由组分VI制造AFOD静脉注射剂的方法技术

本主题涉及一种制造AFOD静脉注射剂的方法，包括将组分IV1+IV4糊剂与WFI一起溶解；加入乙酸钠，调节pH值，搅拌直至完全溶解；冷却；进行压滤；收集包含新发现的蛋白质KH 24、KH 25、KH 26和KH 27的AFOD糊剂；用缓冲液溶解糊剂；离心；用深度过滤器过滤；加入吐温‑80；冷却；调节pH值并在冷却的同时加入冷的醇；离心以获得第二AFOD糊剂；用缓冲液溶解第二糊剂并调节pH值；用深度过滤器过滤；超滤；接受WFI透析；纳米过滤去除病毒；浓缩并调节pH值；添加稳定剂；填装并进行无菌过滤，以得到AFOD静脉注射剂。本发明专利技术涉及液体或冻干形式的AFOD静脉注射剂，用于预防和杀死HIV‑1和HIV‑2。

The method of making AFOD intravenous injection by component VI

This topic involves a method for the manufacture of AFOD intravenous injections, including dissolving the component IV1+IV4 paste with WFI, adding sodium acetate, regulating the pH value, stirring until completely dissolved, cooling and pressing the filter, and collecting the AFOD paste containing the newly discovered protein KH, KH, KH, KH, KH, 26 and KH 27, and dissolve the paste with buffer solution; Centrifuge; filtering with a depth filter; adding Twain 80; cooling; adjusting pH value and adding cold alcohol at the same time as cooling; centrifuging to obtain second AFOD paste; dissolving second paste with buffer solution and regulating pH value; using a deep filter; ultrafiltration; receiving WFI dialysis; nanofiltration to remove the virus; concentrating and regulating pH value. , add stabilizer, fill and carry out aseptic filtration to get AFOD intravenous injection. The invention relates to a AFOD intravenous injection of liquid or lyophilized form for the prevention and killing of HIV 1 and HIV 2.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】由组分VI制造AFOD静脉注射剂的方法
本专利申请要求于2015年4月2日提交的美国临时专利申请No.62/142,197的优先权，其由本专利技术人提交，并且通过引用将其整体并入本文。本主题涉及一种AFOD静脉注射剂，其从组分IV获得并且具有新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27。具体而言，本主题涉及治疗健康状况，特别是病毒HIV-1和HIV-2。
技术介绍
组分IV(Fr.IV)是血浆衍生产物工业中的废弃部分。其主要含有人血白蛋白、载脂蛋白、转铁蛋白、α1抗胰蛋白酶结合珠蛋白、波形蛋白和新发现的蛋白质。人类免疫缺陷病毒(HIV)攻击免疫系统，后者是人体对疾病的天然防御。如果一个人感染了HIV，就很难抵抗感染和疾病。HIV-1和HIV-2是两种不同的病毒株，其中HIV-1在世界范围内占主导地位，而HIV-2则集中在西非。
技术实现思路
