蛋白质结晶用凝胶制造技术

本发明专利技术提供一种蛋白质结晶用凝胶，其在含有选自丙烯酰胺、２－丙烯酰胺－２－甲基丙磺酸、甲基丙烯酰二甲基氨基乙基甲基氯化物盐中的至少一种单体的凝胶状物中保持有氯化钠。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及用于进行蛋白质结晶或结晶条件筛选的装置和方法，以及用于使蛋白质结晶从含蛋白质的样品析出的蛋白质结晶剂及其制备方法。
技术介绍
近年来，正在进行称之为结构基因组学的研究，该研究试图通过阐明蛋白质的空间结构与蛋白质的功能的关系，说明编码该蛋白质的基因的功能。蛋白质的空间结构的解析通常首先要对要解析的蛋白质的结晶条件进行筛选。然后，在最适的结晶条件实施结晶。通过将得到的结晶进行X射线结构解析，进行蛋白质空间结构的解析。其中在对蛋白质的结晶条件进行筛选的过程中，直至决定得到用于进行空间结构解析的充分良好的结晶条件之前，要花费很多时间和很多蛋白质样品。由于这个原因，决定结晶条件成为空间结构解析中的瓶颈。另外，也想出以蒸气扩散法为首的各种各样的结晶方法。然而，实验操作烦杂等问题依然很多。所以进行了取代这些已有方法的新的结晶方法和装置的开发、蛋白质结晶条件的筛选、或为了使结晶更迅速、而且用更微量的样品进行，提出了各种蛋白质结晶装置、结晶方法、结晶条件筛选方法的方案。例如在特开平6-321700号公报中提出了使凝胶中含有沉淀剂和蛋白质，通过将它们层叠来抑制溶液中看到的对流，使结晶在凝胶中生长的方法。除此之外，为了使结晶方法简化，进行了利用凝胶状物的尝试。另外，在进行结晶条件的探索时，提出了各种各样的沉淀剂。然而，在利用凝胶状物时，由于凝胶状物和沉淀剂的组合，存在着凝胶白浊，或不能进行凝胶化反应的问题。凝胶如果白浊，存在着不能通过显微镜观察有无结晶状态的问题。另外，本专利技术者中的一部分人以迅速、用微量样品经济地进行蛋白质结晶条件的筛选为目的，提出了在微阵列的芯片上进行结晶实验那样的结晶装置(例如，WO03/053998号小册子)。在WO03/053998号小册子所述的专利技术中使用了微阵列。该微阵列在通过贯通孔形成的各区内保持有凝胶状物。并且在各个凝胶状物中含有很多种类和浓度的蛋白质结晶剂。通过使该微阵列与含蛋白质的样品接触，可以一次对多个结晶条件进行筛选。进而可以用微量的蛋白质样品实施，效率非常高。但是，在上述的蛋白质结晶装置中，在微阵列的区之间会发生含蛋白质的样品和/或结晶剂的移动、混合(污染)。因此，存在结晶析出的条件与预先区内的凝胶状物中含有的结晶剂的浓度和种类不一致的可能性。另外，使用这样的装置需要通过手工作业向结晶剂保持部供给含蛋白质的样品，操作变得烦杂。而自动供给含蛋白质的样品的自动装置价高。本专利技术正是为了解决上述课题而作出的专利技术。本专利技术的目的在于提供不发生凝胶白浊化地使凝胶化反应进行的蛋白质结晶剂及其制备方法，以及能够迅速而且经济地高可靠性地实施蛋白质的结晶实验或结晶条件筛选的蛋白质结晶装置。
技术实现思路
本专利技术提供以下内容。·一种蛋白质结晶装置，其特征是具有蛋白质结晶用微阵列，其具有2个或其以上保持蛋白质结晶剂的结晶剂保持部；和与上述蛋白质结晶用微阵列层叠的板，上述板具有对应于上述结晶剂保持部的可填充含蛋白质样品的结晶区，和设置在该结晶区之间的凹部。·一种蛋白质结晶用凝胶，其在凝胶状物中保持有氯化钠，所述凝胶状物包含选自丙烯酰胺、2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸、甲基丙烯酰基二甲基氨基乙基甲基氯化物盐中的至少一种单体。·一种蛋白质结晶用凝胶，其在凝胶状物中保持有MPD，所述凝胶状物包含二甲基丙烯酰胺。·一种蛋白质结晶剂，其在凝胶状物中保持有磷酸Na/K，所述凝胶状物包含2-丙烯酰胺-2-甲基丙磺酸。·一种蛋白质结晶用凝胶，其在凝胶状物中保持有硫酸铵，所述凝胶状物包含甲基丙烯酰基二甲基氨基乙基甲基氯化物盐。·一种蛋白质结晶用凝胶，其在凝胶状物中保持有丙二酸钠，所述凝胶状物包含丙烯酰胺。