红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株及其应用制造技术

本发明专利技术属于微生物技术领域，具体涉及红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株及其应用。所述短小芽孢杆菌RFKF6菌株的保藏编号为CGMCC No.14873。所述短小芽孢杆菌RFKF6菌株具有显著的抑菌活性，能产生高活性的果胶酶和ε‑聚赖氨酸，可应用于抑菌剂、果胶酶和ε‑聚赖氨酸的制备，亦可以活菌形式替代抑菌剂、果胶酶和ε‑聚赖氨酸应用于工业生产。

Symbiotic Bacillus cereus RFKF6 strain of Actinidia chinensis and its application

The invention belongs to the field of microorganism technology, and specifically relates to the symbiotic Bacillus cereus RFKF6 strain of red heart Actinidia and its application. The preservation number of Bacillus subtilis RFKF6 is CGMCC No.14873. The Bacillus subtilis strain RFKF6 has significant antibacterial activity, which can produce highly active pectinase and epsilon polylysine, and can be used in the preparation of bacteriostat, pectinase and epsilon polylysine. It can also be used in the form of live bacteria instead of bacteriostat, pectinase and epsilon polylysine.

【技术实现步骤摘要】
红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株及其应用
本专利技术涉及微生物
，具体涉及红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)RFKF6菌株及其应用。
技术介绍
希瓦氏菌(Shewanella)是近年来发现的一类海洋细菌，于1985年被正式命名。一方面，希瓦氏菌以其出色的生物修复功能及作为生物燃料的巨大潜能为人类所利用。另一方面，腐败希瓦氏菌等也是导致冷水鱼腐败的主要原因，更是作为致病菌对人类健康及水产养殖造成严重威胁。但是目前研究的焦点主要集中在其能源开发的有利方面，对其作为人-鱼共患的有害方面的研究却还处于起步阶段。目前对希瓦氏菌的防治多采用化学合成药物和抗生素等传统方法，这不仅使细菌的耐药性增加，导致微生物的生态失调，产生二重感染，而且还使抗生素在生物体内残留，人体长期摄入可导致慢性中毒等，影响水产养殖业的可持续发展；滥用抗生素也使我国水产品出口屡屡受阻，给水产业造成了巨大损失。
技术实现思路
本专利技术以抑制希瓦氏菌为目的，从红心猕猴桃中分离筛选拮抗菌，最终得到了一种短小芽孢杆菌RFKF6菌株。所述短小芽孢杆菌RFKF6菌株具有显著的希瓦氏菌抑菌活性，且能产生高活性的果胶酶和ε-聚赖氨酸。所述短小芽孢杆菌RFKF6菌株可应用于抑菌剂、果胶酶和ε-聚赖氨酸的制备，亦可以活菌形式替代抑菌剂、果胶酶和ε-聚赖氨酸应用于工业生产。本专利技术提供了一种红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株，其保藏编号为CGMCCNo.14873。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6的培养方法：将所述短小芽孢杆菌RFKF6接种于培养基中，25～40℃培养10～72h。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在非治疗抑菌中的应用。优选的，所述抑菌包括抑制希瓦氏菌。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在制备治疗希瓦氏菌感染型疾病的药物中的应用。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在制备ε-聚赖氨酸中的应用。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在制备果胶酶中的应用。有益效果：本专利技术提供了一株红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株，其保藏编号为CGMCCNo.14873。所属短小芽孢杆菌BFKF6菌株的代谢产物抑菌活性强，尤其对希瓦氏菌具有显著的抑制效果，抑菌圈直径达17mm，而作为阳性对照的75％乙醇的抑菌圈直径仅为8mm。所述短小芽孢杆菌BFKF6菌株及其代谢产物可应用于食物保鲜、防腐以及治疗希瓦氏菌感染型疾病的药物制备。所述短小芽孢杆菌RFKF6还能产生高活性的果胶酶，可应用于果胶酶的制备，亦可以活菌形式替代果胶酶应用于果汁榨取澄清、改善果酒品质等食品领域，以及织物精炼、漂白、脱胶等医药纺织领域。