一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法技术

本发明专利技术属于药物分析检测技术领域，具体涉及一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法。本发明专利技术中以赛璐IC柱为色谱柱，流动相为乙醇、二乙胺与三氟乙酸体积比100:0.15:0.1的混合物，柱温为25‑40℃，流速为1ml/min，检测波长为210nm。本发明专利技术具有良好的专属性、灵敏度、重现性，能准确检测阿维巴坦钠中光学异构体的含量，从而保证其良好的临床效果。

【技术实现步骤摘要】
一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法
本专利技术属于药物分析检测
，具体涉及一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法。
技术介绍
阿维巴坦钠(avibactamsodium)，化学名称：[(2S,5R)-2-酰胺基-7-氧基-1,6-二氮杂二环[3.2.1]辛烷-6-基]磺酸钠，结构式是一种新型的β-内酰胺酶抑制剂。阿维巴坦与经典β-内酰胺酶抑制剂(舒巴坦、他唑巴坦、克拉维酸)的作用机制有本质的区别。在抑制β-内酰胺酶的过程中，阿维巴坦自身结构可经逆反应恢复，因而具有长效的抑酶作用。阿维巴坦本身没有明显的抗菌活性，但与头孢洛林、头孢他啶、氨曲南联用临床效果较好。在阿维巴坦钠的结构中，有两个手性碳，理论上存在四个光学异构体，不同的光学异构体临床活性差异很大，有些异构体甚至有较强的不良反应。根据SFDA手性药物研究指导原则，含3个手性以下的化合物，不能仅仅用比旋来控制光学异构体含量，原则上需要进行手性色谱拆分控制，以保障临床用药安全。目前尚未有关于阿维巴坦钠光学异构体分析检测的方法。在阿维巴坦钠的结构中，有两个手性碳，理论上存在四个光学异构体，不同的光学异构体临床活性差异很大，有些异构体甚至有较强的不良反应。根据SFDA手性药物研究指导原则，含3个手性以下的化合物，不能仅仅用比旋来控制光学异构体含量，原则上需要进行手性色谱拆分控制，以保障临床用药安全。目前尚未有关于阿维巴坦钠光学异构体分析检测的方法。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供了一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法。本专利技术中选择赛璐IC柱为色谱柱，流动相为乙醇、二乙胺与三氟乙酸体积比100:0.15:0.1的混合物，可实现阿维巴坦钠及其光学异构体的分离检测，为阿维巴坦钠光学异构体的分析提供了一种可靠的技术手段。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法，所述方法采用的色谱柱为大赛璐IC柱(250*4.6mm5um)；流动相为醇：胺：羧酸体积比100:0.15:0.1的混合物。优选地，所述高效液相色谱检测采用如下的色谱条件：流动相流速为0.5-2.0ml/min，色谱柱柱温为25-40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为200-230nm。进一步优选地，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃；检测器的检测波长为210nm。优选地，所述色谱柱的固定相为硅胶表面共价键合有纤维素-三(3,5-二氯苯基氨基甲酸酯)，填料粒径为2-10μm，柱长为100-250mm，柱径为2.1-4.6mm。优选地，所述醇选自甲醇、乙醇、丙醇中的一种或两种以上的混合物；所述胺选自二乙胺、三乙胺中的一种；所述酸选择甲酸、乙酸、三氟乙酸中的一种。进一步优选地，流动相为以乙醇、二乙胺与三氟乙酸体积比100：0.15：0.1的混合物。高效液相色谱法是一种广泛应用于手性分离的分离技术，一般分为正相色谱法和反向色谱法，而正相色谱中异构体的分离优于反向体系。虽然高效液相色谱法广泛应用于手性分离，但是目前并没有高效液相色谱分离阿维巴坦钠及其光学异构体的报道。专利技术人发现，阿维巴坦钠在水中溶解性较好，但是采用不同固定相的手性色谱柱(如大赛路IA、IB、IC、OZ-RH)并选择反向色谱体系时，均无法有效分离4个光学异构体；而采用正己烷/异丙醇、正己烷/乙醇、正己烷/甲醇的正相体系时，阿维巴坦钠在流动相中溶解度极低，满足不了检测要求。