一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法技术

本发明专利技术涉及一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，所述方法采用的是直接串联‑反相‑亲水作用色谱质谱联用方法，所述方法包括如下步骤：步骤1样品溶液的制备；步骤2标准系列溶液的制备；步骤3内标溶液的制备；步骤4供试品溶液的制备；步骤5取步骤4所得溶液注入直接串联反相‑亲水作用液相色谱质谱联用系统，得到31种分析物的提取离子流图，根据提取离子流图计算复方丹参提取物或相关药材中31种成分的含量。

A method for simultaneous determination of 31 components in Compound Salvia miltiorrhiza extract or related medicinal materials

The present invention relates to a method for simultaneous determination of 31 components in Compound Radix Salviae miltiorrhiza extract or related medicinal materials. The method is used in the method of direct series reverse phase reversal hydrophilic interaction chromatography mass spectrometry. The methods include the following steps: Step 1 sample solution preparation; step 2 standard series solution preparation; step 3 internal standard solution. Preparation of liquid; step 4 preparation of sample solution; step 5, step 4 is injected into the solution by direct series reverse phase liquid chromatography mass spectrometry (GC MS). The extraction ion flow chart of 31 analytes is obtained, and the content of 31 components in Compound Radix Salviae miltiorrhiza extract or related medicinal materials is calculated according to the extraction ion flow chart.

