一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法技术

本发明专利技术公开一种蜜醋黑豆中原花青素的检测方法。该检测方法是先取浓盐酸用甲醇定容摇匀，配成盐酸‑甲醇溶液；再将烘干的蜜醋黑豆粉碎后过筛得干粉，取干粉加入盐酸‑甲醇溶液充分混匀，避光置于室温下静置，然后用滤膜过滤后，过滤液放置在4℃中保存，残渣再用提取剂浸泡，并重复上述操作后，合并得滤液；称取原花青素标准品，加入色谱纯甲醇溶液摇匀，用滤膜过滤，得到原花青素标准品溶液；将滤液加入色谱纯甲醇定容，摇匀，超声处理，冷至室温后用滤膜过滤，滤液于容量瓶中，经高效液相色谱分析，检测蜜醋黑豆中原花青素。利用该方法可以从蜜醋黑豆中快速、简单的提取得到原花青素，高效液相色谱法检测含量为1.34～1.81μg/kg。

A method for the detection of the Proanthocyanidins in the black vinegar black bean

The invention discloses a method for detecting procyanidins in honey vinegar black soybeans. The method is to shake well with methanol in concentrated hydrochloric acid and mix into a solution of methanol with hydrochloric acid. Then the dried powder of honey vinegar black bean is crushed and dried powder is sifted. The dry powder is added into the methanol solution of hydrochloric acid to be fully mixed and placed in the room at room temperature. After filtering the filter membrane, the filtrate is kept in 4 C, and the residue is then extracted. The filtrate was soaked and repeated, and the filtrate was merged. The standard product of proanthocyanidins was added, the pure methanol solution was added and filtered to get the standard solution of proanthocyanidins. The filtrate was added to the chromatographic purity of methanol, shake well, ultrasonic treatment, and filtrate with filter membrane after cold to room temperature and filtrate in capacity bottle. The content of proanthocyanidins in sweet vinegar black beans was detected by HPLC. The method can Extract Proanthocyanidins from honey vinegar black beans quickly and simply, and the content of proanthocyanidins is 1.34 to 1.81 g/kg by HPLC.

