由组分III制造静脉注射免疫球蛋白的方法技术

本主题涉及从血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，包括在缓冲液中将组分III糊剂复原；调整pH值和温度；加入乙醇，然后逐渐降低温度；离心并过滤上清液；超滤去除醇；进行弱阴离子交换层析；超滤以达到所需的蛋白质浓度；无菌过滤；纳米过滤去除病毒；并在低pH下温育以进行病毒灭活以获得包含纯化的IVIG的所得组分III悬浮液。本主题涉及用于液体和冻干形式的IVIG，其具有14种新发现的蛋白质，即KH 26、KH 27、KH 28、KH 29、KH 30、KH 31、KH 32、KH 33、KH 39、KH 40、KH 41、KH 42、KH 43和KH 44。

The method of producing intravenous immunoglobulin by component III

This topic refers to the method from the plasma component III made of purified IVIG, included in the buffer component of III paste will recover; adjusting the pH value and temperature; adding ethanol, and then gradually reduce the temperature; and the centrifugal filtration supernatant by ultrafiltration; alcohol; weak anion exchange chromatography; ultrafiltration in order to achieve the desired protein concentration; aseptic filtration; virus removal nanofiltration; and at low pH incubation for virus inactivation to obtain the group containing purified IVIG III suspension. This topic relates to liquid and lyophilized form of IVIG, which has 14 kinds of newly found protein, namely KH 26, KH 27, KH 28, KH 29, KH 30, KH 31, KH 32, KH 33, KH 39, KH 40, KH 41, KH 42, KH 43 and KH 44.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】由组分III制造静脉注射免疫球蛋白的方法
本专利申请要求于2015年4月2日提交的美国临时专利申请No.62/142,212的优先权，其由本专利技术人提交，并且通过引用将其整体并入本文。本主题涉及由血浆组分III生产的静脉注射免疫球蛋白(IVIG)及其应用，特别是用于治疗和预防丙型肝炎病毒。具体而言，本主题涉及由包含14种新发现的蛋白质，即KH26、KH27、KH28、KH29、KH30、KH31、KH32、KH33、KH39、KH40、KH41、KH42、KH43和KH44的组分III制造用于液体和冻干形式的IVIG的方法。
技术介绍
免疫球蛋白G(IgG)是一种抗体并且是由四条肽链组成的蛋白质复合物，这四条肽链为两条相同的重链和两条相同的轻链，其排列成典型的抗体单体的Y形。每个IgG有两个抗原结合位点。代表人类约75％的血清抗体的IgG是循环系统中最常见的抗体类型。IgG分子通常由血浆B细胞产生并释放。抗体是体液免疫的主要成分。IgG是血液和细胞外液中发现的主要抗体类型，可以控制身体组织的感染。IgG通过结合多种病原体如病毒、细菌和真菌来保护身体免受感染。在血浆衍生工业中，IgG通常从人血浆的组分II纯化。然而，一定百分比的IgG可能会从组分III糊剂中沉淀出来，其包括34种现有的和新发现的蛋白质。
技术实现思路