本专利技术的有益效果：本专利技术中选择赛璐IC柱为色谱柱，流动相为乙醇、二乙胺与三氟乙酸体积比100:0.15:0.1的混合物，色谱柱柱温为25-40℃，检测波长为210nm，可实现阿维巴坦钠及其光学异构体的分离检测，为阿维巴坦钠及其光学异构体的分析提供了一种可靠的技术手段。本专利技术具有良好的专属性、灵敏度、重现性，能准确检测阿维巴坦钠中光学异构体的含量，从而保证其良好的临床效果。附图说明图1为分离度实验的色谱图；图2为样品测试实验的色谱图；图3为柱温30℃时样品加入异构体实验的色谱图；图4为柱温40℃时样品加入异构体实验的色谱图；图5为柱温25℃时样品加入异构体实验的色谱图。具体实施方式以下结合具体实施例，对本专利技术作进一步说明。实施例1分离度实验、样品测试及加样实验仪器与试剂：岛津2030C3D高效液相色谱仪；乙醇为色谱级，三氟乙酸和二乙胺为分析级。样品：阿维巴坦钠、其对映异构体(2R，5S)阿维巴坦钠和2个非对映异构体。实验方法：色谱条件：大赛璐IC柱(250*4.6mm5um)；以乙醇：二乙胺：三氟乙酸(100:0.15:0.1)为流动相，流速1.0ml/min；柱温为30℃；检测器为紫外检测器，检测波长为210nm。分离度实验：分别取阿维巴坦钠和其对映异构体(2R，5S)阿维巴坦钠各约10mg，加20ml乙醇溶解，取10μl注入液相色谱仪，色谱图如图1所示。样品测试实验：取实际生产的阿维巴坦钠约20mg，加20ml乙醇溶解，取10μl注入液相色谱仪，色谱图如图2所示。样品加入异构体实验：取阿维巴坦钠3个异构体各5mg，加乙醇20ml溶解，取1ml，加入到样品测试实验的溶液中，摇匀；取10μl注入液相色谱仪，色谱图如图3所示。实验结果与讨论：阿维巴坦钠与对映异构体分离度为4.2；样品中检测到非对映异构体0.1％；样品加入异构体均能有效检出且分离良好，表明本专利技术能有效检测阿维巴坦钠异构体含量。实施例2柱温对分离的影响仪器与试剂：岛津2030C3D高效液相色谱仪；乙醇为色谱级，三氟乙酸和二乙胺为分析级。样品：阿维巴坦钠、对映异构体(2R，5S)阿维巴坦钠和2个非对映异构体。实验方法：色谱条件1：大赛璐IC柱(250*4.6mm5um)；以乙醇：二乙胺：三氟乙酸(100:0.15:0.1)为流动相，流速1.0ml/min；柱温为40℃；检测波长为210nm。色谱条件2：大赛璐IC柱(250*4.6mm5um)；以乙醇：二乙胺：三氟乙酸(100:0.15:0.1)为流动相，流速1.0ml/min；柱温为25℃；检测波长为210nm。样品测试实验：取实际生产的阿维巴坦钠约20mg，加20ml乙醇溶解。样品加入异构体实验：取阿维巴坦钠3个异构体各5mg，加乙醇20ml溶解，取1ml，加入到样品测试实验的溶液中，摇匀；取10μl，分别在色谱条件1、色谱条件2条件下运行，所得色谱图分别如图4、图5所示。实验结果及讨论：柱温40℃，阿维巴坦钠与其对映异构体分离度为3.8；柱温25℃，阿维巴坦钠与其对映异构体分离度为4.0。一般温度对手性分离影响较大，低温有利于手性识别，高温降低流动相粘度，有利于传质。本专利技术在25-40℃范围内，均能有效分离阿维巴坦钠及其异构体。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱为大赛璐IC柱(250*4.6mm 5um)；流动相为醇：胺：羧酸体积比100:0.15:0.1的混合物。

【技术特征摘要】
1.一种阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱为大赛璐IC柱(250*4.6mm5um)；流动相为醇：胺：羧酸体积比100:0.15:0.1的混合物。2.根据权利要求1所述的阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱检测采用如下的色谱条件：流动相流速为0.5-2.0ml/min，色谱柱柱温为25-40℃，检测器采用紫外检测器，检测波长为200-230nm。3.根据权利要求2所述的阿维巴坦钠光学异构体的高效液相色谱检测方法，其特征在于，所述流动相流速为1.0ml/min；色谱柱柱温为30℃；检测器的检测波长为210nm。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：柯兴斌，左斌海，赵红升，张勇，付长安，
申请(专利权)人：珠海优润医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44