【技术实现步骤摘要】
一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法
本专利技术属于分离纯化染料木苷
，更具体地，涉及一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法。
技术介绍
黑豆顾名思议就是黑色的大豆，黑豆籽粒中人体所必需的5种氨基酸的含量在0.244～2％，黑豆中脂肪含量在1％以下，含有丰富的维生素、矿物质等营养素，黑豆中含有多种微量元素，多种氨基酸、碘、硒、支链淀粉、可溶性色素等均为普通作物的数倍以上。原花青素为黑豆中的主要黄酮类物质，这是一种广泛存在于自然界植物中的水溶性天然色素，在自然状态下常与各种单糖形成糖苷，称为花色苷。花青素作为一种天然食用色素，安全、无毒、资源丰富，而且具有一定营养和药理作用，在食品、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。有实验证明，花青素是迄今为止所发现的最强效的自由基清除剂，具有多种保健功能。最近美国的一份研究报告指出，蓝莓所含有的花青素是所有的水果与蔬菜之中含量最高的，而蓝莓的花青素最丰富的部分就是在它特有的紫色果皮部位。目前，有关利用黑豆制品提取原花青素的方法主要有以下几种：水提取法、传统有机溶剂提取法、超临界CO2、微波提取法等。这些提取法存在的主要不足是：水提取法以水作为提取剂，浸提时间长，温度高容易造成原花青素的损失，同时水的极性较大，溶出杂质较多；传统有机溶剂提取法的缺陷是有机溶剂消耗过多，耗时长，生产成本高，得到的产品或多或少都存在溶剂的残留；超临界CO2萃取成本高，对操作条件要求比较高；微波提取法一旦微波泄漏具有较高的危险性，安全性较差。国内对黑豆提取物中花青素含量测定方面的研究报道极少，仅有(铁铵盐)比色法、分光光度法、薄层扫描法等，比色法和分光光度法专属性差，误差大，采用高效液相色谱法测定蜜醋黑豆中花青素含量的相关报道较少。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术的缺陷，提供一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法。该方法采用盐酸甲醇提取法提取蜜醋黑豆中的原花青素，经提取溶剂制备、样品前处理、标准溶液制备、样品溶液制备，获得原花青素。并用高效液相色谱法对蜜醋黑豆提取物中花青素的含量的测定。该方法简便准确，可用于测定蜜醋黑豆中花青素含量，是一种有效的检测方法。本专利技术上述目的通过以下技术方案予以实现：一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法，包括如下具体步骤：S1.提取剂的配制：取浓盐酸用甲醇定容摇匀，配成盐酸-甲醇溶液；S2.样品前处理：将烘干的蜜醋黑豆粉碎后过筛得干粉，取干粉加入盐酸-甲醇溶液充分混匀，避光置于室温下静置，然后用滤膜过滤后，过滤液放置在4℃中保存，残渣再用提取剂浸泡，并重复上述操作后，合并得滤液；S3.原花青素标准溶液配制：称取原花青素标准品，加入甲醇溶液摇匀，用滤膜过滤，得到原花青素标准品溶液；S4.样品溶液的制备：取步骤S2制备的滤液加入色谱纯甲醇定容，摇匀，超声处理，冷至室温后用滤膜过滤，滤液于容量瓶中，经高效液相色谱分析，检测蜜醋黑豆中原花青素。优选地，步骤S1中所述盐酸-甲醇溶液的浓度为0.5～1.5％。优选地，步骤S2中所述筛的孔径为40～60目，所述干粉的质量和盐酸-甲醇溶液的体积比为1g：180～220mL；所述烘干的温度为50～70℃，所述静置的时间为8～15h，所述滤膜的孔径为0.45～0.5μm。优选地，步骤S3中所述原花青素标准品溶液的浓度为1mg/mL，所述滤膜的孔径为0.45～0.5μm。优选地，步骤S4中所述的高效液相色谱仪检测的色谱条件为：色谱柱的柱温为室温；流动相为甲醇和水；流动相的流速为10mL/min，检测的波长为510～530nm。更为优选地，所述甲醇和水的体积比为(4～6)：1。与现有技术相比，本专利技术具有以下有益效果：本专利技术利用高效液相色谱法对其含量进行检测的方法，在较高温度和超声下溶解干粉样品，使之完全溶解，所需时间短，适于在现场实时进行检测，检测结果准确，真正做到准确快速简便，提高产品的生产效率。相对于之前的测定花青素的方法更加便捷、操作更加简单、结果重复性好、准确性高，特别适用于产品生产过程原花青素含量的实时监测，利用该方法可以从蜜醋黑豆中快速、简单的提取得到原花青素，高效液相色谱法检测含量为1.34～1.81μg/kg。说明书附图图1为本专利技术的原花青素标准曲线。图2为本专利技术的原花青素的含量测定。具体实施方式下面结合具体实施例进一步说明本专利技术的内容，但不应理解为对本专利技术的限制。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。除非特别说明，本专利技术采用的试剂、方法和设备为本
常规试剂、方法和设备。实施例11.提取溶剂制备：用移液器准确量取1.0mL的浓盐酸，沿着玻璃棒注入100mL容量瓶中，用甲醇定容至100mL，摇匀，配成浓度为1.0％的盐酸-甲醇溶液。2.样品前处理：称取一定量的依标准Q/LQ00025-2017生产的蜜醋黑豆，在烘箱内60℃低温烘干，备用，称取100g烘干的蜜醋黑豆，用多功能食品粉碎机粉碎，用50目的标准筛过筛，准确称取干粉0.5g(精确至0.001g)，于250mL锥形瓶中，加入100mL1％的盐酸-甲醇溶液，摇匀，充分混匀，将浸泡液避光置于室温下静置12h，然后使用0.45μm滤膜过滤浸泡液后，将过滤液放置在4℃冰箱中保存，残渣再使用100mL的提取液浸泡12h，并重复上述操作，将2次的滤液移入棕色瓶中，备用。3.标准溶液配制：在常温下，精确称取原花青素标准品1mg，于10mL容量瓶中，加入甲醇溶液，定容于10mL，摇匀，得到1mg/mL原花青素标准品溶液，用0.45μm针筒式滤膜过滤器过滤，滤液于10mL容量瓶中备用。4.样品溶液的制备：准确量取样品静置后的上清液10mL，置于50mL容量瓶中，加入甲醇至刻度定容，摇匀，超声处理20min，冷至室温后用0.45μm针筒式滤膜过滤器过滤，滤液于10mL容量瓶中，供高效液相色谱(HPLC)分析。5.高效液相色谱仪检测：高效液相色谱仪检测的色谱条件如下：色谱柱：250mm*4.6mmZOBCDEFG-C18，5μm；柱温：室温；流动相：甲醇+水，按甲醇:水＝5:1(体积比)；流速：10mL/min；进样量：10μl；检测波长：520nm。6.标准曲线绘制：精确吸取2、4、6、8、10mL标准品储备液(1mg/mL)，用甲醇溶液分别配制成0.02、0.04、0.06、0.08、0.10(1mg/mL)几种溶液。按仪器色谱条件测其峰面积，以进样浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，如图1所示。7.样品含量测定：准确量取样品溶液1mL，置于100mL容量瓶中，加入甲醇定容至100mL，吸取样品溶液10μL进入液相色谱仪，在525nm色谱条件下，测定其峰面积，与标准系列比较，测得样品中染料木苷含量为139.080mg/kg。实施例21.提取溶剂制备：用移液器准确量取1.5mL的浓盐酸，沿着玻璃棒注入100mL容量瓶中，用甲醇定容至100mL，摇匀，配成浓度为1.5％的盐酸-甲醇溶液。2.样品前处理：称取一定量的依标准Q/LQ00025-2017生产的蜜醋黑豆，在烘箱内60℃低温烘干，备用，称取100g烘干的蜜醋黑豆，用多功能食品粉碎机粉碎，用50目的标准筛过筛，准确称取干粉0.5g(精确至0.001g)，于250mL锥形瓶中，加入100本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：S1.提取剂的配制：取浓盐酸用甲醇定容摇匀，配成盐酸‑甲醇溶液；S2.样品前处理：将烘干的蜜醋黑豆粉碎后过筛得干粉，取干粉加入盐酸‑甲醇溶液充分混匀，避光置于室温下静置，然后用滤膜过滤后，过滤液放置在4℃中保存，残渣再用提取剂浸泡，并重复上述操作后，合并得滤液；S3.原花青素标准溶液配制：称取原花青素标准品，加入色谱纯甲醇溶液摇匀，用滤膜过滤，得到原花青素标准品溶液；S4.样品溶液的制备：取步骤S2制备的滤液加入色谱纯甲醇定容，摇匀，超声处理，冷至室温后用滤膜过滤，滤液于容量瓶中，经高效液相色谱分析，检测蜜醋黑豆中原花青素。

