一种胸腺法新的合成方法技术

本发明专利技术涉及一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法。本发明专利技术的合成方法可以有效的提高粗品的纯度，降低杂质含量，使之易于纯化，从而降低成本，更加适合于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】
一种胸腺法新的合成方法
本专利技术属医药
，涉及一种胸腺法新的合成方法。
技术介绍
胸腺法新，曾用名胸腺素α1、胸腺肽α1，是一种新型免疫调节因子，1997年由意大利赛生(Sciclone)公司开发上市，商品名称“日达仙”(Zadaxin)，临床上应用胸腺法新提高T细胞的免疫功能，治疗病毒性肝炎和延缓某些老年病的发生与发展。另外，胸腺法新还有抗感染、抗病毒和抗肿瘤的功效，尤其对癌症的免疫性治疗也具有一定的作用。目前胸腺法新的合成方式主要有两种，一种为Boc策略，一种为Fmoc策略，Boc策略由于用到剧毒的HF，现在已经较少使用。关于Fmoc策略有较多的报道，如《天津药学》2001年第13卷第3期《Fmoc新型固相法合成胸腺素α1及其反应途径》描述了以HMP树脂为载体，以DCC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法；《化工学报》2004年第55卷第2期《胸腺素α1的DIC固相化学合成与鉴定》描述了以王树脂为载体，以DIC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法；专利CN101104638A描述了以Fmoc-RinkAmideMBHA树脂和Fmoc-Asp-X合成胸腺法新的方法；专利CN102199205A描述了以羟基官能团树脂为载体，以DIC-HOBT为耦合剂合成胸腺法新的方法。目前合成工艺中存在以下问题：首先，在多肽序列的某些氨基酸残基处，经多次的缩合反应会引起侧链反应；其次，随着肽段的延伸，其溶解性降低，可能形成分子内的折叠结构，即存在所谓“困难序列”，使氨基酸缩合反应很难进行彻底，而且脱除氨基保护基团Fmoc也很困难。这些问题都将导致副产物不断累积，使得在最终的粗品中存在大量的缺失肽及空心肽，目标产物肽收率低，并且这些杂质与目标肽在结构上很相似，难以纯化。本专利技术采用分段合成的策略，可以有效改善或解决上述问题，缩短了合成周期、提高了粗品的纯度，更有利于工业化生产。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法。为了实现本专利技术的目的，专利技术人通过大量试验研究，最终获得了如下技术方案：一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将Fmoc-Asn(Trt)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂；(2)将Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Asn(Trt)-CTC树脂，将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和H2N-Asn(Trt)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂；将Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂。(3)将Fmoc-Lys(Boc)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂；(4)将Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Lys(Boc)-CTC树脂，将Fmoc-Lys(Boc)-OH和H2N-Lys(Boc)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC(片段9-18)树脂；将Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC(片段9-18)树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂。(5)将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂；(6)将Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Glu(OtBu)-CTC树脂，将Fmoc-Ser(tBu)-OH和H2N-Glu(OtBu)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC(片段19-28)树脂；(7)将片段19-28树脂，加入10％-50％哌啶DMF溶液分别脱保护10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂，使用乙酸酐和有机碱对片段19-28N末端氨基乙酰化得到Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu-CTC(片段Ac-19-28)树脂；(8)用含5％TFA的DCM溶液将步骤(2)、步骤(4)和步骤(7)中合成的带侧链保护基的肽片段从树脂上切落，得到H2N-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-OH(片段1-8)，H2N-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-OH(片段9-18)，Ac-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Ala-Ala-Val-Asp(OtBu)-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-OH(片段19-28)；(9)片段合成选用HBTU、HATU或TBTU中的一种，HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一种，DIEA或NMM中的一种，即3种试剂的组合作为缩合试剂，带保护基的氨基酸的用量是1.5～2.5倍量，先将片段9-18用V(DMF)/V(DCM)等于3.0的溶剂溶解，后加入等摩尔量的HBTU、HATU或TBTU中的一种和HOBT、HOAT或6-Cl-HOBT中的一种，待溶解后滴加2倍摩尔量的DIEA或NMM中的本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将Fmoc‑Asn(Trt)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC树脂；(2)将Fmoc‑Asn(Trt)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Asn(Trt)‑CTC树脂，将Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH和H2N‑Asn(Trt)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC(片段1‑8)树脂；将Fmoc‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑CTC(片段1‑8)树脂加入10％‑50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(3)将Fmoc‑Lys(Boc)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc‑Lys(Boc)‑CTC树脂；(4)将Fmoc‑Lys(Boc)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Lys(Boc)‑CTC树脂，将Fmoc‑Lys(Boc)‑OH和H2N‑Lys(Boc)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC(片段9‑18)树脂；将Fmoc‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑CTC(片段9‑18)树脂加入10％‑50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(5)将Fmoc‑Glu(OtBu)‑OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2‑氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc‑Glu(OtBu)‑CTC树脂；(6)将Fmoc‑Glu(OtBu)‑CTC树脂和体积比10％‑50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N‑Glu(OtBu)‑CTC树脂，将Fmoc‑Ser(tBu)‑OH和H2N‑Glu(OtBu)‑CTC树脂耦合，得到Fmoc‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑CTC(片段19‑28)树脂；(7)将片段19‑28树脂，加入10％‑50％哌啶DMF溶液分别脱保护10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂，使用乙酸酐和有机碱对片段19‑28N末端氨基乙酰化得到Ac‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu‑CTC(片段Ac‑19‑28)树脂；(8)用含5％TFA的DCM溶液将步骤(2)、步骤(4)和步骤(7)中合成的带侧链保护基的肽片段从树脂上切落，得到H2N‑Glu(OtBu)‑Val‑Val‑Glu(OtBu)‑Glu(OtBu)‑Ala‑Glu(OtBu)‑Asn(Trt)‑OH(片段1‑8)，H2N‑Ile‑Thr(tBu)‑Thr(tBu)‑Lys(Boc)‑Asp(OtBu)‑Leu‑Lys(Boc)‑Glu(OtBu)‑Lys(Boc)‑Lys(Boc)‑OH(片段9‑18)，Ac‑Ser(tBu)‑Asp(OtBu)‑Ala‑Ala‑Val‑Asp(OtBu)‑Thr(tBu)‑Ser(tBu)‑Ser(tBu)‑Glu(OtBu)‑OH(片段19‑28)；(9)片段合成选用HBTU、HATU或TBTU中的一种，HOBT、HOAT或6‑Cl‑HOBT中的一种，DIEA或NMM中的一种，即3种试剂的组合作为缩合试剂，带保护基的氨基酸的用量是1.5～2.5倍量，先将片段9...

