大黄酸的提取富集方法技术

本发明专利技术公开了一种大黄酸的提取富集方法，包括以下步骤：称取适量大黄粉末，加入相当于药材重量4～10倍量的10～30％H2SO4溶液，加热至80～100℃水解0.5～2h，趁热滤过，将药渣水洗至pH为5～7，晾干，药渣再用10倍量的氯仿加热回流提取4～8h，药渣与氯仿的比例为重量体积比，水洗氯仿提取液3～5次，弃去水洗液，氯仿层以pH为6.5～8.0的磷酸缓冲液萃取2～5次，合并磷酸缓冲液层，以1～3mol·L‑1HCl调节pH至2～4，析出沉淀，离心得沉淀，水洗沉淀3～5次，重复离心，干燥后得大黄酸粗提物，再以乙酸甲醇混合溶液重结晶。本发明专利技术操作步骤简单易行，大黄酸成品纯度高，收率高，成本低。

Extraction and enrichment of rhubarb acid

The invention discloses a method for extracting and enriching rhubarb acid, which includes the following steps: taking proper amount of rhubarb powder, adding 10 ~ 30%H2SO4 solution of 4~10 times the weight of the medicinal material, heating to 80~100 C to hydrolyze 0.5 ~ 2H, washing the water to 5~7, drying, and reusing 10 times of chloroform. Reflux extraction 4 ~ 8h, the proportion of the slag and chloroform is weight volume ratio, water washing chloroform extract 3~5 times, discarded water wash liquid, chloroform layer with pH 6.5 ~ 8 phosphoric acid buffer extraction 2~5 times, combined phosphoric acid buffer layer, 1 to 3mol / L 1HCl adjustment pH to 2~4, precipitation precipitation, centrifuge precipitation, washed and precipitate 3~5 times After repeated centrifugation and drying, the crude extract of Rhein was obtained and then recrystallized with acetic acid methanol mixture. The operation procedure of the invention is simple and easy, and the purity of the Rhein product is high, the yield is high and the cost is low.