所述短小芽孢杆菌RFKF6还能产生ε-聚赖氨酸，可应用于ε-聚赖氨酸的制备，亦可以活菌形式替代ε-聚赖氨酸应用于和ε-聚赖氨酸相关的产业。生物保藏说明短小芽孢杆菌(Bacilluspumilus)RFKF6，于2017年11月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，地址为北京市中国科学院微生物研究所，保藏号为CGMCCNo.14873。具体实施方式本专利技术以抑制希瓦氏菌为目的，从红心猕猴桃中分离筛选拮抗菌，最终得到了一株短小芽孢杆菌RFKF6菌株。所述红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株的保藏编号为CGMCCNo.14873，其革兰氏反应为阴性，芽孢菌落特征为圆形，较小，边缘光滑，不透明，白色，具有显著的希瓦氏菌抑菌活性，且能产生高活性的果胶酶和ε-聚赖氨酸。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株的培养方法，将所述短小芽孢杆菌RFKF6接种于培养基中，25～40℃培养10～72h。本专利技术对所述培养基的类型和来源没有特殊限定，本领域常规用于细菌培养的完全培养基、牛肉膏蛋白胨培养基、果胶琼脂培养基或M3G培养基均可；在本专利技术中，若以扩繁为培养目的，所述培养基优选为完全培养基，培养温度优选为27～33℃，更优选为30℃；培养时间优选为24～48h，更优选为30h。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在非治疗抑菌中的应用，所述非治疗抑菌中的应用包括食物保鲜、医疗保健器械抑菌等，优选包括抑制希瓦氏菌。将所述短小芽孢杆菌RFKF6活菌(终浓度103cfu/mL)或其代谢产物ε-聚赖氨酸添加到需要保存的食物中，可起到良好的抑菌的作用，进而达到良好的食物保鲜、防腐功能。本专利技术提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在制备治疗希瓦氏菌感染型疾病的药物中的应用。将短小芽孢杆菌RFKF6的代谢产物ε-聚赖氨酸制成医学上可接受的外用剂型，敷于感染部位，可达到明显的抑制希瓦氏菌的效果。本专利技术还提供了上述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在制备ε-聚赖氨酸和/或果胶酶中的应用。将所述短小芽孢杆菌RFKF6接种于发酵培养基中培养，得到发酵液；从所述培养液中分离、纯化得到ε-聚赖氨酸和/或果胶酶。在本专利技术中，所述分离和纯化的方法采用本领域常规的ε-聚赖氨酸/果胶酶分离、纯化方法，从发酵液中分离、纯化得到ε-聚赖氨酸/果胶酶。下面结合实施例对本专利技术提供的红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株及其应用作详细说明，但不能把它们理解为对本专利技术保护范围的限定。实施例1对希瓦氏菌高抑制活性的短小芽孢杆菌RFKF6菌株的获得a.将干净、新鲜红心猕猴桃在流水下冲洗掉表面的尘土，在无菌环境下依次用75％乙醇、2％次氯酸钠分别消毒5min，再用无菌水反复冲洗，在超净工作台上，用无菌剪刀去皮，将果肉剪成边长1cm的小块，每个完全培养基的培养皿上放5段；27℃恒温培养。b.在无菌环境中，用接种针分别挑取平板上的菌落反复划线培养至出现纯菌株保存。c.抑菌活性的检测：希瓦氏菌(Shewanella)采用牛肉膏蛋白胨培养基。将菌种接种于牛肉膏蛋白胨液体培养基中，振荡培养24h作指示菌。用移液枪取指示菌液(OD600＝0.9)100μL于牛肉膏蛋白胨固体培养基上，用无菌三角涂棒涂抹均匀，然后用记号笔在培养皿底部的外面将牛肉膏蛋白胨固体培养基培养皿分成六个区，每个区分别放入一张滤纸片，再分别用移液枪移取红心猕猴桃内生菌株(纯菌株)发酵物样品10μL滴到滤纸片中央，置于37℃培养箱中培养三天。每个纯菌株做3次重复处理，阳性对照为75％酒精，阴性对照为空白液体培养基。观察指示菌的生长情况，测定抑菌圈的直径大小。其中RFKF6菌株发酵液对希瓦氏菌的抑菌圈直径为17mm，显著高于其他菌株及阳性对照75％乙醇(抑菌直径仅8mm)的抑菌活性；利用16sRNA分子鉴定RFKF6菌株，确定其为短小芽孢杆菌，菌落特征为圆形，较小，边缘光滑，不透明，白色。实施例2RFKF6保鲜效果验证实验a.将RFKF菌株于完全培养基的液体培养基中，在30℃振荡培养30h。取发酵菌液，离心，分别收集菌体和收集发酵上清液，无菌水悬浮菌体至终浓度103cfu/mL，菌株发酵上清液用0.2μm滤膜过滤获得无菌发酵上清液。b.分别将菌悬液和无菌发酵上清液喷洒于小黄鱼鱼体表面(空白对照不喷涂样品)，分别装袋于4℃冷藏。分别在第0、2、4d取样进行细菌总数、pH值的测定。结果表明，随着贮藏时间的增加，各组小黄鱼的细菌总数均有增加，但菌体悬液和无菌发酵上清液处理的小黄本文档来自技高网...

【技术保护点】
红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株，其保藏编号为CGMCCNo.14873。

【技术特征摘要】
1.红心猕猴桃共生短小芽孢杆菌RFKF6菌株，其保藏编号为CGMCCNo.14873。2.权利要求1所述短小芽孢杆菌RFKF6的培养方法，其特征在于：将所述短小芽孢杆菌RFKF6接种于培养基中，25～40℃培养10～72h。3.权利要求1所述短小芽孢杆菌RFKF6菌株在非治疗抑菌中的应用。4...

【专利技术属性】
技术研发人员：王思扬，
申请(专利权)人：王思扬，
类型：发明
国别省市：辽宁,21