交瘤细胞株或本专利技术的单克隆抗体在制备用于乙型肝炎病毒诊断的试剂盒中的用途，优选用于乙型肝炎病毒早期诊断的试剂盒。本专利技术的单克隆抗体的有益效果在于，首先，其抗体效价比体外诊断中通常使用的商购人IgM抗体至少高一个数量级，有着更佳的免疫效果；其次，本专利技术的抗体与人IgG、鼠IgG、兔IgG、牛IgG无交叉反应，具有很好的特异性结合能力；再次，其具有比商购的人IgM抗体更优的长期与热稳定性，也就是说延长了使用期限并能接受相对宽松的储存条件和操作条件，从而大大节约了成本；最后，临床实验表明本专利技术的单克隆抗体可用于乙型肝炎病毒核心抗体IgM检测的化学发光试剂盒，检测灵敏度可达100％，检测特异性可达100％。也就是说，本专利技术的单克隆抗体在抗体效价、交叉反应性、稳定性和检测效果等多个方面均展现出了很好的性能，从而本专利技术提供了一种经系统性评价可用于体外诊断且综合能力突出的抗人IgM单克隆抗体。附图说明图1示出了本专利技术的抗体IgM-Ab10的SDS-PAGE电泳图；图2为示出了本专利技术的抗体IgM-Ab10与两种商业化抗人IgM抗体的抗体效价测定结果，其中横坐标为Log(稀释倍数)，纵坐标为OD450。具体实施方式下文将结合具体实施方式和实施例，具体阐述本专利技术，本专利技术的优点和各种效果将由此更加清楚地呈现。本领域技术人员应理解，这些具体实施方式和实施例是用于说明本专利技术，而非限制本专利技术。在整个说明书中，除非另有特别说明，本文使用的术语应理解为如本领域中通常所使用的含义。因此，除非另有定义，本文使用的所有技术和科学术语具有与本专利技术所属领域技术人员的一般理解相同的含义。若存在矛盾，本说明书优先。抗体如本文所使用的，术语“抗体”是指免疫球蛋白分子，包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体、全人源抗体、CDR移植抗体和抗体构建体，如单链Fv(scFv)或抗体融合蛋白；此外，还涉及重组地或合成地产生/合成的抗体。在优选的实施方式中，抗体是指产生自保藏编号为CCTCCNO:C201852的杂交瘤细胞株的抗体。“抗体片段”通常包括亲代抗体的抗原结合区，轻链和/或重链可变区，一个或多个(如六个)CDR的至少一部分，其保留亲代抗体的至少一定的结合特异性。特别地，在本文中亲代抗体是指产生自保藏编号为CCTCCNO:C201852的杂交瘤细胞株的抗体。抗体片段的实例包括但不限于Fab、Fab'、F(ab')2和Fv片段；双体分子；线性抗体；单链抗体分子，例如，sc-Fv；以及由抗体片段形成的多特异性抗体。通常，当基于摩尔来表达活性时，片段保留至少50％的对人IgM的结合活性。优选地，和亲代抗体相比，片段保留至少60％、70％、80％、90％、95％或100％的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种杂交瘤细胞株IgM‑10，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO:C201852。

【技术特征摘要】
1.一种杂交瘤细胞株IgM-10，其保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:C201852。2.一种单克隆抗体，所述单克隆抗体由权利要求1所述的杂交瘤细胞株所分泌。3.一种试剂盒，所述试剂盒包括权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体。4.根据权利要求3所述的试剂盒，所述试剂盒为胶体金免疫试剂盒、化学发光试剂盒、放射免疫试剂盒、酶联免疫试剂盒或荧光免疫试剂盒，或者所述试剂盒是微流体芯片；优选为化学发光试剂盒。5.权利要求1所述的杂交瘤细胞株或权利要求2所述的单克隆抗体在制备试剂盒...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄家菊，王磊，舒川，李岚敏，何涛，龙腾镶，
申请(专利权)人：四川迈克生物新材料技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川,51