HIV-2重组抗原及其制备方法、用途技术

本发明专利技术涉及HIV‑2重组抗原，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示或者由如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列经取代、缺失或添加一个或者几个氨基酸获得的衍生的氨基酸序列，所述衍生的氨基酸序列具有SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的活性。本发明专利技术的重组蛋白可用于HIV检测，在开发体外诊断试剂盒时具有改善的性能。本发明专利技术还涉及相应的多核苷酸、构建体、宿主细胞、融合蛋白、组合物、试剂盒和制备方法。

【技术实现步骤摘要】
HIV-2重组抗原及其制备方法、用途
本专利技术涉及HIV检测领域，具体涉及用于HIV-2免疫检测的重组抗原。
技术介绍
艾滋病(获得性免疫系统缺陷症，AIDS)是当今世界瞩目的严重危害人类健康的病毒性疾病。引起艾滋病的主要病原是人I型和II型免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2)。HIV感染者因免疫缺陷程度加深，从无症状携带者发展至严重免疫功能衰竭，导致多种致死性疾病的发展而死亡。根据WHO统计，截止到2018年底全球HIV感染者估计为3790万例，仅2018年全球新HIV感染者达170万例。在发展中国家，由于经济、文化和教育等多方面的原因，HIV的流行越演越烈，部分国家已失去对疾病流行的控制，而我国也趋于爆发性流行的前期阶段。HIV基因全长约9.8kb，含有3个结构基因(gag、pol、env)、2个调节基因(tat反式激活因子、rev毒粒蛋白表达调节子)和4个辅助基因(nef负调控因子、vpr病毒r蛋白、vpu病毒u蛋白和vif毒粒感染性因子)。HIV是一种变异性很强的病毒，各基因的变异程度不同，env基因变异率最高。根据HIV基因差异，分为HIV-1型和HIV-2型。在HIV-1和HIV-2两型之间，其核苷酸序列有40％-60％的同源性。根据编码包膜蛋白的env基因和编码壳蛋白的gag基因序列的同源性，HIV-1型又进一步分为3个组，M亚型组(main即主要组)、O亚型组(outline即外围组)和N亚型组(new、non-M、non-O新组或非M非O组)，其中M组有A、B、C、D、E、F、G、H、I、J、K11个亚型。此外，近年来发现多个流行重组型。O组是1990年从喀麦隆和加蓬分离到的，与M组其他亚型的氨基酸序列只有50％的同源性。N组是最近才从两名喀麦隆病人分离到的，在系统树上，既不属于M组，也不属于O组的一组新病毒，故称N组。HIV-2的生物学特性与HIV-1相似，并至少有A、B、C、D、E、F、G7个亚型。我国以HIV-1为主要流行株。但1999年起在部分地区发现并证实我国有少数HIV-2型感染者。及时发现HIV感染者并鉴定HIV亚型对于追踪流行趋势、及时做出诊断、开发新的诊断试剂和新药研制、疫苗开发均具有重要意义。艾滋病的防治方向主要为疫苗、诊断和治疗这三个方面，其中，HIV疫苗的研制至今仍未获得成功；HIV的治疗不仅价格昂贵，而且效果极其有限；这使得HIV的诊断成为艾滋病防治的最基础、最有效的手段。自1985年第一代ELISA试剂问世以来，随着医学技术的飞速发展，包被抗原已从第一代的全病毒裂解物发展为目前已基因重组与多肽抗原包被和标记的有着良好敏感性和特异性的第三代双抗原夹心试剂，检测亚型包括HIV-1、HIV-2和HIV-1型的O亚型，窗口期由10周缩短至3～4周。为避免窗口期传染，目前已研制出同时检测抗原抗体的第四代ELISA筛查试剂。抗原的质量是决定HIV检测试剂性能的最关键因素。而HIV检测性能的提升既在于检测的灵敏度和特异性，从而确保检测结果的准确性，同时还在于试剂的稳定性，以实现在较复杂的环境下进行检测并获得准确结果。据此，在本领域中存在着对HIV抗原进行改善以提高HIV检测试剂性能的强烈需求。
技术实现思路
