快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒制造技术

本发明专利技术属于生物技术领域，涉及一种快速检测肿瘤组织致癌代谢物2‑羟基戊二酸2‑HG累积的试剂盒及使用方法，所述试剂盒中含有检测2‑HG的试剂及标准品及衍生化试剂；或者，所述的试剂盒中含有2‑HG的特异性抗体。采用所述试剂盒，将获得肿瘤组织样品置于离心管中加入预冷纯甲醇，匀浆机研磨静置后14000 rpm离心，取上清转移至玻璃瓶中，真空干燥离心机充分干燥后加入衍生化试剂 MTBSTFA，70℃放置，室温冷却，上机，Agilent 7890A‑5975C；色谱柱为HP‑5MS，载气为高纯氦气，采用NIST数据库搜索和标准品验证双结合的方式对2‑HG鉴定。检测结果显示，本发明专利技术的试剂盒能在术中检测脑组织中是否存在2‑HG高水平累积，有助于实现IDH1突变胶质瘤的快速鉴别诊断，并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。

A kit for rapid detection of 2-HG accumulation in tumor tissue

The present invention belongs to the field of biological technology, and relates to a kit and method for rapid detection of the accumulation of carcinogenic metabolite of cancer tissue 2 hydroxyglutaric acid 2 HG. The kit contains reagents and standard products and derivatization reagents for detecting 2 HG; or the kit contains specific antibodies of 2 HG. Using the kit, the sample of the tumor tissue was placed in the centrifuge tube with pre cooled pure methanol. The homogenizer was centrifuged 14000 RPM after grinding and transferred to the glass bottle. After the vacuum drying centrifuge was fully dried, the centrifuge was fully dried and added to the derivatization reagent MTBSTFA, the room temperature was placed at 70, the room temperature was cooled, the Agilent 7890A 5975C was used. The chromatographic column was HP 5MS and the carrier gas was high purity helium. The NIST database search and standard product verification were combined to identify 2 HG. The test results show that the kit can detect the high accumulation of 2 HG in the brain tissue during the operation, and help to realize the rapid differential diagnosis of IDH1 mutant glioma and provide important guidance information for the individualized treatment after the operation.