【技术实现步骤摘要】
大黄酸的提取富集方法
本专利技术涉及一种大黄酸的提取富集方法，属于天然药物化学

技术介绍
经临床研究发现，大黄主要有效活性成分为蒽醌类成分，在植物体内包含游离态和与糖结合成苷类两种形态，含量约为3％-5％，主要包括大黄酸、大黄素、芦荟大黄素、大黄酚、土大黄素、大黄酸甲醚等。其中，对于各单体成分的药理研究也很多，经大量的研究已经表明，大黄酸具有抗炎、抗氧化、抗癌、抗菌等作用，此外对肝、肾、软骨等具有保护作用，被认为是具有多靶点多功能的药物之一。从目前文献报道来看，现有大黄酸的合成方法产率较低，一些合成路线成本较高，不适于大量大黄酸的获取，工厂的生产还是以从含量较高的中药大黄中提取分离大黄酸为主，因此，对大黄酸提取富集工艺研究是有必要而且非常重要的。目前大黄酸的提取富集方法一般采用醇提，由于醇提液在浓缩过程中冷凝出来的溶液并非相应比例的醇溶液，故醇回收液每次使用均需调节醇浓度，存在操作麻烦，成本高，材料耗费量大的问题，另外，在收集醇提液时，在进行滤除药渣的过程中，由于糖类等一系列成分的存在，过滤步骤很难进行，给实际生产带来了困难。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种操作步骤简单易行，大黄酸成品纯度高，收率高，成本低的大黄酸的提取富集方法；进一步地，本专利技术提供一种重结晶产率高、纯度高的大黄酸的提取富集方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：大黄酸的提取富集方法，包括以下步骤：称取适量大黄粉末，加入相当于药材重量4～10倍量的10～30％H2SO4溶液，加热至80～100℃水解0.5～2h，趁热滤过，将药渣水洗至pH为5～7，晾干，药渣再用10倍量的氯仿加热回流提取4～8h，药渣与氯仿的比例为重量体积比，水洗氯仿提取液3～5次，弃去水洗液，然后氯仿层以pH为6.5～8.0的磷酸缓冲液萃取2～5次，合并磷酸缓冲液层，以1～3mol·L-1HCl调节pH至2～4，析出沉淀，离心得沉淀，水洗沉淀3～5次，重复离心，干燥后得大黄酸粗提物，再以乙酸甲醇混合溶液重结晶，得最终产物。所述氯仿提取液可替换为乙酸乙酯或丙酮。所述重结晶的步骤为：乙酸加入量为大黄酸粗提物的100倍，大黄酸粗提物与乙酸的比例为重量体积比，加热至60～70℃，逐滴加入甲醇，待大黄酸粗提物完全溶解后，停止加热，冷却至室温，沉淀析出，过滤，干燥，即可得到精制的大黄酸成品。所述重结晶时的加热方法包括水浴加热。所述磷酸缓冲液由NaH2PO4和Na2HPO4配制得到。所述磷酸缓冲液的配制方法为：磷酸缓冲液配制方法：0.2mol/L的NaH2PO4的配制：称取31.21gNaH2PO4·2H2O加水定容至1000mL；0.2mol/L的Na2HPO4的配制：称取71.64gNa2HPO4·12H2O加水定容至1000mL；取39mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和61mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合即得pH＝7的磷酸缓冲液；取68.5mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和31.5mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合既得pH＝6.5的磷酸缓冲液；取5.3mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和94.7mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合既得pH＝8.0的磷酸缓冲液。所述大黄酸粗提物的干燥方法包括冷冻干燥。所述大黄包括掌叶大黄。本专利技术提供的一种大黄酸的提取富集方法，本专利技术的路线方法简单，操作步骤简单易行，对比例的路线有一些不足之处：首先无法进行醇溶液的索氏提取，因为不同比例的醇溶液在进行索氏提取时，冷凝下来的液体不是相应比例的醇溶液；其次，在进行滤除药渣的过程中，由于糖类等一系列成分存在，抽滤步骤很难进行，最后，从实验成本出发，对比例的路线所需材料等费用更多，成本更高。而且本专利技术的产率比对比例的产率更高，分析原因可能是对比例在多次反复的操作过程中造成产物的损失。综合各方面，认为本专利技术的工艺适合大黄酸提取富集，并且纯度高达95％以上，操作步骤简单易行，大黄酸成品纯度高，收率高，成本低。附图说明图1为本专利技术的工艺流程图；图2为本专利技术的标准曲线图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作更进一步的说明。1.仪器和试剂仪器与试剂：圆底烧瓶；烧杯；分液漏斗；恒压滴液漏斗；分析天平(赛多利斯)；冷凝管；旋转蒸发仪(RE-52AA，上海亚荣生化仪器厂)；数显恒温水浴锅(HH-4，常州国华电器有限公司)；高效液相色谱仪(岛津)，硅胶GF254薄层预制板(自制)；甲醇；乙醇；三氯甲烷；乙酸；丙酮；乙酸乙酯；石油醚，所用试剂均为分析纯；浓H2SO4；碳酸氢钠溶液；磷酸缓冲溶液；浓HCl；大黄粉末；大黄酸标准品(购自中国食品药品检定研究院)。2.试剂配制方法20％H2SO4配制方法：10mL的浓硫酸溶液于不断搅拌的条件下加入到80mL的水溶液中，搅拌冷却即得20％H2SO4溶液；磷酸缓冲液配制方法：0.2mol/L的NaH2PO4的配制：称取31.21gNaH2PO4·2H2O，加水定容至1000mL；0.2mol/L的Na2HPO4的配制：称取71.64gNa2HPO4·12H2O加水定容至1000mL；取39mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和61mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合即得pH＝7的磷酸缓冲液；取68.5mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和31.5mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合既得pH＝6.5的磷酸缓冲液；取5.3mL0.2mol/L的NaH2PO4溶液和94.7mL0.2mol/L的Na2HPO4溶液混合既得pH＝8.0的磷酸缓冲液。2mol/L盐酸配制方法：量取16mL浓盐酸搅拌条件下加水定容至100mL即得2mol/L盐酸。3.大黄酸纯度及含量测定在大黄酸的纯度及含量的测定中，我们采用外标法测定含量，面积归一化法测定纯度，在进行检测之前，我们进行了标准曲线的绘制，保证大黄酸在此方法此浓度范围内呈现良好的线性。4.色谱条件色谱柱：ShimadzuVP-ODS(150*4.6mm，SerialNo.6062087)；流动相：甲醇∶水∶乙酸＝350∶50∶2.5；流速：1.0mL/min；检测波长：428nm；柱温：25℃；进样量：20μL；5.大黄酸对照品溶液的配制：精密称取大黄酸对照品17.9mg置于250mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，超声溶解10min，得大黄酸对照品贮备液；6.标准曲线的绘制精密量取80mL大黄酸对照品贮备液置于100mL容量瓶中甲醇定容至刻度得浓度为0.05728mg/mL对照品溶液；精密量取80mL浓度为0.05728mg/mL对照品溶液置于100mL容量瓶中甲醇定容至刻度得浓度为0.045824mg/mL对照品溶液；精密量取80mL浓度为0.045824mg/mL对照品溶液置于100mL容量瓶中甲醇定容至刻度得浓度为0.03666mg/mL对照品溶液；精密量取80mL浓度为0.03666mg/mL对照品溶液置于100mL容量瓶中甲醇定容至刻度得浓度为0.029328mg/mL对照品溶液；精密量取80mL浓度为0.029328mg/mL对照品溶液置于100mL容量瓶中甲醇定容至刻度得浓度为0.02346mg/mL对照品溶液，分别进样本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.大黄酸的提取富集方法，其特征在于：包括以下步骤：称取适量大黄粉末，加入相当于药材重量4～10倍量的10～30％H2SO4溶液，加热至80～100℃水解0.5～2h，趁热滤过，将药渣水洗至pH为5～7，晾干，药渣再用10倍量的氯仿加热回流提取4～8h，药渣与氯仿的比例为重量体积比，水洗氯仿提取液3～5次，弃去水洗液，然后氯仿层以pH为6.5～8.0的磷酸缓冲液萃取2～5次，合并磷酸缓冲液层，以1～3mol·L‑1HCl调节pH至2～4，析出沉淀，离心得沉淀，水洗沉淀3～5次，重复离心，干燥后得大黄酸粗提物，再以乙酸甲醇混合溶液重结晶，得最终产物。

