一种抗肿瘤注射制剂的检测方法技术

本发明专利技术提供了一种抗肿瘤注射制剂的检测方法，所述抗肿瘤注射制剂是由中药材人参、斑蝥、黄芪和刺五加制成，所述检测方法包括性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目。其中，鉴别包括显色反应以及对刺五加、人参、黄芪药材的定量鉴别；检查包括5‑羟甲基糠醛、炽灼残渣、溶液颜色等注射制剂的特殊检查；指纹图谱是采用HPLC法对人参、黄芪、刺五加所含活性成分的表征；含量测定是对产品中总皂苷、紫丁香苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷和斑蝥素的含量进行检测。与现有技术相比，本发明专利技术增加了对刺五加药材的鉴别、5‑羟甲基糠醛等的特殊检查、指纹图谱表征，以及紫丁香苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定，优化了人参、黄芪药材的鉴别方法，以及斑蝥素的含量测定方法，提高了对产品质量检测的要求，更加适合于今后药品的质量控制，保障药品质量和临床药效。

【技术实现步骤摘要】
一种抗肿瘤注射制剂的检测方法
本专利技术属于药品领域，具体涉及一种抗肿瘤注射制剂的检测方法。
技术介绍
癌症是严重威胁人类健康的一大类疾病，艾迪注射制剂由斑蝥、人参、黄芪和刺五加制成，具有清热解毒、消瘀散结的作用，主要用于原发性肝癌，肺癌，直肠癌，恶性淋巴瘤，妇科恶性肿瘤等疾病，上市产品艾迪注射液的现行质量标准编号为WS3—B—3809—98，收载于卫生部药品标准中药成方制剂第二十册。本专利技术在前期的研究中，在质量标准的基础上逐渐增加了一些检测指标，同时优化部分检测环节中试剂、检测手段或者是样品的制备等过程。比如200510200881.2治疗肿瘤的注射制剂的质量控制方法，优化了人参皂苷Re和斑蝥素的含量测定以及人参和黄芪的薄层鉴别；200710078008.X一种艾迪注射制剂的检测方法级分案申请201010531105.1、201010531088.1，优化了人参、黄芪的薄层鉴别中供试品溶液的制备方法及薄层板厚度，以及斑蝥素的含量测定方法；CN200810068789.9艾迪制剂中人参皂苷含量测定方法，优化了对人参皂苷的含量测定。但是随着社会的发展，对于药品的质量控制的要求越来越高，对其中活性成分的鉴别、含量测定等检测指标也逐渐需要进行明确，而且对于寻找快捷方便可控的检测方法的需求也越来越迫切，并且，国家食品药品监督管理局已颁布了《中药注射剂指纹图谱研究的技术要求(暂行)》，中药指纹图谱有望作为一种强制执行的质量措施载入《中华人民共和国药典》，为实现中药走向世界提供有力的质量保证。因此，在外因和内因的双重要求下，如何有效控制该产品的质量，确保该产品的临床疗效，以及满足国家标准对于安全性、有效性等要求，是本申请人长期以来一直研究的问题。
技术实现思路
为解决上述问题，本专利技术提供了一种抗肿瘤注射制剂的检测方法，其质量控制效果好，具体表现为：指纹图谱表征较全面，客观真实地反映了产品内在化学成分的种类与数量，与对照相比相似度高，能有效表征艾迪制剂的产品质量；鉴别方法准确有效，含量测定方法精密度高，重现性好，稳定性好，回收率高，检测方法整体的测量结果准确可靠，提高了艾迪制剂的质量控制标准，可有效地控制产品质量，从而确保其临床疗效。具体地：一种抗肿瘤注射制剂的检测方法，所述注射制剂由斑蝥1-2份、人参30-70份、黄芪75-125份、刺五加130-180份制成注射液，所述检测方法由性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目组成，其特征在于：所述鉴别包括α-萘酚显色反应，以异嗪皮啶为对照、以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6为展开剂、对制剂中刺五加药材的薄层色谱鉴别，以及以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照、以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10-20∶4-8∶0.5-2∶0.2-0.5为展开剂、对制剂中人参和黄芪药材的薄层色谱鉴别；所述检查为溶液的颜色、pH值检查，以甲醇：0.4％冰醋酸＝2-8:92-98为流动相、对注射剂中5-羟甲基糠醛含量进行的HPLC法检查，以及对注射液中炽灼残渣、热原、异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、其他注射剂项目的检查；所述指纹图谱是对制剂中人参、黄芪、刺五加药材，以含0.005％体积量的三氟醋酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.005％体积量的三氟醋酸的水溶液为流动相B，进行梯度洗脱的HPLC法指纹图谱表征过程；所述含量测定是对制剂中人参总皂苷含量进行测定，采用人参皂苷Re对照品为对照的紫外-可见分光光度法；对刺五加中所含的紫丁香苷、黄芪中所含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定，采用甲醇为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱的HPLC法；对斑蝥所含斑蝥素含量进行测定，采用以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷为固定相的气相-毛细管色谱法。