【技术特征摘要】
1.一种检测蜜醋黑豆中原花青素的方法，其特征在于，包括如下具体步骤：S1.提取剂的配制：取浓盐酸用甲醇定容摇匀，配成盐酸-甲醇溶液；S2.样品前处理：将烘干的蜜醋黑豆粉碎后过筛得干粉，取干粉加入盐酸-甲醇溶液充分混匀，避光置于室温下静置，然后用滤膜过滤后，过滤液放置在4℃中保存，残渣再用提取剂浸泡，并重复上述操作后，合并得滤液；S3.原花青素标准溶液配制：称取原花青素标准品，加入色谱纯甲醇溶液摇匀，用滤膜过滤，得到原花青素标准品溶液；S4.样品溶液的制备：取步骤S2制备的滤液加入色谱纯甲醇定容，摇匀，超声处理，冷至室温后用滤膜过滤，滤液于容量瓶中，经高效液相色谱分析，检测蜜醋黑豆中原花青素。2.根据权利要求1所述的蜜醋黑豆中提取原花青素的方法，其特征在于，步骤S1中所述盐酸-甲醇溶液的浓度为0.5～1.5％。3.根据权利要求1所述的检测蜜醋黑豆中原花青素的方法，其特征在于，步骤...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯翠兰，彭月欣，黄兆斌，刘富来，
申请(专利权)人：佛山科学技术学院，
类型：发明
国别省市：广东,44