The invention discloses a method for detecting the inhibitory activity of thyroid hormone interferon in the environment, using a rat pituitary tumor GH3 cell as a detection method, half adherent culture to an exponential growth period, and adding an organic solvent extraction solution of the environmental sample with 3,3', 5 iodine three iodine L methyl adenosine (hereinafter referred to as T3), and after continuous culture, The standard curve of amiodarone hydrochloride effect on the growth of GH3 cells induced by T3 was plotted, and the toxic effect of thyroid hormone interferon in the sample was evaluated by using the MTT solution, the light density value was detected by the 490nm wavelength of the enzyme labeling instrument, and amiodarone hydrochloride as the standard compound. This method is fast, simple, low cost and high throughput, and can be used to obtain the toxic equivalent value of thyroid hormone interferon in the sample. It can be used as a rapid screening method for environmental samples and suspicious thyroid hormone interferon.
【技术实现步骤摘要】
一种检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法
本专利技术涉及环境检测
,尤其涉及检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法。
技术介绍
甲状腺是脊椎动物非常重要的腺体,属于内分泌器官,其分泌的甲状腺激素是体内至关重要的新陈代谢调节物,在促进机体基础代谢、生长发育等方面发挥重要作用。如果胎儿发育期间甲状腺激素缺乏,将导致体型矮小、智力迟钝、骨骼营养不良以及新陈代谢低下等一些不良症状。同时,与中枢神经系统成熟相关的过程以及骨骼、肝脏和血液等的发育和功能维持都离不开甲状腺激素的调控。近年来不断有研究证明,环境中的一些内分泌干扰物能影响下丘脑-腺垂体-甲状腺作用轴。这类影响生物体甲状腺激素的合成、分泌、运输、作用和代谢等过程的化合物统称为甲状腺激素干扰物(TDCs,ThyroidDisruptingChemicals)。由于甲状腺激素在基础代谢以及生长发育调节方面的重要作用,甲状腺激素干扰引起了科学界巨大的关注,同时环境甲状腺激素干扰物也成为继环境雌激素污染后最重要的一类内分泌干扰物。现有甲状腺激素干扰物的鉴别与毒性评价方法,主要有体外测试方法(in-vitro)与活体测试方法(invivo)两种,离体方法主要有T-screen筛选方法、重组雌激素受体基因酵母测试方法等;活体测试根据研究者研究领域等方面的不同,有利用非洲爪蟾、大鼠、兔、鸡及鱼的。但现有这些检测方法存在操作复杂,而且时间长,费用高,难以满足现有的快速筛查的需求。
技术实现思路
为了克服现有技术的不足,本专利技术的目的在于提供一种检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法,该方法快速简便、成本低廉、高通 ...
【技术保护点】
1.一种检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法,其特征在于包括以下步骤:S1、接种:取96孔板,选择生长良好的大鼠垂体瘤GH3细胞制备5×104个/mL的细胞悬液,按照200μL/孔接种,于含5%CO2的培养箱中37℃条件下培养2‑3d;S2、上样:取步骤S1得到的96孔板,弃去培养液;取离心管,每个离心管中加入990μL无酚红F12培养基,再加入5μL溶于DMSO的待测样品及5μL溶于DMSO的T3;另外取离心管,添加5μL DMSO及5μL溶于DMSO的T3溶液作为对照,按每孔200μL添加于96孔板中,在CO2培养箱中暴露96h;S3、反应:反应结束前4h取出步骤S2得到的96孔板,弃去上清液,每孔加入MTT溶液50μL,置于CO2培养箱中继续孵育4h,待反应产物formazan结晶形成后,小心吸取上清液,加入150μL DMSO终止反应,室温下于96孔板摇床震荡充分溶解还原产物;S4、样品检测:用酶标仪检测步骤S3待测样品反应液的光密度值;S5、标准曲线制作:先配制标准样品液,所述标准样品液为5μL溶于DMSO的不同浓度的盐酸胺碘酮和5μL溶于DMSO的T3溶液混合,标准样品 ...
【技术特征摘要】
1.一种检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法,其特征在于包括以下步骤:S1、接种:取96孔板,选择生长良好的大鼠垂体瘤GH3细胞制备5×104个/mL的细胞悬液,按照200μL/孔接种,于含5%CO2的培养箱中37℃条件下培养2-3d;S2、上样:取步骤S1得到的96孔板,弃去培养液;取离心管,每个离心管中加入990μL无酚红F12培养基,再加入5μL溶于DMSO的待测样品及5μL溶于DMSO的T3;另外取离心管,添加5μLDMSO及5μL溶于DMSO的T3溶液作为对照,按每孔200μL添加于96孔板中,在CO2培养箱中暴露96h;S3、反应:反应结束前4h取出步骤S2得到的96孔板,弃去上清液,每孔加入MTT溶液50μL,置于CO2培养箱中继续孵育4h,待反应产物formazan结晶形成后,小心吸取上清液,加入150μLDMSO终止反应,室温下于96孔板摇床震荡充分溶解还原产物;S4、样品检测:用酶标仪检测步骤S3待测样品反应液的光密度值;S5、标准曲线制作:先配制标准样品液,所述标准样品液为5μL溶于DMSO的不同浓度的盐酸胺碘酮和5μL溶于DMSO的T3溶液混合,标准样品液经过步骤S1至S3反应后,用酶标仪检测光密度值,并作出剂量-效应标准曲线;S6:将样品的光密度值与标准曲线对比得到样品的盐酸胺碘酮毒性当量。2.如权利要求1所述的检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法,其特征在于:待测样品上样时所加入的5μL溶于DMSO的T3溶液,与对照组所添加的5μL溶于DMSO的T3溶液,以及标准样品上样时所加入的5μL溶于DMSO的T3溶液,三者的T3的浓度一样。3.如权利要求1所述的检测环境中甲状腺激素干扰物抑制活性的方法,其特征在于:标准样品液的盐酸胺碘酮的浓度分别为1×10-7mol/L、5×10-7mol/L、1×10-6mol/L、2×10-6mol/L、5...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘芸,李剑,温勇,易皓,李晓亮,胡小英,
申请(专利权)人:环境保护部华南环境科学研究所,
类型:发明
国别省市:广东,44
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。