所述抗肿瘤注射制剂可以采用上市艾迪注射液的制备方法，也可以采用现有专利或文献提供的方法制备，还可以采取以下方法制备：处方：斑蝥1.5g、人参50g、黄芪100g、刺五加150g；制法：以上四味，人参加50％乙醇温浸，加热回流提取两次，第一次3小时，第二次1.5小时，滤过，回收乙醇，药液备用；药渣与黄芪、刺五加加水煎煮三次，第一次3小时，第二次1.5小时，第三次1小时，滤过，浓缩，与人参药液合并，浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃～70℃)，加乙醇使含醇量至75％，冷藏；滤过，回收乙醇，药液水沉(加水，煮沸，冷藏)；滤过，滤液浓缩至相对密度为1.15～1.25(60℃～70℃)，加乙醇使含醇量至90％，冷藏；滤过，回收乙醇，药液水沉两次；滤过，滤液浓缩，灭菌，冷藏；滤过，用氢氧化钠溶液调pH值至7.0～7.6，灭菌，冷藏；滤过，滤液浓缩，水沉；滤过，超滤，冷藏；超滤，得提取液冷藏备用。斑蝥加水温浸，煎煮四次，每次1小时，滤过，浓缩，以石硫法(氧化钙，亚硫酸)处理两次，灭菌，冷藏；取上清液，浓缩至相对密度1.02～1.10(60℃～70℃)，醇沉两次，加乙醇使含醇量分别至75％、85％，冷藏；滤过，滤液回收乙醇，水沉两次(加水，煮沸，亚硫酸调pH值至4.0～5.0，冷藏)；滤过，亚硫酸调pH值至4.0～5.0，灭菌，冷藏；滤过，超滤，冷藏；超滤，灭菌，得斑蝥提取液冷藏备用。将上述两种提取液混合，加入甘油、聚山梨酯-80，加注射用水稀释至1000ml，调pH值，过滤，灌封，115℃灭菌30分钟，即得。进一步的，所述鉴别方法如下：(1)取注射液50-100ml浓缩至10-20ml后，加乙醇50-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-3次，将沉淀物用5-10ml水溶解，取1-2ml置试管中，微热后加入5％的α-萘酚乙醇溶液5-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5-1ml，在两液面接界处显紫红色环；(2)取注射液50-100ml，用二氯甲烷振摇提取1-3次，每次用量30-60ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液，二氯甲烷提取后的水液备用；另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；(3)取鉴别(2)项下二氯甲烷提取后的水液，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取1-3次，每次用量50-100ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水10-20ml使溶解，通过已处理好的内径1.5cm，长15cm的DA－201大孔吸附树脂柱，用水100-200ml洗脱，弃去洗脱液，再用15-30％的乙醇80-160ml洗脱，弃去洗脱液，再用35-50％的乙醇80-160ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种抗肿瘤注射制剂的检测方法，所述注射制剂由斑蝥1‑2份、人参30‑70份、黄芪75‑125份、刺五加130‑180份制成注射液，所述检测方法由性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目组成，其特征在于：所述鉴别方法为α‑萘酚显色反应，以异嗪皮啶为对照、以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30‑50∶0.3‑0.6∶0.3‑0.6为展开剂、对制剂中刺五加药材的薄层色谱鉴别，以及以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照、以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10‑20∶4‑8∶0.5‑2∶0.2‑0.5为展开剂、对制剂中人参和黄芪药材的薄层色谱鉴别；所述检查为溶液的颜色、pH值检查，以甲醇：0.4％冰醋酸＝2‑8:92‑98为流动相、对注射剂中5‑羟甲基糠醛含量进行的HPLC法检查，以及对注射液中炽灼残渣、热原、异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、其他注射剂项目的检查；所述指纹图谱是对制剂中人参、黄芪、刺五加药材，以含0.005％体积量的三氟醋酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.005％体积量的三氟醋酸的水溶液为流动相B，进行梯度洗脱的HPLC法指纹图谱表征过程；所述含量测定是对制剂中人参总皂苷含量进行测定，采用人参皂苷Re对照品为对照的紫外‑可见分光光度法；对刺五加中所含的紫丁香苷、黄芪中所含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定，采用甲醇为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱的HPLC法；对斑蝥所含斑蝥素含量进行测定，采用以5％二苯基‑95％二甲基聚硅氧烷为固定相的气相‑毛细管色谱法。...