【技术实现步骤摘要】
快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒
本专利技术属于生物
，具体涉及一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过该试剂盒快速检测肿瘤组织中2-HG累积，有助于IDH1突变的快速诊断。
技术介绍
现有技术公开了胶质瘤（glioma）是中枢神经系统最常见的肿瘤，其中恶性胶质瘤治愈率低，复发率高，预后极差。目前临床实践中，尤其术中对于一些诊断不明确的胶质瘤病灶需要进行立体定向穿刺活检，典型者比较容易诊断，但实际操作中往往术中冰冻切片病理并不典型，病理科医生只能观察到胶质增生，而胶质增生在低级别胶质瘤、正常脑组织、炎症、部分淋巴瘤等均可出现。虽然突变型IDH1免疫组化染色可鉴别胶质瘤和其他情况，但一般需要5-7天，耗时长，且无法实现术中判断，有时甚至需要反复穿刺，增加病人负担和手术风险。研究公开了，在大多数弥漫性人脑胶质瘤中常伴随着异柠檬酸脱氢酶基因(isocitratedehydrogenasegene)1(IDH1)的突变.临床实践显示，有着此突变的胶质瘤患者在临床上有良好的预后效果，并且对化疗和靶向治疗更为敏感。,因此.IDH1突变是胶质瘤一个重要的分子分型标记；IDH催化异柠檬酸氧化脱羧，生成a-酮戊二酸（a-KG），突变型IDH在丧失其正常酶活性的同时，以a-KG为底物，生成致癌代谢物2-羟基戊二酸（2-HG）。通常，2-HG在正常脑组织中水平很低，而在IDH1突变的胶质瘤中高度累积，相关研究表明，IDH1突变细胞依赖2-HG维持其致癌特性。因此，IDH1突变快速检测，将有助于鉴别诊断胶质瘤，并利于个体化治疗方案的制定和优化，临床意义重大。基于此，本申请的专利技术人拟提供一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过检测肿瘤组织中2-HG累积，将实现IDH1突变的快速诊断。
技术实现思路
本专利技术的目地是针对现有技术的现状，提供一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，通过检测肿瘤组织中2-HG累积，为实现IDH1突变的快速诊断提供依据并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。具体的，本专利技术提供了一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒所述的试剂盒中含有检测2-HG的试剂及标准品及衍生化试剂。或者，所述的试剂盒中含有2-HG的特异性抗体。本专利技术所述的2-HG是突变型IDH在丧失其正常酶活性的同时，以-KG为底物，生成致癌代谢物2-羟基戊二酸（2-HG）。本专利技术还提供了一种上述试剂盒的应用，也就是通过检测肿瘤组织中2-HG累积的来评估IDH1突变的可能，进一步实现IDH1突变的快速诊断；同时可以据此助于鉴别诊断胶质瘤，并利于个体化治疗方案的制定和优化。所述的试剂盒通过下述步骤检测肿瘤组织中2-HG累积：1.获得肿瘤组织样品，置于离心管中；2.向上述离心管中加入预冷纯甲醇；3.匀浆机研磨1min，静置片刻；4.14000rpm离心；5.取上清，转移至玻璃瓶中，真空干燥离心机充分干燥；6.加入衍生化试剂MTBSTFA，70℃放置；7.室温冷却，上机（Agilent7890A-5975C；色谱柱为HP-5MS，载气为高纯氦气。本专利技术中优选采用NIST数据库搜索和标准品验证双结合的方式对2-HG鉴定。本申请中采用所述的检测试剂盒，对术中获得的离体的胶质瘤脑组织进行了快速检测，检测结果显示，采用本专利技术的检测试剂盒，在术中检测脑组织中是否存在2-HG高水平累积，有助于实现IDH1突变胶质瘤的快速鉴别诊断，并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。本专利技术的检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒的优点有：1，对2-HG进行检测的同时可以为诊断IDH1突变提供具有特异性的参考数据；2，对于一些诊断不明确的病灶不需要反复穿刺，明显降低病人危险风险；3、检测时间快速，术中即可获得初步判断，只需判断是否有2-HG累积，进而进行鉴别是否为胶质瘤，或是IDH1突变的胶质瘤，为临床判断提供重要信息。为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本专利技术进行详细地描述。需要特别指出的是，具体实例仅是为了说明，显然本领域的普通技术人员可以根据本文说明，在本专利技术的范围内对本专利技术做出各种各样的修正和改变，这些修正和改变也纳入本专利技术的范围内。具体实施方式实施例1采用本专利技术的检测试剂盒对胶质瘤术中获得的离体的胶质瘤脑组织进行了快速检测，将肿瘤组织样品切下25-30μg，置于1.5ml离心管中；向所述离心管中加入100μl预冷纯甲醇；手持匀浆机研磨1min，静置片刻；14000rpm离心10min；取上清40μl，转移至V型底GC专用玻璃瓶中，真空干燥离心机充分干燥，耗时约25min；.在通风厨中加入衍生化试剂40μlMTBSTFA，盖紧瓶盖，70℃放置25min；室温自然冷却，上机，Agilent7890A-5975C；色谱柱为HP-5MS，载气为高纯氦气。采用NIST数据库搜索和标准品验证双结合的方式对2-HG鉴定。检测结果显示，采用本专利技术的检测试剂盒，在术中检测脑组织中是否存在2-HG高水平累积，有助于实现IDH1突变胶质瘤的快速鉴别诊断，并为术后的个体化治疗提供重要指导信息。本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种快速检测肿瘤组织2‑HG累积的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有检测2‑HG的试剂及标准品及衍生化试剂；或者，所述的试剂盒中含有2‑HG的特异性抗体。

【技术特征摘要】
1.一种快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中含有检测2-HG的试剂及标准品及衍生化试剂；或者，所述的试剂盒中含有2-HG的特异性抗体。2.按权利要求1所述的快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，其特征在于，通过下述步骤检测肿瘤组织2-HG累积，1）获得肿瘤组织样品，置于离心管中；2）向上述离心管中加入预冷纯甲醇；3）匀浆机研磨1min，静置片刻；4）14000rpm离心；5）取上清，转移至玻璃瓶中，真空干燥离心机充分干燥；6）加入衍生化试剂MTBSTFA，70℃放置；7）室温冷却，上机，Agilent7890A-5975C；色谱柱为HP-5MS，载气为高纯氦气。3.按权利要求1所述的快速检测肿瘤组织2-HG累积的试剂盒，其特征在于，所述检测步骤中，采用NIST数据库搜索和标准品验证双结合的方式对2-HG鉴定。4.按权利要求1所述的快速检测肿瘤组织2-HG累积的试...

【专利技术属性】
技术研发人员：花玮，叶丹，毛颖，
申请(专利权)人：复旦大学，复旦大学附属华山医院，
类型：发明
国别省市：上海,31