一种鱿鱼墨活性多糖制造技术

本发明专利技术公开了一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、L‑岩藻糖和乳糖六种单糖组成，该活性多糖的制备方法为：将鱿鱼墨热水浸提后冷水浸提，离心获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液；将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶进行酶解，酶解上清液中加入正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液剧烈搅拌，离心，浓缩后醇沉得鱿鱼墨粗多糖；将鱿鱼墨粗多糖上已活化固相萃取柱，浓缩收集液，然后上纤维素离子交换柱，浓缩收集液，透析，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。有益效果为：本发明专利技术提取方法简单可行，资源利用率高，提取速率快，提取率高，杂蛋白和色素除去率高，多糖纯度高，不影响多糖活性。

A kind of squid ink active polysaccharide

The invention discloses a squid ink active polysaccharide, which consists of six monosaccharides of mannose, glucose, galactose, rat Li Tang, L, fucose and lactose. The preparation method of the active polysaccharide is to extract the squid ink after hot water immersion and centrifuge the superfluid ultrafiltration membrane obtained by centrifugation, that is to extract the squid ink polysaccharide extract. Extract the liquid by adding the papain and lipase in the extract of the squid ink and adding the mixed solution of n-butanol, chloroform and triethanolamine in the enzymolysis supernatant. After that, the cellulose ion exchange column, concentrated collection solution, dialysis and freeze drying were used to obtain squid ink polysaccharides. The beneficial results are as follows: the extraction method of the invention is simple and feasible, the utilization rate of resources is high, the extraction rate is fast, the extraction rate is high, the removal rate of the protein and pigment is high, the purity of the polysaccharide is high, and the polysaccharide activity is not affected.

【技术实现步骤摘要】
一种鱿鱼墨活性多糖
本专利技术涉及鱼类产品深加工
，特别涉及一种鱿鱼墨活性多糖。
技术介绍
鱿鱼，虽然习惯上称它们为鱼，其实它并不是鱼，而是生活在海洋中的软体动物。鱿鱼属于软体动物门，头足纲，枪乌贼科，通称枪乌贼。体色苍白，体圆锥形，头大，有淡褐色斑，前方生有10条触足，常成群游弋于深约20米的海洋中。常活动于浅海中上层，垂直移动范围达百余米。肉质细嫩，风味类似于鲍鱼，但价格很低，被成为“穷人的鲍鱼”。西方人因为鱿鱼表皮暗且易变，而称鱿鱼为“魔鬼鱼”；西班牙人吃鱿鱼比较多，他们把鱿鱼加工成不同风味的罐头，鱿鱼酱油，鱿鱼圈等；美国人近几年来也开始提倡吃鱿鱼，他们把鱿鱼加工成类似鲍鱼的形态出售；鱿鱼在日本很受欢迎，已成为日本日常生活中必不可少的水产品，日本人把鱿鱼一般加工成冷冻制品、干制品、珍味制品、盐渍制品、加热杀菌制品。鱿鱼加工中产生的副产物，如皮、内脏、眼及墨囊等，都作为废弃物丢掉，不仅造成了环境污染，也不能提高鱿鱼加工的附加值。鱿鱼全身都是宝，鱿鱼皮中含有大量的胶原蛋白，可用来提取胶原蛋白；内脏中含有促进草虾摄饵的氨基酸，粗脂肪（不饱和脂肪酸的含量很高），蛋白质（可用来生产鱿鱼酱油）；墨囊中的墨汁已被证实具有抗菌功能，还有抗肿瘤和增强免疫的功能。鱿鱼的墨汁约占鱿鱼体重的1.28%，是由肉眼看不见的黑色颗粒构成的黏稠的混悬液，其主要化学成分为黑色素和蛋白多糖复合体，但我国对鱿鱼中所含的墨囊或汁的利用未加重视。研究表明，鱿鱼墨多糖能显著提高免疫低下小鼠的脾脏体重比值、提高血清溶血素含量、增强迟发型变态反应能力、提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力和碳廓清能力，进而能提高免疫低下小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。现有技术如授权公告号为CN100467061C的中国专利技术专利，公开了一种鱿鱼墨汁多糖的制备方法，步骤如下：按下述重量比：活体冷冻经人工分拣的鱿鱼墨汁1至99.985份、2000u/g食品级脂肪酶0.1至0.005份、100万u/g食品级木瓜蛋白酶0.1至0.001份，对墨汁采用脂肪酶和木瓜蛋白酶在温和条件下进行复合酶水解，滤液中加入95%食用乙醇或化学纯丙酮，使墨汁多糖沉淀，沉淀用去离子水溶解后，回收乙醇或丙酮，干燥后的沉淀用不锈钢粉碎机粉碎即成品鱿鱼墨汁多糖。该制备方法克服了多糖物质具有热不稳性和较小的酸碱稳定性，高温或pH>7或pH<5都会引起多糖的氧化和降解的难题。该方法的分离和提取都是非常简便的，利用鱿鱼墨囊为原料，分离并提取得到符合医药原料要求的鱿鱼墨汁多糖，但是该制备方法得到的多糖中杂蛋白和色素含量较高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种杂蛋白和色素除去率高，多糖纯度高，多糖活性高的鱿鱼墨活性多糖。本专利技术针对上述技术中提到的问题，采取的技术方案为：一种鱿鱼墨活性多糖，该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、L-岩藻糖和乳糖六种单糖组成，该鱿鱼墨活性多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用。一种鱿鱼墨活性多糖，该活性多糖的制备方法为：步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，按料液比为1:1.5-2.5向鱿鱼墨中加入蒸馏水，在35-45℃下热水浸提3-5h，然后在0-5℃下继续浸提10-15h，在8000-10000rpm下离心22-28min，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用，水提取粗多糖具有条件温和、简单等特点，超滤可以除去小分子无机盐、低聚糖等杂质，不需要采用其他方法，节约生产成本和能耗；步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶，在pH为6.5-7.5、55-65℃下酶解8-15min，酶解结束后在90-100℃下灭酶10-20min，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，将上清液中加入0.2-0.3倍体积的正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌20-40min，直至除去杂质蛋白，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，再浓缩至原体积的18-25%，再加入3-5倍浓缩液体积的无水乙醇，采用边加入边搅拌的方式，直到沉淀完全析出为止，静置过夜，进行沉淀多糖，然后在转速为8000-12000r/min的离心机中离心15-25min，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖，脂肪和蛋白质的存在不仅会影响鱿鱼墨多糖的纯度，还会影响鱿鱼墨多糖的理化性质、结构及活性，因此除去蛋白质是多糖提取过程中一个必不可少的环节，该步骤结合酶法和正丁醇、氯仿、三乙醇胺方法，能使鱿鱼墨粗多糖中的脂肪被水解成甘油和脂肪酸、蛋白质被水解成氨基酸和低分子肽，进而可初步除去脂肪和蛋白质，同时能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，并保证多糖的存在，有效的降低了多糖的损失率；步骤3：按料液比为1:4-6（g/mL）向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，在70-90℃下加热溶解20-30min，然后在转速为4000-6000r/min的离心机中离心3-8min，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱2-4个柱体积，浓缩收集液，备用，鱿鱼墨粗多糖中含有较多色素杂质，如果直接上色谱柱容易堵塞填料，很难继续上样，增加了分离纯化的难度，该步骤可除去鱿鱼墨粗多糖中的色素，利于后续试验的顺利进行，且该方法使得多糖的损失率较低；步骤4：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用0-2mol/L的NaCl溶液分段梯度洗脱，控制流速为1-2mL/min，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，经6000-10000Da透析袋透析48h，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖，该鱿鱼墨多糖具有提高机体免疫力的作用，通过该作用，多糖可以起到抑制或杀死肿瘤细胞的作用。作为优选，正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的体积比为1:0.2-0.3:0.02-0.03，该混合溶液中正丁醇、氯仿和三乙醇胺的合理比例，能够使混合溶液中的各组分达到增益效果，不仅能够有效的脱除多糖液中游离及酶解的蛋白质，使蛋白质的去除率达到最高，且能大大降低处理形成的凝胶物中夹带有多糖物质，并保证鱿鱼墨多糖的结构，避免多糖和蛋白质结合形成糖蛋白发生凝聚沉淀，大大降低了多糖的损失率。作为优选，固相萃取柱中的填料为微波改性活性炭，其制备方法为：将活性炭置于浓度为3-6%的盐酸溶液中煮沸，并保持40-50min，滤去水分后用去离子水反复冲洗至中性，接着在100-120℃下烘干20-30h，然后将活性炭在微波功率为600-700W的条件下微波辐射4-6min，即得改性活性炭，上述盐酸溶液中含有0.021-0.025%的马兜铃酸，用含有马兜铃酸的盐酸溶液预处理活性炭，可使活性炭中的杂质在微波处理时能够不被晶化，不会造成活性炭微晶层间距变小，且可避免活性炭基本微晶发生热膨胀而造成孔隙塌的现象，保障活性炭的吸附效果，经微波改性后，活性炭孔壁变薄，以前闭塞、半闭塞的孔径也打开，孔隙更发达，表面粗糙不平，这些变化都有利于活性炭对色素的吸附，还能提高吸附速率，同时微波改性还使得活性炭表面碱性官能团增多，酸性官能团减少，有利于活性炭对糖液中各本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种鱿鱼墨活性多糖，其特征在于：所述该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、L‑岩藻糖和乳糖六种单糖组成。