在本主题的一个实施方案中，发现34种现有的和新发现的蛋白质存在于从血浆提取的组分III中。14种新发现的蛋白质和20种现有蛋白质可以被加工、纯化以制备免疫球蛋白的静脉注射液(IVIG)。在一个实施方案中，至多20％对人给药的IVIG可以是从组分III纯化的。在一个实施方案中，通过添加新发现的蛋白质，免疫球蛋白的静脉注射液不仅阻止丙型肝炎病毒的复制，而且还预防丙型肝炎病毒感染。在34种蛋白质中，14种是根据本主题新发现的蛋白质。根据本主题，IgG可以从包含这14种新发现的蛋白质的组分III糊剂中回收用于针对丙型肝炎病毒静脉注射。回收的产品不仅阻止丙型肝炎病毒的复制，而且还杀死丙型肝炎病毒。因此，可以从世界上根除并预防丙型肝炎病毒感染。在一个实施方案中，本主题涉及由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，包括以下步骤：a)在氯化钠柠檬酸钠缓冲液中将组分III糊剂复原以获得经复原的组分III；b)将经复原的组分III的pH调节至3～8的范围和-5℃～30℃的温度以获得经调节的组分III；c)将乙醇添加到经调节的组分III中至10～40％，然后逐渐降低温度至-10℃～20℃；d)离心收集上清液；e)用10CP+90SP过滤器过滤该上清液以获得所得溶液；f)将所得溶液超滤以去除醇；g)进行弱阴离子交换层析以收集流通溶液；h)对该流通溶液进行超滤以达到所需的蛋白质浓度；i)对该流通溶液进行无菌过滤；j)用20nm过滤器对该流通溶液进行纳米过滤以去除病毒；和k)在低pH下温育该流通溶液进行病毒灭活以获得包含纯化的IVIG的所得组分III悬浮液。附图说明图1是描绘了从组分III处理IVIG的方法的流程图。图2A-C通过2D电泳分析显示了常规GammaRAAS(图2A)、组分IIIIVIG第一批(图2B)和组分IIIIVIG第二批(图2C)的比较。在GammaRAAS中，发现了来自组分II糊剂的已知蛋白，但是不包含在来自组分III的IVIG中的14种新发现的蛋白质。具体实施方式除非另有定义，本文所使用的所有技术和科学术语都具有与目前描述的主题所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。在提供数值范围(例如，浓度范围、百分比范围或比率范围)的情况下，应当理解，除非上下文另外明确指出，在所述范围的上限和下限之间的以下限单位的十分之一为基准的每个中间值，以及在所述范围内的任何其他已说明的值或中间值均被涵盖在所述主题内。这些较小范围的上限和下限可以独立地包括在较小范围内，并且这样的实施方案也涵盖在所述主题内，受到所述范围中的任何明确排除的端值的限制。在所述范围包括一个或两个端值的情况下，排除了所包括端值中任一者或两者的范围也包括在所述主题中。在整个申请中，各种实施方案的描述使用措辞“包含”；然而，本领域技术人员将会理解，在某些特定情况下，可以替代地使用措辞“基本上由……组成”或“由……组成”来描述实施方案。为了更好地理解本教导且绝不限制本教导的范围，除非另有说明，表示数量、百分比或比例的所有数字以及在说明书和权利要求书中使用的其他数值应被理解为在所有情况下均由术语“约”来修饰。因此，除非有相反指示，在下面的说明书和所附权利要求书中提出的数字参数都是近似值，其可以根据所希望获得的性质而变化。最低限度，每个数字参数至少应该根据所报告的有效数字的数目并通过使用普通的四舍五入技术来解释。本主题的一个实施方案涉及一种由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，包括以下步骤：a)在氯化钠柠檬酸钠缓冲液中将组分III糊剂复原以获得经复原的组分III；b)将经复原的组分III的pH调节至3～8的范围和-5℃～30℃的温度以获得经调节的组分III；c)将乙醇添加到经调节的组分III中至10～40％，然后逐渐降低温度至-10℃～20℃；d)离心收集上清液；e)用10CP+90SP过滤器过滤该上清液以获得所得溶液；f)将所得溶液超滤以去除醇；g)进行弱阴离子交换层析以收集流通溶液；h)对该流通溶液进行超滤以达到所需的蛋白质浓度；i)对该流通溶液进行无菌过滤；j)用20nm过滤器对该流通溶液进行纳米过滤以去除病毒；和k)在低pH下温育该流通溶液进行病毒灭活以获得包含纯化的IVIG的所得组分III悬浮液。在一个实施方案中，组分III糊剂可以通过科恩(Cohn)乙醇分馏法获得。