一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法技术

本发明专利技术涉及中药技术领域的提取方法，尤其涉及一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法。本发明专利技术利用气流粉碎进行板蓝根的粉碎处理，能够更加细化板蓝根结构，不会对提取多糖造成影响，通过破坏板蓝根的机械支撑壁膜结构，后期可以使多糖溶出的更加完全，蒸汽爆破进行前处理，利用高温饱和蒸汽快速渗透到板蓝根细胞组织中，并通过瞬间泄压实现原料的组分分离和结构变化，从而破坏板蓝根的细胞组织，破坏纤维束之间的相互连接，使细胞壁破裂，形成疏松多孔结构，纤维束相互分离，细胞壁破裂，使得包裹在纤维束或细胞内的功能性成分被释放，明显降低了传质阻力，达到提高多糖提取率的目的。

A pretreatment method for Radix Isatidis polysaccharide extracted by fermentation

The invention relates to an extraction method in the field of Chinese medicine technology, in particular to a pretreatment method for Radix Isatidis polysaccharide extracted and extracted from Radix Isatidis. The invention uses air pulverization to pulverization of Radix Isatidis root, which can further refine the structure of Isatis and blue root, and will not affect the extraction of polysaccharide. By destroying the structure of the mechanical supporting wall membrane of the Radix Isatidis, it can make the dissolving of the polysaccharide more completely in the later stage, the steam blasting is pretreated, and the high temperature saturated steam is used quickly to permeate. In the tissue of Radix Isatidis, the component separation and structural change of raw materials are realized by instantaneous pressure relief, which destroys the cell tissue of the Radix Isatidis, destroys the interconnections between the fiber bundles, causes the cell wall to break up, forms loose porous structure, the fiber bundle separates each other, and the cell wall breaks, so that the package is in the fiber bundle or cell. The functional components were released, which significantly reduced the mass transfer resistance and improved the extraction rate of polysaccharides.

