高生存性小球藻CV-6、其筛选方法及其应用技术

本发明专利技术公开了一种高生存性小球藻CV‑6，它是从我国河北省水源分离筛选出来的藻类，该小球藻CV‑6的叶绿素含量高，对营养物质具有高效的转化能力，在沼液废水中具有高效的净化处理能力；本发明专利技术还提供了高生存性小球藻CV‑6的筛选方法，包括富集、分离纯化和筛选步骤，筛选方法简单，过程易于控制，筛选的小球藻纯度较高。本发明专利技术适用于筛选高生存性小球藻CV‑6，进一步地应用于牛养殖场发酵池废水处理中。

High survival Chlorella CV-6, its screening method and its application

The invention discloses a high survival Chlorella CV 6, which is a kind of algae isolated from the water source of Hebei province. The chlorophyll content of the Chlorella CV 6 is high, it has high efficiency in transforming the nutrient substance, and has the high efficiency in the purification of the wastewater. The invention also provides the high survivability Chlorella CV _6screening method, including enrichment, purification and screening steps, screening method is simple, easy to control the process, screening Chlorella high purity. The invention is suitable for screening high survival Chlorella CV 6 and is further applied to the treatment of wastewater from fermentation tank of cattle farms.

【技术实现步骤摘要】
高生存性小球藻CV-6、其筛选方法及其应用
本专利技术属于微生物工程领域，涉及一种高生存性小球藻CV-6、其筛选方法及其应用。
技术介绍
微藻属于光能自养单细胞生物，其资源丰富、种类多、光合效率高及适应性强。它没有根茎叶等植物所特有的特征结构，但通常含有叶绿素a作为其主要的光合色素，因此微藻具有光合植物以及微生物的双重特色，微藻的光合效率是普通绿色植物的很多倍，每年固定的CO2超过全球净固定量的40%。利用微藻处理养殖废水，可以在处理污水的同时获得高价值的藻株，有助于养殖业的长期发展。而且微藻的培养不占用耕地，在自然界分布广泛，因此可以利用我国广阔的非耕种用地进行养殖，微藻产业非常适合在我国发展。近年来，奶牛养殖业的工业系统越来越集约化、专业化和规模化，但是随之而来的是大量排泄物引发的一系列环境问题。奶牛场的废水主要由牛粪、牛奶和牛尿组成，此类养殖废水COD、BOD、NH3-N和SS指标浓度高。虽然微藻可以处理养殖废水，但不同藻种的处理效率不同，针对不同养殖废水的处理效率也不同，因此需要根据不同的养殖废水筛选特异性的藻株，以提高处理效率。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题，是提供一种高生存性小球藻CV-6，它是从我国河北省水源分离筛选出来的藻类，该小球藻CV-6的叶绿素含量高，对营养物质具有高效的转化能力，在沼液废水中具有高效的净化处理能力；本专利技术的另外一个目的，是提供了一种高生存性小球藻CV-6的筛选方法，依次经由富集、分离纯化及筛选得到，筛选方法简单，过程易于控制，筛选的小球藻纯度较高；本专利技术还有一个目的，是提供了一种高生存性小球藻CV-6在沼液废水净化处理中的应用。为解决上述技术问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种高生存性小球藻CV-6（Chlorellaellipsoidea），它是从我国河北省水源分离筛选出来的藻类，该株藻已于2018年1月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，生物学命名为椭圆小球藻（Chlorellaellipsoidea），该生物材料为存活状态，保藏编号为：CGMCCNo.15207。作为本专利技术高生存性小球藻CV-6的一种限定，其18SrDNA的基因序列如下：TCAAGTTTTTTTCCCTATCAGCTTTCGATGGTAGGATAGAGAGCCTACCATGGTGGTAACGGGTGACGGAGGATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTGACACAGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATACTGGGCCTTTTCAGGTCTGGTAATTGGAATGAGTACAATCTAAACCCCTTAACGAGGATCAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTTAAGTTGCTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCGGGTGGGGCTTGCCGGTCCGCCGTTTCGGTGTGCACTGGCAGGGCCCACCTTGTTGCCGGGGACGGGCTCCTGGGCTTCGCTGTCCGGGACTCGGAGTCGGCGCTGTTACTTTGAGTAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTACGCTCTGAATACATTAGCATGGAATAACACGATAGGACTCTGGCCTATCCTGTTGGTCTGTAGGACCGGAGTAATGATTAAGAGGGACAGTCGGGGGCATTCGTATTTCATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATGAAAGACGAACTCGGG。本专利技术还提供了高生存性小球藻CV-6的筛选方法，它按照如下的步骤顺序依次进行：（1）富集将本地污水稀释10倍，经过16层纱布过滤，于3000r/min离心15min，取上清加入到BG11液体培养基中，于25-29℃、光照强度2000-4000Lux、全光照条件下培养10-15天，每天摇动2-3次；（2）分离纯化取富集的藻液在BG11固体培养基中划线，倒置，于25-29℃、光照强度2000-4000Lux，全光照条件下培养至单菌落出现；将获得的单克隆藻种分别接到100mLBG11液体培养基中，于25-29℃，光照强度2000-4000Lux，全光照条件下培养7-15d后，分别取样测其生物量，选取生物量大、不贴壁生长的藻株接入新的BG11液体培养基中进行培养，用于筛选；（3）筛选在3-5倍稀释的奶牛养殖场沼液中接入步骤（2）经BG11液体培养基培养的用于筛选的藻液，置于25℃、光照强度8000-10000Lux、光照时间12-24h的条件下培养，每天取样测其生物量，选择能在废水中较好生长的微藻，获得目的小球藻。作为本专利技术高生存性小球藻CV-6的筛选方法的一种限定，所述步骤（1）中，BG11液体培养基包括如下组分：每升培养基中含有NaNO31.5g、Na2NO30.02g、K2HPO4·3H2O0.04g、MgSO4·7H2O0.075g、CaCl20.028g、EDTA-Na20.001g、柠檬酸0.006g、柠檬酸铁铵0.006g、微量元素溶液1mL；所述微量元素溶液每升溶液中含有，H3BO32.86g、MnCl2·4H2O1.86g、ZnSO4·7H2O0.22g、Na2MoO4·2H2O0.39g、CuSO4·5H2O0.08g、Co(NO3)2·6H2O0.05g，该培养基调节PH至7.1。作为高生存性小球藻CV-6的筛选方法的另一种限定，所述步骤（2）中，BG11固体培养基包括如下组分：每升培养基中含有NaNO31.5g、Na2NO30.02g、K2HPO4·3H2O0.04g、MgSO4·7H2O0.075g、CaCl20.028g、EDTA-Na20.001g、柠檬酸0.006g、柠檬酸铁铵0.006g、琼脂粉20g、微量元素溶液1mL；所述微量元素溶液每升溶液中含有，H3BO32.86g、MnCl2·4H2O1.86g、ZnSO4·7H2O0.22g、Na2MoO4·2H2O0.39g、CuSO4·5H2O0.08g、Co(NO3)2·6H2O0.05g，该培养基调节PH至7.1。本专利技术还提供了高生存性小球藻CV-6的应用，所述高生存性小球藻CV-6应用于奶牛养殖场沼液污水处理中。由于采用了上述的技术方案，本专利技术与现有技术相比，所取得的技术进步在于：本专利技术提供的一种高生存性小球藻CV-6，叶绿素含量高，对营养物质具有高效的转化能力，在沼液废水中具有高效的净化处理能力；本专利技术提供的小球藻CV-6筛选方法简单、耗能少、时间短，且筛出的小球藻处理奶牛养殖场沼液的效率高，且生物量增长快。本专利技术提供的小球藻CV-6能利用奶牛养殖场的发酵池的废水营养物质进行生长，无需再外来添加营养成分，在降低废水中的COD、TN、TP净化水质的同时，提高了微藻的生物量，又进一步降低了成本，且操作简单、效果明显。本专利技术适用于筛选高生存性小球藻CV-6，进一步地应用于牛养殖场发酵池废水处理中。本专利技术下面将结本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种高生存性小球藻CV‑6，其特征在于：它是从我国河北省水源分离筛选出来的藻类，该株藻已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.15207。

