用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法技术

本发明专利技术公开了一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，制备时采集怀孕母牛的胎牛血液获得血浆，采用含有体积含量5‑8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2‑0.6％柠檬酸钠的水溶液、胎牛血液均匀混合、离心分离出血浆；将氯化钠、磷酸二氢钾、磷酸二氢钾、去离子水混合、调节pH，再加入血浆搅拌均匀、离心分离取上清液、半透膜析出收集半透膜上部残留物；将半透膜上部残留物加入辛酸液调节pH、加入硅藻土、过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。本发明专利技术提取胎牛血清的工艺简单、各参数易控制，且保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，适于体外细胞的培养。

Extraction method of fetal bovine serum for in vitro cell culture

The invention discloses a method for extracting fetal bovine serum from cell culture in vitro, collecting fetal bovine blood from pregnant cows to obtain blood plasma, using a injection containing 5 volume content of 8% glucose, a water solution containing 0.2 sodium citrate with a mass content of 0.6% sodium citrate, a homogeneous mixture of fetal cattle blood and centrifugation for separating the bleeding pulp. The mixture of sodium chloride, potassium dihydrogen phosphate, potassium dihydrogen phosphate and deionized water was mixed and pH was adjusted, then plasma was added and the supernatant and semi permeable membrane was separated to collect the upper residue of the semi permeable membrane, and the upper remnants of the semi permeable membrane were added to the octanic acid to adjust the pH, the silica alga soil, the filtration and separation, and the filtrate collected the supernatant. That is, to get fetal bovine serum. The technology of extracting fetal bovine serum is simple, the parameters are easily controlled, and the nature of fetal bovine serum is stable, the cost of production is low, the purity of fetal bovine serum is high, and it is suitable for the culture of cells in vitro.

【技术实现步骤摘要】
用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法
本专利技术属于血清制备
，特别涉及一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法。
技术介绍
血清是由血浆去除纤维蛋白而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。现有的胎牛血清制备工艺复杂、成本高，且纯度低，不利于体外细胞培养。
技术实现思路
针对现有技术中存在的技术问题，本专利技术提供一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案是：一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，包括以下步骤：1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；4)将已存放血浆的采血试管置入-22℃～0℃环境下保存备用；5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300mL～700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节pH为7.3～7.5，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25～38℃，静置8～20min，得混合液C；6)将上述的混合液C放入离心机中离心分离8～20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8～2.4MPa，温度设定为38～47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；7)将半透膜上部残留物按0.3～10.0％的体积比例加入辛辛酸液，调节pH至4.0～7.5，搅拌时间0.3～5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3～1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。作为优选，所述步骤1)中采用含有体积含量6％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.5％柠檬酸钠的水溶液进行混合得混合液A。与现有技术相比，本专利技术所具有的有益效果是：本专利技术提取胎牛血清的工艺简单、易操作，能够保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养。具体实施方式为使本领域技术人员更好的理解本专利技术的技术方案，下面结合具体实施例对本专利技术作详细说明。一种用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，包括以下步骤：1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；4)将已存放血浆的采血试管置入-22℃～0℃环境下保存备用；5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300mL～700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节pH为7.3～7.5，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25～38℃，静置8～20min，得混合液C；6)将上述的混合液C放入离心机中离心分离8～20min，转速设定为3000-10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8～2.4MPa，温度设定为38～47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；7)将半透膜上部残留物按0.3～10.0％的体积比例加入辛辛酸液，调节pH至4.0～7.5，搅拌时间0.3～5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3～1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。作为优选，所述步骤1)中采用含有体积含量6％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.5％柠檬酸钠的水溶液进行混合得混合液A。本专利技术提取胎牛血清的工艺简单、易操作，能够保证胎牛血清的性质稳定、生产成本低，胎牛血清纯度高，收率高，制得的胎牛血清极适于体外细胞的培养。以上实施例仅为本专利技术的示例性实施例，不用于限制本专利技术，本专利技术的保护范围由权利要求书限定。本领域技术人员可以在本专利技术的实质和保护范围内，对本专利技术做出各种修改或等同替换，这种修改或等同替换也应视为落在本专利技术的保护范围内。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；4)将已存放血浆的采血试管置入‑22℃～0℃环境下保存备用；5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300mL～700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节pH为7.3～7.5，将上述所收集的血浆倒入容器中，搅拌均匀，温度设定为25～38℃，静置8～20min，得混合液C；6)将上述的混合液C放入离心机中离心分离8～20min，转速设定为3000‑10000r/min，取上清液，在容器中部安装一半透膜，将上清液倒在半透膜上方，密封，对容器顶部加压至0.8～2.4MPa，温度设定为38～47℃，待无液体从半透膜析出时，停止加压，收集半透膜上部残留物备用；7)将半透膜上部残留物按0.3～10.0％的体积比例加入辛辛酸液，调节pH至4.0～7.5，搅拌时间0.3～5小时；处理完毕，按100ml溶液加入0.3～1.0g硅藻土，搅拌均匀后，将消化液泵入板框式压滤机进行过滤分离，过滤收集上清液即得胎牛血清。...

【技术特征摘要】
1.用于体外细胞培养的胎牛血清的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：1)采用含有体积含量5％～8％葡萄糖的注射液、含有质量含量0.2％～0.6％柠檬酸钠的水溶液进行混合，将上述两者混合后的混合液A置入取血容器内充分滋润容器内壁；2)将胎牛血液置入上述滋润过的取血容器内，摇动使其与胎牛血液均匀混合；3)将混合均匀的含有胎牛血液的混合液B置入采血试管，保持血液在39℃以下恒温状态，然后将采血试管在离心机中以30000～14000r/min转速旋转20分钟，分离出血浆、血小板、血球，将所得血浆、血小板、血球分别采用采血试管分离存放；4)将已存放血浆的采血试管置入-22℃～0℃环境下保存备用；5)取6g～12g氯化钠、0.1g～0.5g磷酸二氢钾和1.4g～2.4g磷酸二氢钾放入容器中，向其中加入300mL～700mL去离子水，搅拌均匀，使用质量分数为18％～25％的盐酸溶液调节pH为7.3～7.5，将...

【专利技术属性】
技术研发人员：王翔，
申请(专利权)人：天津博奥科生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12