【技术特征摘要】
1.一种抗肿瘤注射制剂的检测方法，所述注射制剂由斑蝥1-2份、人参30-70份、黄芪75-125份、刺五加130-180份制成注射液，所述检测方法由性状、鉴别、检查、指纹图谱、含量测定项目组成，其特征在于：所述鉴别方法为α-萘酚显色反应，以异嗪皮啶为对照、以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6为展开剂、对制剂中刺五加药材的薄层色谱鉴别，以及以人参皂苷Re、Rg1、Rb以及黄芪甲苷为对照、以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10-20∶4-8∶0.5-2∶0.2-0.5为展开剂、对制剂中人参和黄芪药材的薄层色谱鉴别；所述检查为溶液的颜色、pH值检查，以甲醇：0.4％冰醋酸＝2-8:92-98为流动相、对注射剂中5-羟甲基糠醛含量进行的HPLC法检查，以及对注射液中炽灼残渣、热原、异常毒性、过敏反应、溶血与凝聚、其他注射剂项目的检查；所述指纹图谱是对制剂中人参、黄芪、刺五加药材，以含0.005％体积量的三氟醋酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.005％体积量的三氟醋酸的水溶液为流动相B，进行梯度洗脱的HPLC法指纹图谱表征过程；所述含量测定是对制剂中人参总皂苷含量进行测定，采用人参皂苷Re对照品为对照的紫外-可见分光光度法；对刺五加中所含的紫丁香苷、黄芪中所含的毛蕊异黄酮葡萄糖苷进行含量测定，采用甲醇为流动相A、水为流动相B进行梯度洗脱的HPLC法；对斑蝥所含斑蝥素含量进行测定，采用以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷为固定相的气相-毛细管色谱法。2.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法如下：(1)取注射液50-100ml浓缩至10-20ml后，加乙醇50-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-3次，将沉淀物用5-10ml水溶解，取1-2ml置试管中，微热后加入5％的α-萘酚乙醇溶液5-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5-1ml，在两液面接界处显紫红色环；(2)取注射液50-100ml，用二氯甲烷振摇提取1-3次，每次用量30-60ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液，二氯甲烷提取后的水液备用；另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；(3)取鉴别(2)项下二氯甲烷提取后的水液，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取1-3次，每次用量50-100ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水10-20ml使溶解，通过已处理好的内径1.5cm，长15cm的DA－201大孔吸附树脂柱，用水100-200ml洗脱，弃去洗脱液，再用15-30％的乙醇80-160ml洗脱，弃去洗脱液，再用35-50％的乙醇80-160ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl～20μl，分别点于同一硅胶H高效薄层板上进行带状点样，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10-20∶4-8∶0.5-2∶0.2-0.5为展开剂，于30℃以下展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。3.根据权利要求2所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：鉴别方法如下：(1)取注射液50ml浓缩至10ml后，加乙醇50ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤2次，将沉淀物用5ml水溶解，取1ml置试管中，微热后加入5％的α-萘酚乙醇溶液5滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5ml，在两液面接界处显紫红色环；(2)取注射液50ml，用二氯甲烷振摇提取2次，每次用量30ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液，二氯甲烷提取后的水液备用；另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl～2μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝40∶0.5∶0.5为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；(3)取鉴别(2)项下二氯甲烷提取后的水液，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次用量50ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2次，每次用量30ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水10ml使溶解，通过已处理好的内径1.5cm，长15cm的DA-201大孔吸附树脂柱，用水100ml洗脱，弃去洗脱液，再用20％的乙醇80ml洗脱，弃去洗脱液，再用40％的乙醇80ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl～10μl，分别点于同一硅胶H高效薄层板上进行带状点样，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝15∶6∶1∶0.2为展开剂，于30℃以下展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。4.