【技术特征摘要】
1.一种鱿鱼墨活性多糖，其特征在于：所述该多糖是由甘露糖、葡萄糖、半乳糖、鼠李糖、L-岩藻糖和乳糖六种单糖组成。2.根据权利要求1所述的一种鱿鱼墨活性多糖，其特征在于：所述多糖的制备方法为：步骤1：从鱿鱼体内取出墨囊挤出鱿鱼墨，向鱿鱼墨中加入蒸馏水，热水浸提后冷水浸提，离心，获得的上清液过超滤膜，即得鱿鱼墨粗多糖提取液，备用；步骤2：将鱿鱼墨粗多糖提取液中加入木瓜蛋白酶和脂肪酶酶解，灭酶，离心，将上清液中加入正丁醇、氯仿和三乙醇胺的混合溶液，剧烈搅拌后离心，浓缩，再加入无水乙醇醇沉，静置过夜，进行沉淀多糖，离心，取沉淀抽滤，无水乙醇、丙酮洗沉淀，即得鱿鱼墨粗多糖；步骤3：向鱿鱼墨粗多糖中加入超纯水，加热溶解，离心，沉淀物重复上述操作2-3次，合并上清液，上已活化的固相萃取柱，用超纯水洗柱，浓缩收集液，备用；步骤4：将浓缩收集液上DEAE-52纤维素离子交换柱，上样后，依次用NaCl溶液分段梯度洗脱，自动部分收集器收集，直至无糖检出，浓缩收集液，透析，冷冻干燥，即得鱿鱼墨多糖。3.根据权利要求2所述的一种鱿鱼墨活性多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤1中鱿鱼墨中和蒸馏水的料液比为1:1.5-2.5，热水浸提温度为35-45℃、时间为3-5h，冷水浸提温度为0-5℃、时间为10-15h。4.根据权利要求2所述的一种鱿鱼墨活性多糖的制备方法，其特征在于：所述步骤2中酶解的pH为6...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨艳，
申请(专利权)人：舟山富晟食品科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33