在一个实施方案中，所得的组分III悬浮液还包含蛋白质KH26、KH27、KH28、KH29、KH30、KH31、KH32、KH33、KH39、KH40、KH41、KH42、KH43和KH44。在一个实施方案中，将经调节的组分III与冷的醇缓缓混合以达到10～40％的最终浓度和-10℃～20℃的温度。可以将乙醇添加到经调节的组分III中至18～20％，可以将温度逐渐降低至-7℃至-5℃。在本主题的一个实施方案中，流通溶液用10K截止膜进行超滤。从组分III制造纯化的IVIG的方法还可以包括调节流通溶液的蛋白质浓度和pH。在一个实施方案中，弱阴离子交换层析使用DEAE琼脂糖凝胶FF作为层析介质来进行。在一个实施方案中，无菌过滤是0.22μm无菌过滤。本主题的一个实施方案涉及一种从血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，其中所得组分III悬浮液时通过在25℃下以pH4填装并低pH孵育21天进行病毒灭活而获得的。此外，本主题的一个实施方案涉及一种阻止丙型肝炎病毒在患者体内复制的方法，包括用由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法获得的纯化的IVIG对有此需要的患者进行给药。本主题的一个实施方案涉及一种杀死患者体内的丙型肝炎病毒的方法，包括用由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法获得的纯化的IVIG对有此需要的患者进行给药。本主题的一个实施方案涉及一种预防患者体内感染丙型肝炎病毒的方法，包括用由血浆组分III制造纯化IVIG的方法获得的纯化IVIG对有此需要的患者进行给药。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，包括以下步骤：a)在氯化钠柠檬酸钠缓冲液中将组分III糊剂复原以获得经复原的组分III；b)将经复原的组分III的pH调节至3～8的范围和‑5℃～30℃的温度以获得经调节的组分III；c)将乙醇添加到经调节的组分III中至10～40％，然后逐渐降低温度至‑10℃～20℃；d)离心收集上清液；e)用10CP+90SP过滤器过滤该上清液以获得所得溶液；f)将所得溶液超滤以去除醇；g)进行弱阴离子交换层析以收集流通溶液；h)对该流通溶液进行超滤以达到所需的蛋白质浓度；i)对该流通溶液进行无菌过滤；j)用20nm过滤器对该流通溶液进行纳米过滤以去除病毒；和k)在低pH下温育该流通溶液进行病毒灭活以获得包含纯化的IVIG的所得组分III悬浮液。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2015.04.02 US 62/142,2121.一种由血浆组分III制造纯化的IVIG的方法，包括以下步骤：a)在氯化钠柠檬酸钠缓冲液中将组分III糊剂复原以获得经复原的组分III；b)将经复原的组分III的pH调节至3～8的范围和-5℃～30℃的温度以获得经调节的组分III；c)将乙醇添加到经调节的组分III中至10～40％，然后逐渐降低温度至-10℃～20℃；d)离心收集上清液；e)用10CP+90SP过滤器过滤该上清液以获得所得溶液；f)将所得溶液超滤以去除醇；g)进行弱阴离子交换层析以收集流通溶液；h)对该流通溶液进行超滤以达到所需的蛋白质浓度；i)对该流通溶液进行无菌过滤；j)用20nm过滤器对该流通溶液进行纳米过滤以去除病毒；和k)在低pH下温育该流通溶液进行病毒灭活以获得包含纯化的IVIG的所得组分III悬浮液。2.权利要求1的方法，其中该组分III糊剂是通过科恩乙醇分馏法获得的。3.权利要求1的方法，其中所得组分III悬浮液还包含蛋白质KH26、KH27、KH28、KH29、KH30、KH31、KH32、KH33、KH39、KH40、KH41、KH42、KH43和KH44。4.权利要求1的方法，其中将经调节的组分III与冷的醇缓缓混合以达到10～40％的最终浓度和-10℃～20℃的温度。5.权利要求1的方法，其中将乙醇添加到经调节的组分III中至18～20％，然后将温度逐渐降低至-7℃至-5℃。6.权利要求1的方法，其中对该流通溶液用10K截止膜进行超滤。7.权利要求1的方法，...

【专利技术属性】
技术研发人员：K·黄，
申请(专利权)人：K·黄，
类型：发明
国别省市：美国,US