AFOD是来自人血浆的组分IV的新型血浆衍生产物。AFOD含有15种人蛋白质，其中4种是新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27。根据本主题，AFOD可以从组分IV糊剂回收得到，其包括15种现有的和新近发现的静脉注射抗HIV的蛋白质。在这些蛋白质中，11种是现有的蛋白质，4种是新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27。本主题的最终产物不仅阻止HTV-1和HIV-2的复制，而且还杀死HIV-1和HIV-2。因此，可以从世界上根除并预防HIV-1和HIV-2感染。本主题的一个实施方案涉及一种制造AFOD静脉注射剂的方法，包括以下步骤：a)以1:9的稀释比用冷的注射用水(WFI)将组分IV1+IV4糊剂溶解以产生悬浮液；b)向该悬浮液中加入乙酸钠以达到20mM的浓度，将该悬浮液的pH值调节至约3～8，并搅拌直至完全溶解；c)将该悬浮液冷却至0～20℃的温度；d)用过滤器进行压滤；e)收集包含新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27的第一AFOD糊剂；f)在pH3～8的条件下以1:9的稀释比用TRIS-HCL缓冲液将该第一AFOD糊剂溶解；g)在10℃的温度下离心该第一AFOD糊剂以获得上清液；h)用深度过滤器过滤该上清液以获得第一澄清滤液；i)在该第一澄清滤液中添加吐温-80至1重量％的浓度，以及TNBP至0.3重量％的浓度，同时将溶液在25℃的温度下保持6小时；j)将该溶液冷却至1℃的温度；k)调节pH至约3～8，加入冷的醇至10～40重量％的浓度，同时冷却直至温度为-5℃；l)离心以获得第二AFOD糊剂；m)在pH3～8的条件下以1:50的稀释比用TRIS-HCL缓冲液将该第二AFOD糊剂溶解，并调节pH至约3～8，以获得第二溶液；n)用深度过滤器过滤该第二溶液以获得第二澄清滤液；o)用超滤膜将该第二澄清滤液超滤至3重量％的浓度；p)用10体积％的冷WFI透析该第二澄清滤液；q)用20nm过滤器对该第二澄清滤液进行纳米过滤以除去病毒；r)将该第二澄清滤液浓缩至7.5重量％蛋白质并将pH调节至约7；s)向该第二澄清滤液中加入白蛋白至2.5重量％的浓度作为稳定剂；并且t)填装并对该第二澄清滤液进行无菌过滤，以得到AFOD静脉注射剂。本主题的一个实施方案涉及一种治疗患者的方法，包括用从制造AFOD静脉注射剂的方法获得的AFOD静脉注射剂对有此需要的患者进行给药，其中该AFOD静脉注射剂将受损的和有病的细胞转化或修复成健康的细胞，其中该AFOD静脉注射剂保护细胞改变，并且其中该AFOD静脉注射剂将信号发送给患者身体以产生健康的新细胞，从而防止新细胞受细胞内和细胞外损伤信号的影响。本主题的一个实施方案涉及一种阻止HIV-1和HIV-2在患者体内复制的方法，包括用从制造AFOD静脉注射剂的方法获得的AFOD静脉注射剂对有此需要的患者进行给药。本主题的一个实施方案涉及一种杀死患者体内的HIV-1和HIV-2的方法，包括用从制造AFOD静脉注射剂的方法获得的AFOD静脉注射剂对有此需要的患者进行给药。本主题的一个实施方案涉及一种预防患者体内感染HIV-1和HIV-2的方法，包括用从制造AFOD静脉注射剂的方法获得的AFOD静脉注射剂对有此需要的患者进行给药。本主题的一个实施方案涉及根据制造AFOD静脉注射剂的方法生产的AFOD静脉注射剂。附图说明图1是描绘了从组分IV(AFODRAAS)生产AFOD的流程图。图2显示了组分IV和来自组分IV(AFODRAAS)的AFOD的2D电泳，其显示了新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27。图3显示了5种HIV-1株和对照病毒AMLV中AFCCRAAS的抑制率。结果表明，当稀释率小于1:40时，抑制率约为60％。在对照病毒AMLV中也观察到抑制。通过处理后48小时对细胞形态的观察，发现高浓度的细胞毒性。图4显示了AFCCKH、AFODRAAS101和AFCCRAAS的细胞毒性测试结果。测试样品以1:1/5稀释开始，然后是1:4.5、1:13.5、1:40.5、1:121.5、1:364.5、1:1093.5和1:3280.5，其中稀释率为三倍，总计八次稀释。细胞计数试剂盒8(CCK-8)是所使用的测试试剂盒，程序按照制造商的手册进行。结果显示RAAS的某些细胞毒性，其可能导致HIV的抑制。具体实施方式除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语都具有与目前描述的主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在提供数值范围(例如，浓度范围、百分比范围或比率范围)的情况下，应当理解，除非上下文另外明确指出，在所述范围的上限和下限之间的以下限单位的十分之一为基准的每个中间值，以及在所述范围内的任何其他已说明的值或中间值均被涵盖在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，并且这样的实施方案也涵盖在所述主题内，受到所述范围中的任何明确排除的端值的限制。在所述范围包括一个或两个端值的情况下，排除了所包括端值中任一者或两者的范围也包括在所述主题中。