本发明专利技术公开了HMG‑COA还原酶的两个B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽；这类抗原肽由HMG‑COA还原酶的一个或两个B表位与胰岛素瘤相关蛋白(IA‑2))近膜区JM2的B表位通过连接肽串联，串联后再通过连接肽与抗糖尿病的T表位P2的N端相连接。通过背部皮下免疫途径注射多次小剂量STZ诱导C57BL/6J小鼠的糖尿病模型，具有显著调脂和降血糖作用，同时显著降低血清HMG‑COA还原酶和尿酸水平，提高机体的抗氧化能力。本发明专利技术提供的抗原肽也可以用于重组微生物和转基因动物或植物，使它们作为生产工厂，生产该抗原肽或制作口服疫苗，用于糖尿病、调脂、动脉粥样硬化、氧化应激相关的疾病如糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风的治疗。
【技术实现步骤摘要】
HMG-CoA还原酶的两个B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽
本专利技术涉及药学及医学相关领域。特别涉及包含HMG-CoA还原酶中一个或两个B细胞表位的抗原肽及其在医药领域的应用。
技术介绍
糖尿病(Diabetesmellitus，DM)是以胰岛素相对或绝对不足为特征的代谢性疾病，胰岛素相对或绝对不足引发高血糖，进而导致三大营养物质代谢紊乱，胰岛素绝对缺乏为1型糖尿病，胰岛素相对缺乏为2型糖尿病。1型糖尿病(T1DM)是由T细胞介导的器官特异性自身免疫性疾病，由于机体自身反应性免疫应答攻击胰岛β细胞，使其遭破坏、功能缺失，从而导致胰岛素绝对缺乏所引起的糖尿病。通过一定的免疫途径来诱导机体对致自身免疫性疾病自身抗原的耐受能有效预防自身免疫性疾病的发生。糖尿病带来的危害，几乎都来自它的并发症。动脉粥样硬化是糖尿病的主要并发症，动脉粥样硬化常常伴随着血脂尤其是胆固醇的升高，体内过多的胆固醇会引起动脉粥样硬化等心脑血管疾病。HMG-CoA还原酶(3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶，EC：1.1.1.34)是肝细胞合成胆固醇过程中的限速酶，抑制HMG-CoA还原酶能阻碍内源性胆固醇合成。血清中胆固醇水平升高是心血管疾病的高危因素，因此通过抑制HMG-CoA还原酶活性来阻碍胆固醇的合成，可降低血胆固醇水平从而预防动脉粥样硬化。大量的临床研究表明，氧化应激在糖尿病及其并发症中具有重要的作用，氧化应激是指机体在遭受各种有害刺激时，体内活性氧自由基产生过多，氧化程度超出氧化产物的清除能力，氧化系统和抗氧化系统失衡，从而导致组织细胞的损伤。研究表明糖尿病及其血管并发症发生时，氧化应激明显增加。氧化应激也在糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风中起重要的作用。P277肽是HSP60的437～460位的一段特异性多肽，共24个氨基酸，也是能与效应T细胞反应的抗原决定簇，是在T1DM中发挥作用的特异片段。为了增加肽的稳定性而不改变其免疫性质，将原始P277肽中位于该序列第6和11位的两个半胱氨酸C由两个结氨酸V来代替，命名为DiaPep277，我们研究发现DiaPep277在治疗模型中的降糖效果优于P277。已有实验研究发现按照国外DiaPep277相同的皮下给药方式，用P277肽进行给药，能引起血管内皮细胞损伤，并诱发肌体产生抗体从而诱发严重的动脉粥样硬化；将P277分成P1肽段(437～450)和P2肽段(448～460)两部分，发现P1多肽为诱发机体产生抗体的B表位肽段，具有促动脉粥样硬化作用，而P2为主要的抗糖尿病T表位肽段，没有诱发动脉粥样硬化。蛋白抗原通过表位体现其免疫特异性。就某一蛋白抗原而言，不仅含有B细胞表位，T辅助细胞表位，细胞毒性T细胞表位，自然杀伤细胞表位等与免疫识别密切相关的结构，同时还含有毒性表位，交叉反应性表位等不良表位，这些不良表位可能引起免疫偏移等不良后果，因此为了提高蛋白质抗原的保护性，需要在表位水平上做出选择，以得到更理想的疫苗分子。已经证实P277中的P2段T表位肽段在治疗1型糖尿病中的关键性作用，我们运用B细胞表位预测软件以及在线预测工具，对糖尿病并发症动脉粥样硬化相关蛋白HMG-CoA还原酶进行B细胞抗原表位分析，合成包含HMG-CoA还原酶一个或者两个B细胞表位的抗原肽。
技术实现思路
本专利技术目的之一在于提供HMG-CoA还原酶线性B表位，具有SEQIDNo.1，SEQIDNo.2所示氨基酸序列。本专利技术目的之二在于提供HMG-CoA还原酶B表位与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端通过连接肽相连的组合肽，抗糖尿病的T辅助细胞表位如序列表中SEQIDNo.3所示。本专利技术目的之三在于提供三个表位的串联肽，该肽由HMG-CoA还原酶的一个B细胞表位与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位通过连接肽串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成，胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位如序列表SEQIDNo.4所示。