本发明专利技术属于医药领域，提供了番泻叶乙醇提取物的新的用途，检测了番泻叶乙醇提取物对细胞GLUT4表达和转运的影响，以及细胞葡萄糖摄取的实验。另外，本申请中还研究了番泻叶乙醇提取物的作用机理和相关信号通路。为研发番泻叶乙醇提取物药物用于治疗二型糖尿病提供了依据。本发明专利技术的有益效果为：通过检测细胞GLUT4表达和转运，以及细胞葡萄糖摄取的实验，发现番泻叶乙醇提取物具有促进GLUT4的表达及转运和葡萄糖摄取的功效，有望应用于缓解二型糖尿病引起的胰岛素抵抗，改善患者血糖水平。
Use of senna leaf alcohol extract in preparing medicine for treating type two diabetes mellitus
The invention belongs to the medical field, provides a new use of the senna leaf ethanol extract, and detects the effect of the senna leaf ethanol extract on the expression and transport of cell GLUT4 and the experiment of cell glucose uptake. In addition, the mechanism and signaling pathways of ethanol extract from senna leaf were studied in this application. The aim is to provide evidence for the development of ethanol extract from senna leaf in the treatment of type two diabetes. The beneficial effect of the invention is that by detecting GLUT4 expression and transport, and the experiment of cell glucose uptake, it is found that the senna leaf ethanol extract has the effect of promoting the expression and transport of GLUT4 and glucose uptake. It is expected to be applied to alleviate isdosin resistance caused by type two diabetes and improve the blood glucose level of patients.
【技术实现步骤摘要】
番泻叶乙醇提取物在制备治疗二型糖尿病药物中的用途
本专利技术属于中医药领域，经过试验发现番泻叶乙醇提取物能够促进细胞GLUT4(葡萄糖转运蛋白4)转运和摄取葡萄糖，可以用于治疗二型糖尿病的新药开发。
技术介绍
二型糖尿病，称为非胰岛素依赖型糖尿病，又称为胰岛素抵抗综合症。二型糖尿病患者在整个糖尿病人群中占90％～95％。体内糖脂代谢异常是二型糖尿病的主要特征。在二型糖尿病发病的过程中，机体可以正常产生胰岛素有时甚至过多，但是产生的胰岛素却不能正常的发挥降血糖的功能，换言之，一旦患者出现胰岛素抵抗，胰岛β细胞代偿性分泌胰岛素能力丧失，血糖水平就会升高，引起二型糖尿病。二型糖尿病的发病机理十分复杂，尚未完全阐明。目前血胰岛素过多症或胰岛素分泌过度是胰岛素抵抗非常普遍的结果。如果未及时控制，二型糖尿病常会引起如高血压、血脂异常、动脉硬化、肾功能衰竭等一系列慢性并发症。因二型糖尿病并不是由胰岛素分泌不足导致，故胰岛素注射对于治疗无效。目前临床开放的一系列降糖药物对改善二型糖尿病患者的血糖水平有一定作用，主要有双胍类药物，磺脲类药物和α-糖苷酶抑制剂等药物。但长期易引起肠胃不适、药物依赖性、脑能量供应不足等较多副作用。目前的研究证明二型糖尿病与葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)的转位和表达调控有关。因此，可以针对GLUT4为靶点寻找筛选出治疗二型糖尿病的新药物。番泻叶，拉丁学名：FoliumSennae，来源为豆科植物狭叶番泻或尖叶番泻的小叶。原产于热带非洲埃及、阿拉伯及印度。在中国台湾、广西、云南等地广泛分布。番泻叶性味甘、微苦、寒，现代医学研究表明番泻叶有泻下、止血、抗菌、防虫等功效。中国专利技术专利《CN107260793A一种番泻叶乙醇提取物及其用途》中公开了番泻叶乙醇提取物具有治疗哮喘病及支气管炎的用途，但是利用番泻叶乙醇提取物促进GLUT4表达及转运从而治疗二型糖尿病的研究，国内外尚未有相关的报道。
技术实现思路
本专利技术提供了番泻叶乙醇提取物的新的用途，检测了番泻叶乙醇提取物对细胞GLUT4表达和转运的影响，以及细胞葡萄糖摄取的实验。另外，本申请中还研究了番泻叶乙醇提取物的作用机理和相关信号通路。为研发番泻叶乙醇提取物药物用于治疗二型糖尿病提供了依据。所述番泻叶乙醇提取物的制备方法如下：称取番泻叶粉末，按照液料比为14:0.5～2的比例在番泻叶粉末中加入质量浓度为30～70％的乙醇溶液浸泡20～30h，然后在50～70℃的温度下水浴加热回流2～4次，收集提取液，将提取液过滤并合并后得到番泻叶乙醇提取液，然后将番泻叶乙醇提取液真空旋转蒸发，即制得番泻叶乙醇提取物。本专利技术中具体研究结论如下：(1)番泻叶乙醇提取物能够促进L6细胞的葡萄糖摄取。(2)番泻叶乙醇提取物能够促进L6细胞GLUT4的表达及转运。(3)番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4的转运涉及AMPK、PI3K/AKT、PKC相关信号通路。