在整个申请中，各种实施方案的描述使用措辞“包含”；然而，本领域技术人员将会理解，在某些特定情况下，可以替代地使用措辞“基本上由……组成”或“由……组成”来描述实施方案。为了更好地理解本教导且绝不限制本教导的范围，除非另有说明，表示数量、百分比或比例的所有数字以及在说明书和权利要求书中使用的其他数值应被理解为在所有情况下均由术语“约”来修饰。因此，除非有相反指示，在下面的说明书和所附权利要求书中提出的数字参数都是近似值，其可以根据所希望获得的性质而变化。最低限度，每个数字参数至少应该根据所报告的有效数字的数目并通过使用普通的四舍五入技术来解释。本主题的一个实施方案涉及一种制造AFOD静脉注射剂的方法，包括以下步骤：a)以1:9的稀释比用冷的注射用水(WFI)将组分IV1+IV4糊剂溶解以产生悬浮液；b)向该悬浮液中加入乙酸钠以达到20mM的浓度，将该悬浮液的pH调节至约3～8，并搅拌直至完全溶解；c)将该悬浮液冷却至0～20℃的温度；d)用过滤器进行压滤；e)收集包含新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27的第一AFOD糊剂；f)在pH3～8的条件下以1:9的稀释比用TRIS-HCL缓冲液将该第一AFOD糊剂溶解；g)在本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制造AFOD静脉注射剂的方法，包括以下步骤：a)以1:9的稀释比用冷的注射用水(WFI)将组分IV1+IV4糊剂溶解以产生悬浮液；b)向该悬浮液中加入乙酸钠以达到20mM的浓度，将该悬浮液的pH调节至约3～8，并搅拌直至完全溶解；c)将该悬浮液冷却至0～20℃的温度；d)用过滤器进行压滤；e)收集包含新发现的蛋白质KH 24、KH 25、KH 26和KH 27的第一AFOD糊剂；f)在pH 3～8的条件下以1:9的稀释比用TRIS‑HCL缓冲液将该第一AFOD糊剂溶解；g)在10℃的温度下离心该第一AFOD糊剂以获得上清液；h)用深度过滤器过滤该上清液以获得第一澄清滤液；i)在该第一澄清滤液中添加吐温‑80至1重量％的浓度，以及TNBP至0.3重量％的浓度，同时将溶液在25℃的温度下保持6小时；j)将该溶液冷却至1℃的温度；k)调节pH至约3～8，加入冷的醇至10～40重量％的浓度，同时冷却直至温度为‑5℃；l)离心以获得第二AFOD糊剂；m)在pH 3～8的条件下以1:50的稀释比用TRIS‑HCL缓冲液将该第二AFOD糊剂溶解，并调节pH至约3～8，以获得第二溶液；n)用深度过滤器过滤该第二溶液以获得第二澄清滤液；o)用超滤膜将该第二澄清滤液超滤至3重量％的浓度；p)用10体积％的冷WFI透析该第二澄清滤液；q)用20nm过滤器对该第二澄清滤液进行纳米过滤以除去病毒；r)将该第二澄清滤液浓缩至7.5重量％蛋白质并将pH调节至约7；s)向该第二澄清滤液中加入白蛋白至2.5重量％的浓度作为稳定剂；并且t)填装并对该第二澄清滤液进行无菌过滤，以得到AFOD静脉注射剂。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.02 US 62/142,1971.一种制造AFOD静脉注射剂的方法，包括以下步骤：a)以1:9的稀释比用冷的注射用水(WFI)将组分IV1+IV4糊剂溶解以产生悬浮液；b)向该悬浮液中加入乙酸钠以达到20mM的浓度，将该悬浮液的pH调节至约3～8，并搅拌直至完全溶解；c)将该悬浮液冷却至0～20℃的温度；d)用过滤器进行压滤；e)收集包含新发现的蛋白质KH24、KH25、KH26和KH27的第一AFOD糊剂；f)在pH3～8的条件下以1:9的稀释比用TRIS-HCL缓冲液将该第一AFOD糊剂溶解；g)在10℃的温度下离心该第一AFOD糊剂以获得上清液；h)用深度过滤器过滤该上清液以获得第一澄清滤液；i)在该第一澄清滤液中添加吐温-80至1重量％的浓度，以及TNBP至0.3重量％的浓度，同时将溶液在25℃的温度下保持6小时；j)将该溶液冷却至1℃的温度；k)调节pH至约3～8，加入冷的醇至10～40重量％的浓度，同时冷却直至温度为-5℃；l)离心以获得第二AFOD糊剂；m)在pH3～8的条件下以1:50的稀释比用TRIS-HCL缓冲液将该第二AFOD糊剂溶解，并调节pH至约3～8，以获得第二溶液；n)用深度过滤器过滤该第二溶液以获得第二澄清滤液；o)用超滤膜将该第二澄清滤液超滤至3重量％的浓度；p)用10体积％的冷WFI透析该第二澄清滤液；q)用20nm过滤器对该第二澄清滤液进行纳米过滤以除去病毒；r)将该第二澄清滤液浓缩至7.5重量％蛋白质并将pH调节至约7；s)向该第二澄清滤液中加入白蛋白至2.5...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·黄，
申请(专利权)人：K·黄，
类型：发明
国别省市：美国,US