【技术特征摘要】
1.大黄酸的提取富集方法，其特征在于：包括以下步骤：称取适量大黄粉末，加入相当于药材重量4～10倍量的10～30％H2SO4溶液，加热至80～100℃水解0.5～2h，趁热滤过，将药渣水洗至pH为5～7，晾干，药渣再用10倍量的氯仿加热回流提取4～8h，药渣与氯仿的比例为重量体积比，水洗氯仿提取液3～5次，弃去水洗液，然后氯仿层以pH为6.5～8.0的磷酸缓冲液萃取2～5次，合并磷酸缓冲液层，以1～3mol·L-1HCl调节pH至2～4，析出沉淀，离心得沉淀，水洗沉淀3～5次，重复离心，干燥后得大黄酸粗提物，再以乙酸甲醇混合溶液重结晶，得最终产物。2.根据权利要求1所述的大黄酸的提取富集方法，其特征在于：所述氯仿提取液可替换为乙酸乙酯或丙酮。3.根据权利要求1所述的大黄酸的提取富集方法，其特征在于：所述重结晶的步骤为：乙酸加入量为大黄酸粗提物的100倍，大黄酸粗提物与乙酸的比例为重量体积比，加热至60～70℃，逐滴加入甲醇，待大黄酸粗提物完全溶解后，停止加热，冷却至室温，沉淀析出，过滤，干燥，即可得到精制的大黄酸成品。4.根据权利要求3所...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶峰，吕青林，张杰，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32