本专利技术的有益效果：通过检测细胞GLUT4表达和转运，以及细胞葡萄糖摄取的实验，发现番泻叶乙醇提取物具有促进GLUT4的表达及转运和葡萄糖摄取的功效，有望应用于缓解二型糖尿病引起的胰岛素抵抗，改善患者血糖水平。虽然中国专利技术专利《CN103142952A一种治疗2型糖尿病的药剂》公开了一种中药组合物，该组合物由三四十味中药材组成，其中包含有番泻叶。但是分析其整个药物的药理，可知番泻叶在其中所发挥的为促泄的功效。本申请中相比而言是番泻叶乙醇提取物单体应用在治疗2型糖尿病方面的保护。本申请中从细胞实验水平证明番泻叶乙醇提取物在治疗2型糖尿病方面的效果，包括番泻叶乙醇提取物对细胞GLUT4的表达和转运，以及细胞葡萄糖摄取的影响；还研究了番泻叶乙醇提取物的作用分子机理和相关信号通路，为研发番泻叶乙醇提取物药物用于治疗二型糖尿病提供了依据。附图说明图1.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞的葡萄糖摄取；图2.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4转运；图3.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4表达；图4.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4的转运被AMPK信号通路抑制剂CompoundC、PI3K/AKT信号通路抑制剂wortmannin、PKC信号通路抑制剂6983抑制。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做详细具体的说明，但是本专利技术的保护范围并不局限于以下实施例。1.番泻叶乙醇提取物的提取方法：称取100g番泻叶粉末，按照液料比为14:1的比例在番泻叶粉末中加入质量浓度为50％的乙醇溶液浸泡24h，然后在60℃的温度下水浴加热回流3次，收集提取液，将提取液过滤并合并后得到番泻叶乙醇提取液，然后将番泻叶乙醇提取液真空旋转蒸发，即制得番泻叶乙醇提取物。将番泻叶乙醇提取物溶解于3％的DMSO中并用于生物活性实验检测。2.细胞葡萄糖摄取实验：将L6细胞按1×104-5×104的密度种于96孔板内。用含2％FBS的α-mem培养液将L6细胞分化5-7天。然后将细胞饥饿2小时，之后加入含有150μg/mL2-NBDG的60μg/mL番泻叶乙醇提取物在37℃培养箱培养30min。30min后对细胞离心5min。去掉上清液，加入葡萄糖检测试剂盒缓冲液离心5min，再去掉上清。再加入试剂盒缓冲液混匀。在485nm激发波长和535发射波长下检测2-NBDG的荧光吸收值。该试验进行了3次独立重复实验，并设立了对照组和胰岛素组。3.激光共聚焦显微镜检测GLUT4转运：本专利技术使用稳定表达IRAP的L6细胞(IRAP-mOrange-L6)作为研究对象。IRAP是一种跨膜氨基肽酶蛋白，目前研究已证明IRAP与GLUT4存在高度共定位关系。因此可以利用观测IRAP–mOrange来监控L6细胞内GLUT4的转运情况。首先将IRAP-mOrange-L6用无血清培养液饥饿2小时，之后在激光共聚焦显微镜下观察IRAP-mOrange的荧光并检测细胞膜上的荧光强度，从而检测细胞GLUT4的转运情况。4.WesternBlotting：用无血清培养液饥饿细胞2小时，然后加入相应药物处理，之后立即将细胞置于冰上用冷的PBS洗三遍。加入蛋白酶抑制剂PMSF，将细胞刮起。将细胞分别用27规格和12规格的注射器抽提破碎12次，该操作在冰上进行。将细胞在500g离心10min，取上清加入SDS-PAGEloadingbuffer，混匀后65℃变性10min。所得蛋白样品经过SDS-PAGE电泳、转膜、封闭后孵育相应的一抗和二抗。然后用ECL显影检测蛋白条带。实验结果如下：图1.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞的葡萄糖摄取图2.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4转运图3.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4表达图4.番泻叶乙醇提取物促进L6细胞GLUT4的转运被AMPK信号通路抑制剂CompoundC、PI3K/AKT信号通路抑制剂wortmannin、PKC信号通路抑制剂6983抑制。针对上述实验结果进行分析如下：(1)番泻叶乙醇提取物促进L6细胞的葡萄糖摄取。如图1所示，番泻叶乙醇提取物(SennaEthanolExtract)显著促进了L6细胞的葡萄糖摄取。而且番泻叶乙醇提取物对L6细胞葡萄糖摄取的促进效果与胰岛素(insulin)相当。(2)番泻叶乙醇提取物本文档来自技高网...
【技术保护点】
番泻叶乙醇提取物在促进细胞中的葡萄糖转运蛋白4表达、转运及摄取葡萄糖中的用途。
【技术特征摘要】
1.番泻叶乙醇提取物在促进细胞中的葡萄糖转运蛋白4表达、转运及摄取葡萄糖中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：番泻叶乙醇提取物在制备治疗二型糖尿病的药物中的用途。3.根据权利要求1或2所述的用途，其特征在于：所述番泻叶乙醇提取物的制备方法如下：称取番泻叶...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵平，明倩，刘庆华，邱俊莹，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北,42
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