【技术实现步骤摘要】
一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法
：本专利技术涉及一种中药有效成分的检测方法，特别涉及一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法。
技术介绍
：质量平衡的研究对于阐明中药化学物质组的组成具有重要意义。中药化学物质组成极其复杂，含有众多的初生代谢产物和次生代谢产物。前期研究表明，复方丹参滴丸(由丹参、三七、冰片制成，具体制备方法见《中国药典》2015年版)主要含有寡糖、氨基酸、核苷、有机酸、酚酸、皂苷和丹参酮类化合物。由于这些化合物的结构、物理化学性质差异大，研究者们通常多采用多种分析方法对不同类型的化合物进行定量分析，例如使用氨基酸分析仪检测氨基酸，使用高效液相色谱-蒸发光散射检测器检测寡糖和皂苷，使用高效液相色谱-紫外检测器或液相色谱质谱联用仪对酚酸和丹参酮。多种分析方法的应用为质量平衡的研究带来了极大不便。反相色谱：流动相极性大于固定相极性的情况，称为反相色谱。非极性键合相色谱可作反相色谱。在现代液相色谱中应用最广泛，现代液相色谱分析工作的70％以上是在非极性键合固定相上进行的。亲水作用色谱：可以被看作正相色谱向水性流动相领域的延续。流动相是水相缓冲液(＜40％)及有机溶剂。固定相是强亲水性的极性吸附剂，如硅胶键合相，极性聚合物填料或离子交换吸附剂。这些固定相的共同特点是它们和水的作用力很强，因此属于“亲水性”。使用的梯度和反相模式相反。初始条件包括高比例有机相，典型的浓度是95％有机相如乙腈，逐步降低到水相。因此，又被称为反反相色谱。直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统：将两种分离模式的色谱柱直接串联，使得从强极性到弱极性的物质均能得到较好的保留，从而达到分离的目的。复方丹参提取物或相关药材为现有药物，由三七、丹参和冰片经过加工制备而成。具有活血化瘀，理气止痛之功效。用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。本专利技术所述复方丹参提取物或相关药材包括市售的复方丹参制剂，如复方丹参滴丸或复方丹参片，也包括三七和丹参的共同提取物或分别提取再混合的提取物，所述提取物市场上有售，如复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏，也可参考现有技术中的制备方法制备得到，也包括三七和丹参药材，如丹参粉末和三七粉末。本专利技术所述复方丹参提取物或相关药材，其中的31种有效成分分别为：腺嘌呤、琥珀酸、焦谷氨酸、腺苷、尿苷、丹参素、缬氨酸、赖氨酸、脯氨酸、原儿茶醛、葡萄糖、蔗糖、精氨酸、丹酚酸D、三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、迷迭香酸、三糖、紫草酸、丹酚酸B、丹酚酸A、人参皂苷Rb1、丹酚酸C、人参皂苷Rg2、人参皂苷Rh1、人参皂苷Rd、四糖、隐丹参酮、丹参酮I、丹参酮IIA。针对现有质量平衡研究方法的不足，本研究建立了直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统，可以对复方丹参提取物或相关药材中的7大类、31种成分进行同时测定。本专利技术建立了直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用系统，对复方丹参提取物或相关药材中性质差异极大的7大类、31种成分进行测定，可应用于复方丹参提取物或相关药材的质量评价，具有全面、准确、快速的特点。
技术实现思路
：本专利技术提供了一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，该方法采用的是直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用。本专利技术提供的方法包括以下步骤：步骤1样品溶液的制备：取复方丹参提取物或相关药材，用甲醇配制成甲醇溶液；步骤2标准系列溶液的制备：分别取31种成分的标准品，用甲醇配制成甲醇溶液；步骤3内标溶液的制备：取内标物L-赖氨酸-4，4，5，5-d4、地西泮和氯霉素，分别用甲醇配制成甲醇溶液；步骤4供试品溶液的制备：将步骤1或步骤2所得溶液分别与步骤3的内标溶液混合；步骤5取步骤4所得供试品溶液注入直接串联反相-亲水作用液相色谱质谱联用系统，得到31种分析物的提取离子流图，根据提取离子流图计算复方丹参提取物或相关药材中31种成分的含量。上述步骤1-4的顺序不是时间顺序上的限制，可以相互置换。上述方法中，所述复方丹参提取物或相关药材选自：复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏、丹参或三七。优选地，所述步骤1：样品溶液的制备为：分别取复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏、丹参粉末或三七粉末0.10g，精密称定，加入60-80％甲醇8-12mL，超声处理20-40min，按照16,000rpm离心8-12min，过0.22μm滤膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中；进一步优选，步骤1：样品溶液的制备为：分别取复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏、丹参粉末和三七粉末0.10g，精密称定，加入70％甲醇10mL，超声处理30min，按照16,000rpm离心10min，过0.22μm滤膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中；优选地，步骤2：标准系列溶液的制备为：称取待测物标准品适量，精密称定，分别加入60-80％甲醇水制成浓度为450-550μg/mL的溶液，作为各待测物储备液，分别精密量取各待测物储备液适量，用60-80％甲醇水制成浓度为70000ng/mL的四糖、浓度为50000ng/mL的蔗糖、浓度为12000ng/mL的丹酚酸B、浓度为8000ng/mL的人参皂苷Rg1、浓度为6000ng/mL的葡萄糖、浓度为4000ng/mL的三糖、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rb1、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rd、浓度为2000ng/mL的焦谷氨酸、浓度为2000ng/mL的迷迭香酸、浓度为2000ng/mL的三七皂苷R1和浓度为1000ng/mL的其余待测物的混合标准品储备液；取混合标准品储备液适量，使用60-80％甲醇按照稀释倍数2、5、10、20、50、100、200、500和1000制得系列浓度混合标准溶液，4℃冰箱保存备用；进一步优选，步骤2：标准系列溶液的制备为：称取待测物标准品适量，分别加入70％甲醇水制成浓度为500μg/mL的溶液，作为各待测物储备液，分别精密量取各待测物储备液适量，用70％甲醇水制成浓度为70000ng/mL的四糖、浓度为50000ng/mL的蔗糖、浓度为12000ng/mL的丹酚酸B、浓度为8000ng/mL的人参皂苷Rg1、浓度为6000ng/mL的葡萄糖、浓度为4000ng/mL的三糖、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rb1、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rd、浓度为2000ng/mL的焦谷氨酸、浓度为2000ng/mL的迷迭香酸、浓度为2000ng/mL的三七皂苷R1和浓度为1000ng/mL的其余待测物的混合标准品储备液；取混合标准品储备液适量，使用70％甲醇按照稀释倍数2、5、10、20、50、100、200、500和1000制得系列浓度混合标准溶液，4℃冰箱保存备用；优选地，步骤3：内标溶液的制备为：称取L-赖氨酸-4，4，5，5-d4(IS1)、地西泮(IS2)和氯霉素(IS3)适量，精密称定，分别加入60-80％甲醇水制成浓度为450-550μg/mL的溶液，作为各内标储备液，分别精密量取各内标储备液适量，用70％甲醇水制成各内标浓度为100ng/mL的IS对照品溶液，4℃冰箱保存备用；进一步优选，步骤3为：内标溶液的制备：称取L-赖氨酸-4，4，5，5-d4(I本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，该方法采用的是直接串联‑反相‑亲水作用色谱质谱联用法。