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：对5-羟甲基糠醛的含量检查方法如下：按照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定：取注射液1-2ml，作为供试品溶液；另取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加0.1％甲酸溶液稀释制成每lml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％冰醋酸溶液＝2-8:92-98为流动相；检测波长为284nm；柱温为30℃；理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算不低于4000；精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；计算5-羟甲基糠醛含量。5.根据权利要求4所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：所述5-羟甲基糠醛的含量检查方法中，流动相为甲醇：0.4％冰醋酸溶液＝4:96。6.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：指纹图谱表征方法如下：按照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以含0.005-0.01％体积量的三氟醋酸的乙腈溶液为流动相A，以含0.005-0.01％体积量的三氟醋酸的水溶液为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为210nm；柱温为20℃；流速为每分钟0.7ml；理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于5000；所述梯度洗脱条件为：0-5min，流动相A2％，流动相B98％；5-10min，流动相A2-5％，流动相B98-95％；10-18min，流动相A5-10％，流动相B95-90％；18-30min，流动相A10-15％，流动相B90-85％；30-38min，流动相A15-20％，流动相B85-80％；38-50min，流动相A20-23％，流动相B80-77％；50-65min，流动相A23-38％，流动相B77-62％；65-75min，流动相A38-55％，流动相B62-45％；75-95min，流动相A55-100％，流动相B45-0％；95-110min，流动相A100％，流动相B0％；参照物溶液的制备：取紫丁香苷对照品、刺五加苷E对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇制成每1ml各含50μg的混合溶液，摇匀，即得；供试品溶液的制备：取注射液5-10ml，通过已预处理的固相萃取柱，先以水1ml洗脱，弃去水液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液至2-4ml量瓶中，至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录110分钟的色谱图，即得。7.根据权利要求5所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：所述指纹图谱表征中，流动相A、B中，所含三氟醋酸的体积量为0.005％；所述供试品溶液的制备方法为：取注射液5ml，通过已预处理的固相萃取柱，先以水1ml洗脱，弃去水液，再用甲醇洗脱，收集洗脱液至2-4ml量瓶中，至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。8.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：紫丁香苷、毛蕊异黄酮葡萄糖苷的含量测定方法如下：照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇为流动相A，以水为流动相B，进行梯度洗脱；检测波长为260nm，理论板数按紫丁香苷峰计算应不低于2000；所述梯度洗脱条件为：0-10min，流动相A25％，流动相B75％；10-13min，流动相A25-350％，流动相B75-650％；13-30min，流动相A35-60％，流动相B60-40％；30-31min，流动相A100％，流动相B0％；31-35min，流动相A100％，流动相B0％；对照品溶液的制备：取紫丁香苷对照品、毛蕊异黄酮葡萄糖苷对照品，精密称定，加50％甲醇制成每1ml含紫丁香苷25μg、毛蕊异黄酮葡萄糖苷15μg的混合溶液，即得；供试品溶液的制备：取注射液，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。9.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：斑蝥素的含量测定方法如下：照中国药典2015年版四部通则0521中气相色谱法测定：色谱条件与系统适用性试验：以5％二苯基-95％二甲基聚硅氧烷为固定相的石英毛细管柱，柱长为30m，内径为0.32mm，膜厚度为0.25μm；柱温为程序升温：初始温度为100℃，以每分钟2℃的速率升温至140℃；进样口温度为250℃，检测器温度为300℃；载气为氮气，流速为2.5±0.5ml/分钟；分流进样，分流流量3ml/min，分流比为1:1；理论板数按斑蝥素峰计算应不低于15000，相对标准偏差应不大于3.5％；对照品溶液的制备：取斑蝥素对照品，精密称定，加二氯甲烷制成每1ml含10μg的溶液，即得；供试品溶液的制备：取注射液20-40ml，置分液漏斗中，加入1.8mol/L硫酸溶液2-4ml，混匀，精密加入二氯甲烷2-4ml，振摇提取，静置分层，取二氯甲烷液，滤过，取续滤液，即得；测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各2μl，注入气相色谱仪，测定，计算，即得。10.