天然管状小肠脱细胞基质膜及其制备方法技术

本发明专利技术提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜及其制备方法，属于医用生物材料技术领域。该方法包括：将在动物身上截取的小肠进行清洗；将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜。将规格相同的单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在支架上，进行加压粘合，得到多层管状小肠脱细胞基质膜，将得到的单层及多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。本发明专利技术的制备方法简单，得到的小肠脱细胞基质膜为天然管状。

Natural tubular small intestinal acellular matrix membrane and preparation method thereof

The invention provides a natural tubular small intestinal acellular matrix membrane and a preparation method thereof, belonging to the technical field of medical biomaterials. The method includes: cleaning the small intestine of the animals, and placing the cleaned small intestine on the annular tubular scaffold, destroying the serous layer with scissors, cutting the serous layer of the small intestine, scraping the damaged small intestinal serous layer with the plexiglass plate, and flipping the small intestine and scraping the mucous layer, submucous layer and muscle of the small intestine. The monolayer tubular small intestinal acellular matrix membrane was obtained by removing the intestinal basal cells. The monolayer tubular small intestinal decellular matrix membrane was stacked on the scaffold, and the multi-layer tubular small intestinal decellular matrix membrane was obtained by pressure adhesion. The single layer and multi-layer tubular small intestinal acellular matrix membrane were frozen dry sealed and sterilized, and the natural tubular small intestinal acellular matrix membrane with different thickness was obtained. The preparation method of the invention is simple, and the small intestinal acellular matrix membrane is naturally tubular.

【技术实现步骤摘要】
天然管状小肠脱细胞基质膜及其制备方法
本专利技术属于医用生物材料
，具体涉及一种天然管状小肠脱细胞基质膜及其制备方法。
技术介绍
小肠脱细胞基质膜(ECM)生物补片，是指取自同种或者异种的组织，经脱细胞处理去除组织中含有的各种细胞而完整保留细胞外基质(extracellularmatrix，ECM)的三维框架结构并用于修复机体组织的材料。在利用ECM生物补片进行组织器官修复或者重建时，ECM能够起到“模具”的作用。ECM生物补片对宿主的ECM受体传递生物信息，通过整合素、层粘连蛋白受体等诱导并刺激相应的组织器官细胞在其表面附着，从边缘向中心移行，并诱导细胞沿着“模具”的形状分化和生长，最终实现组织器官的再生，与此同时，ECM被逐渐降解并完全吸收，在宿主体内无残留。ECM生物补片的临床应用范围广泛，可以应用于腹壁疝、胸膜、颅骨、神经、内脑膜、消化道以及皮肤等的修复。但是，由于天然的细胞外基质材料制成的生物补片过于柔软，机械性能差，为手术操作带来很多不便，在多种组织的修复上，细胞外基质材料很难实现降解速度与组织再生速度相一致，往往因材料降解过快而导致移植失败。近年来，随着科技的快速发展，针对ECM生物补片制备中如何避免上述问题的产生提出很多的改进。通常是对材料进行化学交联处理，国外对管状ECM生物补片制备的研究较多，在制备管状ECM生物补片时，国外多采用片状ECM生物补片缝制成管状，或者是将片状ECM生物补片像缠绷带一样围绕柱状模具缠绕成管状。但是这种通过缝制或者缠绕而成的管状ECM生物补片，其缝合缘的可靠性、管内壁的光滑性以及管壁的均匀程度都会对组织的修复或者重建造成影响。我国对ECM生物补片的研究和应用起步较晚，制备工艺比较落后，特别是针对天然管状ECM生物补片的制备和应用研究尚处于空白。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜及其制备方法，该制备方法简单，得到的小肠脱细胞基质膜为天然管状，对人工管状器官的制取起到很好的奠基作用。本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗；步骤二：将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定于环形管状支架上，然后将1-4个规格相同的单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在支架上，进行加压粘合，得到多层管状小肠脱细胞基质膜；步骤四：将步骤三得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。优选的是，所述的步骤一的动物为猪、牛、绵羊、鼠、马。优选的是，所述的步骤一的清洗是在4℃生理盐水中清洗。优选的是，所述的步骤三套叠过程具体为：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定于环形管状支架上，然后将规格相同的单层管状小肠脱细胞基质膜的一端与支架上的单层管状小肠脱细胞基质膜的一端固定，再将固定于支架上的管状小肠脱细胞基质膜另一端翻转，沿支架的一端向另一端牵拉，保持同等的张力，使2段单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在一起，按照上述方法，依次将多段单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在一起。优选的是，所述的步骤三的加压粘合具体为：将套叠好的多段天然管状小肠脱细胞基质膜置于环形管状支架上，环形撑开管状小肠脱细胞基质膜达到其管壁不叠加亦不过度抻拉变形的状态时锁定支架管径，在套叠好的管状小肠脱细胞基质膜外侧用另一环形管状支架压迫，使各层管状小肠脱细胞基质膜粘合。优选的是，所述的步骤四冻干温度为-80℃，冻干时间为24h。优选的是，所述的步骤四的灭菌是将密封好的多层管状小肠脱细胞基质膜经直线加速以8000拉德放射剂量照射灭菌。本专利技术还提供上述制备方法得到的天然管状小肠脱细胞基质膜。本专利技术的有益效果本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，和现有技术缝制成管状或者是缠绕成的管状方式相对比，本专利技术的方法可以直接制备得到天然管状的小肠脱细胞基质膜。该管状的小肠脱细胞基质膜由于是天然的，管状的，可作为细胞生长的支架。本专利技术的天然管状ECM可解决片状基质膜缝合过程中，对接处由于缝合压力过大，局部基质膜过厚，不利于细胞在基质膜内生长的问题。同时可解决对接处经缝合而成，易造成局部狭窄，或局部管径过大，作为人工食管移植动物体内时易造成动物进食时梗阻或局部食物残留的问题。本专利技术的天然管状ECM具有管状均匀性好的特点，很好的避免了片状ECM经缝合成管状带来的一些弊端。本专利技术还提供上述制备方法得到天然管状小肠脱细胞基质膜，该天然管状小肠脱细胞基质膜，就局部组织来说同片状ECM其它性能相同，所不同的是天然管状无需缝合，基质膜横向，纵向，等各个方向的拉伸变形都与小肠相同，而缝合后的ECM由于对接缝合会造成局部基质膜在不同方向拉伸过程中变形受限。因此天然管状ECM，对于人类人工食管及其他人工管状器官的制取起到入门作用，为下一步人工食管的研究奠定基础。附图说明图1为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气前的照片图。图2为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气后的照片图。图3为本专利技术实施例1制备得到的单层天然管状猪小肠脱细胞基质膜真空干燥后的照片图。图4为本专利技术实施例2制备得到的双层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气前的照片图。图5为本专利技术实施例2制备得到的双层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气后的照片图。图6为本专利技术实施例2制备得到的双层天然管状猪小肠脱细胞基质膜真空干燥后的照片图。图7为本专利技术实施例3制备得到的四层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气前的照片图。图8为本专利技术实施例3制备得到的四层天然管状猪小肠脱细胞基质膜充气后的照片图。图9为本专利技术实施例3制备得到的四层天然管状猪小肠脱细胞基质膜真空干燥后的照片图。图10为本专利技术实施例1制备得到的单层的天然管状猪小肠脱细胞基质膜放1000倍下电镜下扫描照片。图11为本专利技术实施例1制备得到的单层的天然管状猪小肠脱细胞基质膜放5000倍下电镜下扫描照片。具体实施方式本专利技术首先提供一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗；步骤二：将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，尽可能多的均匀的剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除；刮除干净后，翻转小肠后再刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜。步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定于环形管状支架上，然后将1-4个规格相同同法制备的单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在支架上，进行加压粘合，得到多层管状小肠脱细胞基质膜；步骤四：将步骤三得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。按照本专利技术，所述的将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗，优选是将小肠取出后立即浸入4℃生理盐水中进行清洗，所述的动物没有特殊限制，优选为猪、牛、绵羊、鼠或马。按照本本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗；步骤二：将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定于环形管状支架上，然后将1‑4个规格相同的单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在支架上，进行加压粘合，得到多层管状小肠脱细胞基质膜；步骤四：将步骤三得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。