【技术实现步骤摘要】
一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法
本专利技术涉及中药
的提取方法，尤其涉及一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法。
技术介绍
板蓝根，别名靛青根、蓝靛根、靛根，是十字花科植物菘蓝的干燥根，具有清热解毒、凉血利咽之功效，在临床上用于温疫时毒、发热咽痛、温毒发斑、痄腮、烂喉丹痧、大头瘟疫、丹毒、痈肿等。作为我国抗病毒中药的典型代表，板蓝根是首个获美国国立卫生研究院资助的中药研究项目。多糖是由多个单糖分子通过苷键连接而成的一类结构复杂的生物大分子，在天然药物中分布非常广泛。多糖在生物合成以及细胞间的识别、受精、胚胎形成、神经细胞发育、激素激活、细胞增殖、病毒和细菌的感染、肿瘤细胞转移等许多基本生命过程中发挥着重要作用，因此已成为医学、营养学和食品科学领域的研究热点。据报道，板蓝根多糖对特异性免疫和非特异性免疫均具有一定的促进作用，是一种比较理想的天然免疫增强剂，作为保健食品和药品有广泛的开发前景。板蓝根多糖具有抗病毒作用，对非特异性免疫和体液免疫均有一定的增强作用。其粗多糖提取物含有大量蛋白质、色素等杂质，对多糖产品的纯度和药效都有较大影响，尤其是要将其开发成纯度较高的药品时，除去粗多糖中所含的蛋白和色素是一个必不可少的纯化步骤。传统的多糖脱蛋白方法有Seavag法、三氯乙酸法、HCl法、酶法等，其中Seavag法最为常用，Seavag法是三氯乙酸和正丁醇按一定比例混合对多糖液进行萃取，重复数次，直至脱尽蛋白。使用该法不仅多糖损失量大，产品中的有机溶剂难以除净；而且有机溶剂使用量大，成本高、污染环境。多糖脱色方法有活性炭吸附化、大孔树脂吸附法、氧化法等。采用以上方法，通常脱色效率不高，或会对多糖造成一定损失、破坏。传统工艺中，脱蛋白与脱色常分两步完成，工艺复杂，耗时长。传统的提取板蓝根多糖的方法主要为水提醇沉法，这种方法也被《中国药典》收载，主要采用高温蒸煮，乙醇沉淀。此法不需特殊设备，但是具有操作时间很长，能耗大，有效成分高温易分解，提取率非常低，提取后的药渣不易处理等缺点，显然不适应工业化生产。近年来利用益生菌发酵中草药已成为研究的热点领域，目前已有乳酸菌、芽孢菌、酵母菌发酵中草药的报道。研究表明，微生物具有非常丰富的酶系统，具有强大的分解转化物质的能力，中草药被发酵后，其有效成分和活性物质被最大限度的释放出来，同时还可以产生新的活性物质。但是这些方法发酵时间较长，过程较为粗放，提取率不高，更无法进行工业化生产。总结来说，现如今的板蓝根多糖的制备方法，整体存在着以下的缺陷：容易造成多糖的损失率过高，且提取效率过低，易污染环境，不能成为大规模的工业生产模式。因此如何得到一种收率高、纯度高的板蓝根多糖提取方法，是本领域的技术人员亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题：针对目前微生物发酵板蓝根多糖提取率不高的问题，提供一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法。为解决上述技术问题，本专利技术采用如下所述的技术方案是：一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法，该方法包括如下步骤：（1）从板蓝根植株上取有节间的侧芽作为外植体，置于质量分数为70%的乙醇溶液中浸泡，再置于质量分数为0.1%的氯化汞溶液中浸泡，取出用无菌水漂洗，接种至植物培养基中光照培养，取培养后板蓝根外植体加入活性炭和浓度为0.01mol/L柠檬酸溶液中浸泡，得浸泡后板蓝根；（2）取浸泡后板蓝根于40~50℃干燥，取干燥物置于气流粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒置于55~60℃恒重，取恒重过筛颗粒蒸汽爆破处理，得处理后板蓝根；（3）按质量份数计，取鼠李糖脂7~10份，纤维素酶20~25份，苯丙氨酸5~8份，聚乙二醇5~8份，质量分数为70%的乙醇溶液60~90份，水1000份混合，得浸泡液，取处理后板蓝根加入浸泡液中浸泡，取出板蓝根，干燥，得用于发酵提取板蓝根多糖的预处理板蓝根；所述步骤（1）中植物培养基：按质量份数计，取硝酸铵60~70份，硝酸钾100~110份，磷酸二氢钾120~130份，硫酸镁200~250份，氯化钙140~150份，6-BA0.02~0.06份，萘乙酸0.02~0.05份，蔗糖20~30份，琼脂20~25份，水400~500份，得植物培养基。