【技术特征摘要】
1.一种同时测定复方丹参提取物或相关药材中31种成分的方法，该方法采用的是直接串联-反相-亲水作用色谱质谱联用法。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述检测方法包括以下步骤：步骤1样品溶液的制备：取复方丹参提取物或相关药材，用甲醇配制成甲醇溶液；步骤2标准系列溶液的制备：分别取31种成分的标准品，用甲醇配制成甲醇溶液；步骤3内标溶液的制备：取内标物L-赖氨酸-4,4,5,5-d4、地西泮和氯霉素，分别用甲醇配制成甲醇溶液；步骤4供试品溶液的制备：将步骤1或步骤2所得溶液分别与步骤3的内标溶液混合；步骤5取步骤4所得溶液注入直接串联反相-亲水作用液相色谱质谱联用系统，得到31种分析物的提取离子流图，根据提取离子流图计算复方丹参提取物或相关药材中31种成分的含量。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中步骤1样品溶液的制备方法为：分别取复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏、丹参粉末或三七粉末0.10g，精密称定，加入60-80％甲醇8-12mL，超声处理20-40min，按照16,000rpm离心8-12min，过0.22μm滤膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，其中步骤1样品溶液的制备方法为：分别取复方丹参浸膏、丹参浸膏、三七浸膏、丹参粉末或三七粉末0.10g，精密称定，加入70％甲醇10mL，超声处理30min，按照16,000rpm离心10min，过0.22μm滤膜，所有溶液在分析前均保存在4℃冰箱中。5.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，其中步骤2标准系列溶液的制备方法为：称取待测物标准品适量，精密称定，分别加入60-80％甲醇水制成浓度为450-550μg/mL的溶液，作为各待测物储备液，分别精密量取各待测物储备液适量，用60-80％甲醇水制成浓度为70000ng/mL的四糖、浓度为50000ng/mL的蔗糖、浓度为12000ng/mL的丹酚酸B、浓度为8000ng/mL的人参皂苷Rg1、浓度为6000ng/mL的葡萄糖、浓度为4000ng/mL的三糖、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rb1、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rd、浓度为2000ng/mL的焦谷氨酸、浓度为2000ng/mL的迷迭香酸、浓度为2000ng/mL的三七皂苷R1和浓度为1000ng/mL的其余待测物的混合标准品储备液；取混合标准品储备液适量，使用60-80％甲醇按照稀释倍数2、5、10、20、50、100、200、500和1000制得系列浓度混合标准溶液，4℃冰箱保存备用；优选地，所述步骤2标准系列溶液的制备方法为：称取待测物标准品适量，精密称定，分别加入70％甲醇水制成浓度为500μg/mL的溶液，作为各待测物储备液，分别精密量取各待测物储备液适量，用70％甲醇水制成浓度为70000ng/mL的四糖、浓度为50000ng/mL的蔗糖、浓度为12000ng/mL的丹酚酸B、浓度为8000ng/mL的人参皂苷Rg1、浓度为6000ng/mL的葡萄糖、浓度为4000ng/mL的三糖、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rb1、浓度为4000ng/mL的人参皂苷Rd、浓度为2000ng/mL的焦谷氨酸、浓度为2000ng/mL的迷迭香酸、浓度为2000ng/mL的三七皂苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：佟玲，李云飞，李东翔，孙万阳，芦勤玮，
申请(专利权)人：天士力医药集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：天津,12