·一种蛋白质结晶用凝胶，其在凝胶状物中保持有PEG6k，所述凝胶状物包含聚氧乙烯单丙烯酸酯。附图说明图1是表示本专利技术的蛋白质结晶装置的使用状态的模式图。图2表示本专利技术中使用的蛋白质结晶用的微阵列的例子。图3是表示本专利技术的蛋白质结晶装置的一个例子的模式图。图4是本专利技术中使用的板的一部分的剖面图。图5是本专利技术中使用的板的平面图。图6是表示本专利技术中的板和样品填充辅助工具的使用状态的平面图。图7是本专利技术中使用的支持体的平面图。图8是表示本专利技术的蛋白质结晶装置的使用状态的平面图。符号说明12中空纤维；16结晶剂保持部；18蛋白质结晶用微阵列；20支持体；24板；32结晶区；34凹部具体实施方式以下参照附图对本专利技术的实施方式进行说明。图1是表示本专利技术的蛋白质结晶装置的一个例子的模式图。该例蛋白质结晶装置就像图1所表示的那样，备有支持体20、硅橡胶制的衬垫22、蛋白质结晶用微阵列18、板24。衬垫22具有与蛋白质结晶用微阵列18同样形状和面积的中空部23。在支持体20中设置有与该衬垫22的外周同样形状和大小的微阵列支持部26。在微阵列支持部26中做了一个与衬垫22同一形状的标记28。衬垫22，与标记28位置对准地设置在微阵列支持部26上。并且蛋白质结晶用微阵列18在微阵列支持部26上被容纳设置在衬垫22的中空部23中。这里，为了使设置在板24的结晶区32与蛋白质结晶用微阵列18上的结晶剂保持部16正确接触，优选使蛋白质结晶用微阵列18的上面与支持体20的上面成为同样的高度。图3是板24的中央部被放大的剖面图。在图4中给出了支持体20、蛋白质结晶用微阵列18、板24被组装的状态的一部分剖面图。板24就像图3、4所示那样，具有与蛋白质结晶用微阵列18的各个结晶剂保持部16对应排列的结晶区32和设置在该结晶区32之间的凹部34。另外，各个结晶区32分别被结晶区支持部31的前端支持，所述结晶区支持部是在板24中相对于凹部34为凸的部位。该板24被层叠在由支持体20支持的蛋白质结晶用微阵列18的上面。即，如图4所示那样，结晶区32被结晶剂保持部16密封。进而，各个凹部34处于由结晶区支持部31支持的结晶区32与同样由结晶区支持部31支持的结晶区32之间的位置。以下，将支持体20中支持蛋白质结晶用微阵列18的面称为微阵列支持面100，将在板24中与蛋白质结晶用微阵列18接触的面称为反应面102，而将与此面相反的面称为外侧面104。另外，在板24中，排列结晶区32的区域的外边缘成凹部。因此在板24中形成了成凹状的一定面积的区域。以下，将在板24的反应面中排列结晶区32的凹部的区域称为密封部30。在该例中，蛋白质结晶用微阵列18被设置在支持体20的微阵列支持部26上。而蛋白质结晶用微阵列18只要被设置为结晶剂保持部16对应结晶区32，将该结晶区32密封那样即可。即蛋白质结晶用微阵列18可以粘接在支持体20上，也可以使微阵列支持部26形成凹状，不粘接在该微阵列支持部的底部而层叠在该底部上。支持体20的材料和形状只要是可固定蛋白质结晶用微阵列18的材料和形状，就没有特别限定。作为支持体20的材料，通过使用透光性材料，结晶装置本身就能够迅速而且简便地用显微镜确认生成的结晶、随时观察结晶的生长过程，因此优选。作为透光性材料，可列举例如，丙烯酸树脂、聚碳酸酯树脂、聚苯乙烯树脂、聚二甲基硅氧烷(PDMS)、玻璃等。对于支持体20实施用于决定蛋白质结晶用微阵列18的固定位置的标记。标记方法只要是能够将蛋白质结晶用微阵列18正确固定的方法，则没有特别限本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种蛋白质结晶用凝胶，在含有选自丙烯酰胺、２－丙烯酰胺－２－甲基丙磺酸、甲基丙烯酰二甲基氨基乙基甲基氯化物盐中的至少一种单体的凝胶状物中保持有氯化钠。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：田中熏，渡边信久，竹内浩史，井关隆幸，涩谷望，西岛千晴，
申请(专利权)人：三菱丽阳株式会社，
类型：发明
国别省市：JP[日本]