根据权利要求1所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：人参总皂苷的含量测定方法如下：照中国药典2015年版四部通则0401中紫外-可见分光光度法测定：对照品溶液的制备：取人参皂苷Re对照品，精密称定，加甲醇制成每1ml含1.6mg的溶液，摇匀，即得；标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0μl、20μl、40μl、60μl、80μl、100μl，分别置10ml具塞试管中，置水浴上挥去溶剂，立即取出，放冷，加5％香草醛冰醋酸溶液0.2ml、高氯酸0.8ml，摇匀，置60℃水浴中加热15分钟，取出，用水冷却2分钟，加冰醋酸5ml，摇匀，照紫外—可见分光光度法，在544nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标、浓度为横坐标，绘制标准曲线；供试品溶液的制备：取注射液20-40ml，置分液漏斗中，用三氯甲烷振摇提取2-4次，每次20-30ml，合并三氯甲烷液，用水洗涤2-3次，每次5-10ml，弃去三氯甲烷液，洗液与上述水液合并，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取2-4次，每次50-60ml，合并正丁醇液，加入无水硫酸钠3-5g，搅拌，放至澄清；将正丁醇液移至蒸发皿中，用少量正丁醇洗涤无水硫酸钠，洗液并入蒸发皿中，蒸干，用少量水溶解残渣，通过已处理好的内径1.5cm、长15cm的DA-201大孔吸附树脂柱上，待液面接近棉花层后，用水100-200ml洗脱，控制流速为0.3-0.5ml/min，弃去洗液，再用65-75％乙醇80-100ml洗脱，收集洗脱液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，并转移至5-10ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得；测定法：精密量取供试品溶液100μl，照标准曲线的制备项下的方法，自“置10ml具塞试管中”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中人参皂苷Re的浓度，计算，即得。11.根据权利要求1-10任一项所述的抗肿瘤注射制剂的检测方法，其特征在于：检测方法如下：性状：注射液为浅黄色至浅棕色的澄明液体；鉴别：(1)取注射液50-100ml浓缩至10-20ml后，加乙醇50-100ml，搅匀，滤过，沉淀物用乙醇洗涤1-3次，将沉淀物用5-10ml水溶解，取1-2ml置试管中，微热后加入5％的α-萘酚乙醇溶液5-10滴，摇匀，再沿管壁缓缓加入浓硫酸0.5-1ml，在两液面接界处显紫红色环；(2)取注射液50-100ml，用二氯甲烷振摇提取1-3次，每次用量30-60ml，合并二氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液，二氯甲烷提取后的水液备用；另取异嗪皮啶对照品，加甲醇制成每1ml含0.2mg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl～4μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以二氯甲烷∶甲醇∶甲酸＝30-50∶0.3-0.6∶0.3-0.6为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝色荧光斑点；(3)取鉴别(2)项下二氯甲烷提取后的水液，置分液漏斗中，用水饱和的正丁醇振摇提取1-3次，每次用量50-100ml，合并正丁醇液，用氨试液洗涤2-3次，每次用量30-60ml，弃去氨试液，正丁醇液蒸干，残渣加水10-20ml使溶解，通过已处理好的内径1.5cm，长15cm的DA－201大孔吸附树脂柱，用水100-200ml洗脱，弃去洗脱液，再用15-30％的乙醇80-160ml洗脱，弃去洗脱液，再用35-50％的乙醇80-160ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇2-4ml使溶解，作为供试品溶液；另取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Re对照品、人参皂苷Rb1对照品及黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1ml各含0.5mg的混合溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0502的薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各5μl～20μl，分别点于同一硅胶H高效薄层板上进行带状点样，以三氯甲烷∶甲醇∶水∶甲酸＝10-20∶4-8∶0.5-2∶0.2-0.5为展开剂，于30℃以下展开，取出，晾干，喷以10％硫酸乙醇溶液，加热至斑点显色清晰，置365nm波长的紫外光灯下检视；供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；检查：(1)溶液的颜色：取注射液1-2ml，置10ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，按照中国药典2015年版四部通则0901第一法与黄色8号标准比色液比较，不得更深；(2)pH值：3.8-5.8；(3)5-羟甲基糠醛：按照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定：取注射液1-2ml，作为供试品溶液；另取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加0.1％甲酸溶液稀释制成每lml中含5μg的溶液，作为对照品溶液；照中国药典2015年版四部通则0512中高效液相色谱法测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇：0.4％冰醋酸溶液＝2-8:92-98为流动相；检测波长为284nm；柱温为30℃；理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算不低于4000；精密量取供试品溶液与对照品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪，记录色谱图；计算5-羟甲基糠醛含量；(4)炽灼残渣：取注射液1-2ml，置...

【专利技术属性】
技术研发人员：窦啟玲，杨青波，陆煜玫，段毅，高飞，
申请(专利权)人：贵州益佰制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：贵州,52