检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法技术

本发明专利技术检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法是使用液相色谱分析仪和紫外检测器对标准溶液进行标定，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，取待测血液样品，在该待检测血液经过处理后，同样使用液相色谱分析仪和紫外检测器对待测的样品进行检测，得到待测血液y值，将待测血液y代入标准曲线方程中，通过计算得到待检测血液中的奥氮平药物浓度，该方法是外标法与高效液相色谱法相结合，更适于高通量样本检测；采用小粒径色谱柱和低流速，减少有机溶剂的耗费，使实验成本降低且环保，更利于在临床治疗中对患者体内的奥氮平血药浓度进行监测，为抗精神病药物奥氮平的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。

Determination of olanzapine in blood by HPLC

The liquid chromatography analysis method for detecting the content of olanzapine in the blood is to calibrate the standard solution by liquid chromatography analyzer and ultraviolet detector. The standard curve equation is y = a*x+b, and the blood samples are measured. The liquid chromatography analyzer and purple are also used after the treatment of the detected blood. The external detector tests the samples of the measured blood, obtains the y value of the blood to be measured, and substituting the measured blood y into the standard curve equation. By calculating the olanzapine concentration in the blood to be detected, the method is combined with the high performance liquid chromatography with the external standard method, and is more suitable for high throughput sample detection; the small particle size chromatography column and the low level are used. The flow rate, reducing the consumption of organic solvents, reducing the cost of the experiment and environmental protection, is more conducive to monitoring the concentration of olanzapine in the patient's body in clinical treatment, providing an experimental basis for the individualized administration of the antipsychotic olanzapine and the reduction of the side effects.

【技术实现步骤摘要】
检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法
本专利技术涉及精神类药物的血药浓度监测
，尤其涉及一种检测血液中奥氮平药物浓度的方法。
技术介绍
奥氮平(Olanzapine，OLZ)，分子式C17H20N4S，具体结构如下图1所示。奥氮平为黄色结晶性粉末，熔点为191-196℃。精神分裂症是常见的精神障碍性疾病，我国成人终身发病率约为1％-2％。奥氮平是常用的传统非典型抗精神病药，在体内吸收迅速，具有强大的镇静催眠作用，用于治疗精神分裂症、精神病性障碍和情感障碍。奥氮平的日推荐剂量为5-20mg，文献报道治疗精神分裂症的有效血清或血浆阈浓度仅为9μg/L，其血药浓度与药理作用具有相关性，且和靶组织浓度具有显著相关，但药动学个体差异大，可能发生严重的不良反应，影响疗效，故有必要检测奥氮平血药浓度。奥氮平血药浓度的常用检测方法有高效液相色谱-紫外检测法、高效液相色谱-电化学法、气相色谱-质谱法、液相色谱-质谱联用法等。LC-MS/MS法灵敏度高，但稳定性较差，且成本很高，对人员与场地要求较高。2D-LC/UV分离效果好，灵敏度高，具有较高的稳健性及自动化能力，但目前检测方法所需血液的量很大，且前处理过程中消耗的试剂量也较大。
技术实现思路
针对上述技术问题，本专利技术目的是提供一种检测血液中奥氮平药物浓度的方法，使奥氮平血药浓度的测定快速准确，并缩短样品分析时间，通过优化前处理方案，提高回收率和检测灵敏度。本专利技术采用以下技术方案：本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀4-6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液，分别取上述上清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图，以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％-50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-10min，得到清液；(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液即为待测样品；(四)待测样品的检测使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测，得出上述待测样品的奥氮平色谱图，将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的奥氮平药物浓度；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：在步骤(一)中使用七种不同浓度的标准工作液，七种不同浓度的标准工作液分别为含有80、160、320、640、1280、1920、2880μg/mL浓度的奥氮平溶液；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述萃取剂是由9∶1的甲基叔丁基醚和乙酸乙酯组成萃取剂；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：在步骤(a)中用由4∶6的水和甲醇组成的稀释液进行稀释；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用的在线过滤器为SSICOLPRE-FILTERWATER1/160.5M；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用的色谱柱为Waters公司的XBridgeCl8；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪设置的柱温为35℃；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述高效液相色谱仪所使用流动相为含0.3％甲酸和20nmol/L乙酸铵的水-甲醇，并且采用梯度洗脱，流速为0.35mL/min，进样量为15uL；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述紫外检测器是VANQISH检测器，其检测波长为275nm，采集频率为5.0Hz；本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其中：所述含水量为体积比的含水量。本专利技术有益效果：本专利技术所述的检测血液中奥氮平药物浓度的方法，将外标法与高效液相色谱法相结合，更适于高通量样本检测；采用小粒径色谱柱和低流速，减少有机溶剂的耗费，使实验成本降低且环保，更利于在临床治疗中对患者体内的奥氮平血药浓度进行监测，为抗精神病药物奥氮平的个性化给药、减少毒副反应的发生提供实验基础。附图说明图1为奥氮平化学结构式；图2为实施例中标准溶液中奥氮平色谱图，图2中标号1为标准溶液的奥氮平峰；图3为实施例中加标血清或血浆样本中奥氮平色谱图，在图3中标号1为待检测血液的奥氮平峰。下面将结合具体实施例和附图对本专利技术作进一步说明。具体实施方式本专利技术的检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将七种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml的七个离心管中混合制成七种标准溶液，空白血清或血浆是指不本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800‑1200rpm下涡旋混匀1‑2min后，加入含有5‑20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL，并在转速为1200‑2000rpm下涡旋混匀4‑6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200‑2000rpm的转速下涡旋混合4‑6min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心8‑12min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200‑2000rpm转速下涡旋混匀1‑2min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心4‑6min，得到上清液，分别取上述上清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图，以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％‑25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％‑50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有10‑5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，并在‑80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于‑20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取含有5‑20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中，并在1200‑2000rpm的转速下涡旋混合4‑6min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200‑2000rpm的转速下涡旋混合4‑6min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心8‑10min，得到清液；(c)取步骤(b)清液720μL放入另一支1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；(d)向步骤(c)的上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200‑2000rpm转速下涡旋混匀1‑2min后，再在10000‑15000rpm的转速下高速离心4‑6min，得到上清液即为待测样品；(四)待测样品的检测使用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述步骤(d)待测的样品进行检测，得出上述待测样品的奥氮平色谱图，将上述色谱图中的奥氮平峰面积y代入上述步骤(一)的标准曲线方程中，通过计算得到待检测样品中目标物浓度x，即为待检测血液中的奥氮平药物浓度。...

