一种阿魏酸酯酶基因、基因工程菌株以及制备方法和用途技术

本发明专利技术提供了一种阿魏酸酯酶基因，其来源于中国牦牛瘤胃微生物，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。本发明专利技术还提供了含有该基因的马克斯克鲁维酵母重组表达载体及基因工程菌株，并提供了制备阿魏酸酯酶的方法和制得的阿魏酸酯酶的用途。将阿魏酸酯酶在马克斯克鲁维酵母表达系统中重组表达，经高密度发酵48小时后胞内和胞外的阿魏酸酯酶的活力分别为686.35U/mL和346.34U/mL。马克斯克鲁维酵母重组表达的阿魏酸酯酶可释放玉米麸皮中的阿魏酸。利用本发明专利技术获得的阿魏酸酯酶，可用于食品加工、饲料添加、生物医药、纤维素物质生物转化、生物能源等领域。

Ferulic acid esterase gene, genetic engineering strain, preparation method and use thereof

The present invention provides a ferulic acid esterase gene, which is derived from the rumen microorganism of the Chinese yak, and has the nucleotide sequence, as shown by the SEQ ID NO.1, and encodes the amino acid sequence shown by the SEQ ID NO.2. The invention also provides a recombinant expression vector of the Marx Creevy yeast and a genetic engineering strain containing the gene, and provides a method for preparing ferulic acid esterase and the use of ferulic acid esterase. The ferulic acid ester enzyme was expressed in the expression system of Marx Creevy yeast. After 48 hours of high density fermentation, the activity of the intracellular and extracellular ferulic acid ester enzyme was 686.35U/mL and 346.34U/mL, respectively. Ferulic acid, a recombinant expression of Marx's yeast, can release ferulic acid from corn bran. Ferulic acid esterase obtained by the invention can be used for food processing, feed addition, biological medicine, cellulose biological transformation, bio energy and other fields.

【技术实现步骤摘要】
一种阿魏酸酯酶基因、基因工程菌株以及制备方法和用途
本专利技术属生物工程领域，具体涉及一种阿魏酸酯酶基因、含有该基因的马克斯克鲁维酵母重组表达载体和基因工程菌株以及阿魏酸酯酶的制备方法和用途。
技术介绍
阿魏酸(ferulicacid)的化学名称为3-甲氧基-4-羟基肉桂酸，广泛存在于植物细胞壁的木质素与木质素之间、木质素与半纤维素之间形成交接。阿魏酸是天然抗氧化剂，能清除体内的过氧化氢、超氧自由基、羟自由基、过氧化亚硝基，能调节生理机能、抑制产生自由基的酶、增加清除自由基酶的活性，具有抗菌消炎以及抗突变和防癌作用。阿魏酸广泛存在于食品原料中，麦麸中的阿魏酸是桂皮酸的衍生物之一，有顺式和反式2种构象，反式阿魏酸在美国、日本已被允许用作食品添加剂，在医药、食品和化妆品工业中也被广泛应用。阿魏酸的生产方法有化学合成法、碱法和酶法，近年来酶解法制备阿魏酸受到广泛关注。目前已有文献报道利用阿魏酸酯酶从麦麸、玉米麸皮、啤酒糟、谷物纤维、甜菜渣、燕麦壳和苹果渣等原材料中提取阿魏酸(张璟等，食品科学，2003，24：63-68；薛枫等，粮食与饲料工业，2006：17-19)。阿魏酸酯酶(EC3.1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种阿魏酸酯酶基因，其特征在于，所述阿魏酸酯酶基因来源于中国牦牛瘤胃微生物，具有如SEQ ID NO.1所示的核苷酸序列，编码如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列。

【技术特征摘要】
1.一种阿魏酸酯酶基因，其特征在于，所述阿魏酸酯酶基因来源于中国牦牛瘤胃微生物，具有如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列，编码如SEQIDNO.2所示的氨基酸序列。2.一种马克斯克鲁维酵母重组表达载体，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母重组表达载体由如权利要求1所述的阿魏酸酯酶基因克隆到马克斯克鲁维酵母表达载体中获得。3.一种马克斯克鲁维酵母基因工程菌株，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母基因工程菌株由如权利要求2所述的马克斯克鲁维酵母重组表达载体导入马克斯克鲁维酵母宿主细胞中，经筛选与鉴定获得。4.如权利要求2或3所述的马克斯克鲁维酵母基因工程菌株，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母表达载体不含有分泌信号肽或含有分泌信号肽。5.如权利要求4所述的马克斯克鲁维酵母基因工程菌株，其特征在于，所述分泌信号肽为来源于马克斯克鲁维酵母自身的菊粉酶信号肽或来源于酿酒酵母的alpha信号肽。6.如权利要求3或5所述的马克斯克鲁维酵母基因工程菌株，其特征在于，所述马克斯克鲁维酵母表达载体的DNA序列均来源于马克斯克鲁维酵母自身，不含有来源于大肠杆菌基因组上的DNA...

【专利技术属性】
技术研发人员：吕红，刘洋，周峻岗，余垚，
申请(专利权)人：复旦大学，
类型：发明
国别省市：上海,31