本专利技术目的之四在于提供四个表位的串联肽，由HMG-CoA还原酶的两个B细胞表位串联后通过连接肽与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成。其中B表位之间的柔性接头为GG、SG，B表位与T表位之间的柔性接头为GGG、SGG或者其他合适的柔性肽。本专利技术目的之五在于提供包含免疫学有效量的所述包含HMG-CoA还原酶B表位的抗原肽的组合物，还包含药学上可接受的载体，所述免疫学有效量为每剂每千克体重2-5毫克。本专利技术的目的之六在于提供所述包含HMG-CoA还原酶一个或两个B表位的抗原肽在制备糖尿病、调脂、动脉粥样硬化、氧化应激相关的疾病如糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风产品中的应用。本专利技术的目的之七在于提供所述包含HMG-CoA还原酶一个或两个B表位的抗原肽在预防和治疗糖尿病、调脂、动脉粥样硬化、氧化应激相关的疾病如糖尿病肾病、老年痴呆症以及痛风病中的应用。本专利技术的有益效果在于：本专利技术公开了HMG-CoA还原酶的B细胞表位，具有SEQIDNo.1，SEQIDNo.2所示氨基酸序列，其成分单一，结构简单，摆脱了天然蛋白中不良表位的影响；本专利技术还公开了包含HMG-CoA还原酶的一个B细胞表位的抗原肽，由HMG-CoA还原酶B表位与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端通过连接肽相连而成，该双表位肽能够降低STZ诱导的C57BL/6J小鼠1型糖尿病的血脂，还公开了包含HMG-CoA还原酶上的一个或两个B表位的抗原肽，该抗原肽由HMG-CoA还原酶的一个B细胞表位与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位通过连接肽串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成，或者由HMG-CoA还原酶的两个B细胞表位串联后通过连接肽与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成，这两种表位肽可降低STZ诱导的C57BL/6J小鼠1型糖尿病血糖值并且调节实验动物的血脂，显著降低血清中HMG-CoA还原酶的含量，并且显著降低血清尿酸水平，提高机体的抗氧化能力，具有重要的理论价值和广阔的应用前景。附图说明图1ESI-MS测定本专利技术新型肽H243P、H441P、HIP1、H24IP1的分子量(图1A：H243P的ESI-MS图；图1B：H441P的ESI-MS图；图1C：HIP1的ESI-MS图；图1D：H24IP1的ESI-MS图)图2治疗实验中小鼠血糖趋势图(图2A：P277与DiaPep277对STZ造模后的糖尿病小鼠治疗实验中血糖情趋势的对比；图2B：HIP1、H24IP1对STZ造模后的糖尿病小鼠治疗实验中的血糖值的影响。)图3新型肽H243P、H441P、HIP1、H24IP1对STZ造模后的糖尿病小鼠治疗实验中血脂的影响(图3A：H243P、H441P对第7周血清胆固醇的影响；图3B：H243P、H441P对第13周血清甘油三酯的影响；图3C：H243P对第7周血清低密度脂蛋白胆固醇的影响；图3D：HIP1、H24IP1对第8周血清甘油三酯的影响；图3E：HIP1、H24IP1对第8周血清低密度脂蛋白胆固醇的影响)图4HIP1、H24本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.HMG‑CoA还原酶的B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽，所述HMG‑CoA还原酶的B细胞表位具有SEQ ID No.1与SEQ ID No.2所示氨基酸序列。
【技术特征摘要】
1.HMG-CoA还原酶的B细胞表位及包含其中一个或两个表位的抗原肽，所述HMG-CoA还原酶的B细胞表位具有SEQIDNo.1与SEQIDNo.2所示氨基酸序列。2.根据权利要求1所述的抗原肽，由HMG-CoA还原酶的一个B细胞表位与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端通过连接肽组合而成，抗糖尿病的T辅助细胞表位如序列表中SEQIDNo.3所示。3.根据权利要求1所述的抗原肽，由HMG-CoA还原酶的一个B细胞表位与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位通过连接肽串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成，胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位如序列表SEQIDNo.4所示。4.根据权利要求1所述的抗原肽，由HMG-CoA还原酶的两个B细胞表位串联后通过连接肽与胰岛素瘤相关蛋白(IA-2)近膜区JM2的B表位串联，再通过连接肽与抗糖尿病的T辅助细胞表位的N端串联而成。...
【专利技术属性】
技术研发人员：李泰明，焦琳方，顾小骞，王岐信，孟凯特，魏晓敏，张婷婷，李志鑫，
申请(专利权)人：中国药科大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。