【技术特征摘要】
1.一种胸腺法新的合成方法，采用先三段(片段1～8、片段9～18和片段19～28)分别合成，再片段间进行缩合的方法，其特征在于该方法包括以下步骤：(1)将Fmoc-Asn(Trt)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂在DMF溶液中混合，加入DIEA溶液，经酯化反应得到Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂；(2)将Fmoc-Asn(Trt)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Asn(Trt)-CTC树脂，将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和H2N-Asn(Trt)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂；将Fmoc-Glu(OtBu)-Val-Val-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ala-Glu(OtBu)-Asn(Trt)-CTC(片段1-8)树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(3)将Fmoc-Lys(Boc)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂；(4)将Fmoc-Lys(Boc)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Lys(Boc)-CTC树脂，将Fmoc-Lys(Boc)-OH和H2N-Lys(Boc)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC树脂，重复以上步骤，得到Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC(片段9-18)树脂；将Fmoc-Ile-Thr(tBu)-Thr(tBu)-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Leu-Lys(Boc)-Glu(OtBu)-Lys(Boc)-Lys(Boc)-CTC(片段9-18)树脂加入10％-50％哌啶/DMF溶液分别脱Fmoc保护基10min和20min，抽干脱保护液，用DMF洗涤树脂；(5)将Fmoc-Glu(OtBu)-OH和替代值为0.3mmol/g～0.8mmol/g的2-氯三苯甲基(CTC)树脂混合，经酯化反应得到Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂；(6)将Fmoc-Glu(OtBu)-CTC树脂和体积比10％-50％的哌啶DMF溶液组成的脱保护液混合，得到H2N-Glu(OtBu)-CTC树脂，将Fmoc-Ser(tBu)-OH和H2N-Glu(OtBu)-CTC树脂耦合，得到Fmoc-Ser(tBu)-Glu(OtBu)-CTC树脂，重复...

【专利技术属性】
技术研发人员：张贵民，王孝花，李彦磊，赵亮亮，
申请(专利权)人：鲁南制药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山东,37