【技术特征摘要】
1.一种高生存性小球藻CV-6，其特征在于：它是从我国河北省水源分离筛选出来的藻类，该株藻已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCCNo.15207。2.根据权利要求1所述的高生存性小球藻CV-6，其特征在于：其18SrDNA的基因序列如下：TCAAGTTTTTTTCCCTATCAGCTTTCGATGGTAGGATAGAGAGCCTACCATGGTGGTAACGGGTGACGGAGGATTAGGGTTCGATTCCGGAGAGGGAGCCTGAGAAACGGCTACCACATCCAAGGAAGGCAGCAGGCGCGCAAATTACCCAATCCTGACACAGGGAGGTAGTGACAATAAATAACAATACTGGGCCTTTTCAGGTCTGGTAATTGGAATGAGTACAATCTAAACCCCTTAACGAGGATCAATTGGAGGGCAAGTCTGGTGCCAGCAGCCGCGGTAATTCCAGCTCCAATAGCGTATATTTAAGTTGCTGCAGTTAAAAAGCTCGTAGTTGGATTTCGGGTGGGGCTTGCCGGTCCGCCGTTTCGGTGTGCACTGGCAGGGCCCACCTTGTTGCCGGGGACGGGCTCCTGGGCTTCGCTGTCCGGGACTCGGAGTCGGCGCTGTTACTTTGAGTAAATTAGAGTGTTCAAAGCAGGCCTACGCTCTGAATACATTAGCATGGAATAACACGATAGGACTCTGGCCTATCCTGTTGGTCTGTAGGACCGGAGTAATGATTAAGAGGGACAGTCGGGGGCATTCGTATTTCATTGTCAGAGGTGAAATTCTTGGATTTATGAAAGACGAACTCGGG。3.一种如权利要求1或2所述的高生存性小球藻CV-6的筛选方法，其特征在于，按照如下的步骤顺序依次进行：（1）富集将本地污水稀释10倍，经过16层纱布过滤，于3000r/min离心15min，取上清加入到BG11液体培养基中，于25-29℃、光照强度2000-4000Lux、全光照条件下培养10-15天，每天摇动2-3次；（2）分离纯化取富集的藻液在BG11固体培养基中...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛玉玲，张红兵，侯新峰，生庆海，王少芬，范道春，王世杰，朱宏，
申请(专利权)人：石家庄君乐宝乳业有限公司，河北乐源牧业有限公司，
类型：发明
国别省市：河北,13