【技术特征摘要】
1.一种检测血液中奥氮平药物含量的液相色谱分析方法，其特征在于：它包括以下步骤：(一)标准溶液的标定首先将至少三种不同浓度的标准工作液10μL和190μL空白血清或血浆分别置于1.5ml离心管中混合制成至少三种标准溶液，上述标准溶液分别在转速为800-1200rpm下涡旋混匀1-2min后，加入含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂的1000μL，并在转速为1200-2000rpm下涡旋混匀4-6min后，再加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心8-12min，得到清液，分别取上述清液720ul置于另一个1.5ml离心管中，在常温下用N2缓慢吹干；向上述吹干的离心管中加入由6∶4的甲醇和水组成的复溶液100μL，然后在1200-2000rpm转速下涡旋混匀1-2min后，再在10000-15000rpm的转速下高速离心4-6min，得到上清液，分别取上述上清液90uL，用液相色谱分析仪和紫外检测器对上述上清液进行检测，得出上述至少三种标准溶液的奥氮平色谱图，以上述至少三个标准溶液的奥氮平峰面积作为标准曲线图的纵坐标y，以上述标准工作液中含有奥氮平的浓度作为标准曲线图的横坐标x，将以上检测所得至少三组数据进行线性回归，拟合得到标准曲线方程为y＝a*x+b，并且得出权重系数a和b；所述标准工作液为含有奥氮平的溶液；(a)标准工作液的配制：精确称取奥氮平标准品5mg置于10ml容量瓶，用含水量为0％-25％的甲醇溶液进行溶解，并定容于10ml，得到标准储备液A，将标准储备液A用含水量为20％-50％的甲醇溶液的稀释液进行稀释，分别在含有10-5000μg/mL奥氮平的范围内配置出各标准工作液，并在-80℃条件下保存；(二)检测血液的离心取待检测血液至少5ml，在离心速度为3500rpm下离心10min，取上清液得血清或血浆，上述血清或血浆置于-20℃冷冻下保存至分析前备用；(三)待测样品处理(b)用移液枪移取200μL步骤(二)中所述血清或血浆于1.5ml离心管中，然后用移液枪移取含有5-20％体积乙酸乙酯的甲基叔丁基醚萃取剂1ml加入到上述离心管中，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min，然后在上述离心管中加入10mol/L的NaOH溶液200μL，并在1200-2000rpm的转速下涡旋混合4-6min后，再在1000...

【专利技术属性】
技术研发人员：魏斌，贾永娟，倪君君，
申请(专利权)人：北京和合医学诊断技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：北京,11