为了提高HIV检测试剂性能，本专利技术人对截短型HIV-2gp36抗原进行研究，通过大量实验，从多种不同的截短型抗原中选取了一种特异性高、稳定性好，且满足免疫诊断试剂开发需求的HIV-2重组gp36抗原，从而完成本专利技术。在第一方面，本专利技术提供一种HIV-2重组抗原，所述重组抗原：1)包括如SEQIDNO.1所示的氨基酸序列；或者2)由1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或者几个(如两个、三个、四个、五个或六个)氨基酸获得的衍生的氨基酸序列，所述衍生的氨基酸序列具有1)中所示的氨基酸序列的活性。需要说明的是，本专利技术的重组抗原是一种截短型的HIV-2gp36重组抗原。如下文实施例部分中所证实的，与结构类似的其它截短型gp36重组抗原相比，本专利技术的重组抗原所制备的试剂盒进行检测时与现有试剂盒具有更高的符合率(100％)。在第二方面，本专利技术提供了一种多核苷酸序列，所述多核苷酸序列：a)编码本专利技术的重组抗原的氨基酸序列；或者b)与a)互补。在一个具体的实施方式中，本专利技术的多核苷酸序列如SEQIDNO.5所示。在第三方面，本专利技术提供了一种多核苷酸构建体，所述多核苷酸构建体含有本专利技术的多核苷酸。在第四方面，本专利技术提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本专利技术的多核苷酸构建体或本专利技术的多核苷酸。在第五方面，本专利技术提供了一种融合蛋白，其包括本专利技术的重组抗原，以及一个或更多个额外的蛋白。在一些实施方式中，一个或更多个额外的蛋白可以是用于检测HIV抗体的其它抗原。在具体的实施方式中，用于检测HIV抗体的其它抗原可以是HIV-2gp41抗原和/或HIV-2gp120抗原。在一些实施方式中，相邻的重组抗原与额外的蛋白之间，以及相邻的额外的蛋白之间可通过连接子相连。在第六方面，本专利技术提供了一种用于检测HIV的组合物，所述组合物包括本专利技术的重组抗原或本专利技术的融合蛋白。在一些实施方式中，本专利技术的重组抗原可包被在固相载体上。在一些实施方式中，本专利技术的融合蛋白可包被在固相载体上。在一些实施方式中，本专利技术的重组抗原可带有可检测的标记。在一些实施方式中，本专利技术的融合蛋白可带有可检测的标记。在第七方面，提供了本专利技术的重组抗原或融合蛋白在制备用于检测HIV抗体的试剂盒中的用途。在一些实施方式中，本专利技术的试剂盒用于检测HIV-1抗体和HIV-2抗体。可以理解，在对HIV-1和HIV-2进行检测的情况下，本专利技术的试剂盒可额外包括用于检测HIV-1的反应物。在一些实施方式中，本专利技术的试剂盒用于检测HIV-2抗体。在第八方面，本专利技术提供了一种HIV-2重组抗原的制备方法，包括：1)将编码本专利技术的重组抗原的多核苷酸导入宿主细胞中，或者将含所述多核苷酸的多核苷酸构建体转入宿主细胞中；2)在适合产生重组抗原的条件下培养步骤1)中的所述宿主细胞；以及3)任选地从步骤2)获得培养物中分离所述重组抗原。在第九方面，本专利技术提供了一种重组抗原，其通过本专利技术的制备方法生产。本专利技术获得了以下有益效果：一方面，通过对HIV-2gp36抗原的截取位置进行优化，本专利技术最大限度地提高了检测HIV时特异性。另一方面，通过国家参考品检测，证实本专利技术重组抗原的灵敏度满足诊断试剂开发的需求。又一方面，本专利技术的重组抗原具有优异的热稳定性，在延长了保存周期同时适用于复杂的环境；此外，本专利技术的重组抗原具有很好的冻融稳定性，增加了重复使用的频次。可以理解，由于这些性质的存在，大大降低了HIV的检测成本及使用限制。附图说明图1示出了实施例2中gp本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种HIV-2重组抗原，其氨基酸序列：/n1)如SEQ ID NO.1所示；或者/n2)由1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或者几个氨基酸获得的衍生的氨基酸序列，所述衍生的氨基酸序列具有1)中所示的氨基酸序列的活性。/n

【技术特征摘要】
1.一种HIV-2重组抗原，其氨基酸序列：
1)如SEQIDNO.1所示；或者
2)由1)中的氨基酸序列经过取代、缺失或添加一个或者几个氨基酸获得的衍生的氨基酸序列，所述衍生的氨基酸序列具有1)中所示的氨基酸序列的活性。


2.一种多核苷酸，所述多核苷酸：
a)编码权利要求1所述的重组抗原；
b)如SEQIDNO.5所示；或者
c)与a)或b)互补。


3.一种多核苷酸构建体，其含有根据权利要求2所述的多核苷酸。


4.一种宿主细胞，其含有如权利要求3所述的多核苷酸构建体或者权利要求2所述的多核苷酸。


5.一种融合蛋白，所述融合蛋白由权利要求1所述的重组抗原以及一种或更多种其他蛋白组成，优选地，所述重组抗原与一种或更多种其他蛋白通过连接子两两相连。


6.用于检测HIV的组合物，其包括如权利要求1所述的重组抗原或权利要求5所述的融合蛋白；优选...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾红，蔡泉蜀，干盈盈，何涛，
申请(专利权)人：四川迈克生物新材料技术有限公司，
类型：发明
国别省市：四川;51