【技术特征摘要】
1.一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，该方法包括：步骤一：将在动物身上截取的小肠浸入生理盐水中进行清洗；步骤二：将清洗干净后的小肠套置在环形管状支架上，用剪刀破坏浆膜层，剪开小肠浆膜层，然后用有机玻璃板对破坏的小肠浆膜层进行刮除，翻转小肠后刮除小肠的粘膜层、粘膜下层和肌层，对小肠基细胞进行脱除，得到单层管状小肠脱细胞基质膜；步骤三：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定于环形管状支架上，然后将1-4个规格相同的单层管状小肠脱细胞基质膜套叠在支架上，进行加压粘合，得到多层管状小肠脱细胞基质膜；步骤四：将步骤三得到的多层管状小肠脱细胞基质膜进行冻干密封、灭菌保存，得到不同厚度的天然管状小肠脱细胞基质膜。2.根据权利要求1所述的一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，所述的步骤一的动物为猪、牛、绵羊、鼠、马。3.根据权利要求1所述的一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，所述的步骤一的清洗是在4℃生理盐水中清洗。4.根据权利要求1所述的一种天然管状小肠脱细胞基质膜的制备方法，其特征在于，所述的步骤三套叠过程具体为：将步骤二得到的单层管状小肠脱细胞基质膜固定...

【专利技术属性】
技术研发人员：韩春山，冯永刚，薛锦儒，张乐宁，孙宏斌，王图慧，冯敏，崔建华，张丽萍，
申请(专利权)人：吉林大学，
类型：发明
国别省市：吉林,22