所述步骤（1）中板蓝根外植体置于质量分数为70%的乙醇溶液中浸泡30~40s，置于质量分数为0.1%的氯化汞溶液中浸泡5~6min；光照培养条件：23~27℃培养5~7d，光照强度为2000lx，每天光照时间为12h；培养后板蓝根外植体与活性炭和浓度为0.01mol/L柠檬酸溶液的质量比为10：1：0.3~0.5，浸泡2~2.5h。所述步骤（2）中蒸汽爆破条件为：150MPa、保压150s。所述步骤（3）中处理后板蓝根与浸泡液的质量比为1：5~7；30~35℃浸泡30~40min。本专利技术与其他方法相比，有益技术效果是：（1）本专利技术利用切取板蓝根外植体，进行组织培养，一方面可以进行快速繁殖，缩短板蓝根细胞增殖的时间，减少变异，保持品质，满足市场对板蓝根的需求，另一方面离开母体后的板蓝根切口处极易褐变，影响后期提取板蓝根多糖的活性，对板蓝根切口进行防褐变处理，保护切口处膜结构和减轻细胞中物质区域化分布的破坏，防止了用于提取多糖的活性物质渗出组织，增强了细胞活性，提高了后期发酵提取多糖的效率；（2）本专利技术利用气流粉碎进行板蓝根的粉碎处理，能够更加细化板蓝根结构，不会对提取多糖造成影响，通过破坏板蓝根的机械支撑壁膜结构，后期可以使多糖溶出的更加完全，蒸汽爆破进行前处理，利用高温饱和蒸汽快速渗透到板蓝根细胞组织中，并通过瞬间泄压实现原料的组分分离和结构变化，从而破坏板蓝根的细胞组织，破坏纤维束之间的相互连接，使细胞壁破裂，形成疏松多孔结构，纤维束相互分离，细胞壁破裂，使得包裹在纤维束或细胞内的功能性成分被释放，明显降低了传质阻力，达到提高多糖提取率的目的；（3）通过蒸汽爆破后，打开了细胞间孔隙，取纤维素酶进行复配制成浸泡液，将板蓝根浸泡于浸泡液中，浸泡液的活性成分进入孔隙，纤维素酶可以提高可溶性糖的含量，纤维素酶扩散到分子内部水解结晶态纤维素，聚乙二醇与底物间的作用影响底物结构，降低了结晶区的反应活化能，可以避免酶的无效吸附，苯丙氨酸和鼠李糖脂也能促进酶的活性，减少酶的损失，提高酶的利用率，使后期发酵活性物质在酶的催化下能更多的溶出，提高多糖提取率。具体实施方式植物培养基：按质量份数计，取硝酸铵60~70份，硝酸钾100~110份，磷酸二氢钾120~130份，硫酸镁200~250份，氯化钙140~150份，6-BA0.02~0.06份，萘乙酸0.02~0.05份，蔗糖20~30份，琼脂20~25份，水400~500份，得植物培养基。一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法，包括如下步骤：（1）从板蓝根植株上取有节间的侧芽为外植体，置于质量分数为70%的乙醇溶液中浸泡30~40s，再置于质量分数为0.1%的氯化汞溶液中浸泡5~6min，取出板蓝根用无菌水漂洗3~4次，接种至植物培养基中，23~27℃培养5~7d，光照强度为2000lx，每天光照时间为12h，取培养后板蓝根外植体按质量比10：1：0.3~0.5加入活性炭和浓度为0.本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）从板蓝根植株上取有节间的侧芽作为外植体，置于质量分数为70%的乙醇溶液中浸泡，再置于质量分数为0.1%的氯化汞溶液中浸泡，取出板蓝根用无菌水漂洗，接种至植物培养基中光照培养，取培养后板蓝根外植体加入活性炭和浓度为0.01mol/L柠檬酸溶液中浸泡，得浸泡后板蓝根；（2）取浸泡后板蓝根于40~50℃干燥，取干燥物置于气流粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒置于55~60℃恒重，取恒重过筛颗粒蒸汽爆破处理，得处理后板蓝根；（3）按质量份数计，取鼠李糖脂7~10份，纤维素酶20~25份，苯丙氨酸5~8份，聚乙二醇5~8份，质量分数为70%的乙醇溶液60~90份，水1000份混合，得浸泡液，取处理后板蓝根加入浸泡液中浸泡，取出板蓝根，干燥，得用于发酵提取板蓝根多糖的预处理板蓝根。

【技术特征摘要】
1.一种用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：（1）从板蓝根植株上取有节间的侧芽作为外植体，置于质量分数为70%的乙醇溶液中浸泡，再置于质量分数为0.1%的氯化汞溶液中浸泡，取出板蓝根用无菌水漂洗，接种至植物培养基中光照培养，取培养后板蓝根外植体加入活性炭和浓度为0.01mol/L柠檬酸溶液中浸泡，得浸泡后板蓝根；（2）取浸泡后板蓝根于40~50℃干燥，取干燥物置于气流粉碎，过100目筛，收集过筛颗粒，取过筛颗粒置于55~60℃恒重，取恒重过筛颗粒蒸汽爆破处理，得处理后板蓝根；（3）按质量份数计，取鼠李糖脂7~10份，纤维素酶20~25份，苯丙氨酸5~8份，聚乙二醇5~8份，质量分数为70%的乙醇溶液60~90份，水1000份混合，得浸泡液，取处理后板蓝根加入浸泡液中浸泡，取出板蓝根，干燥，得用于发酵提取板蓝根多糖的预处理板蓝根。2.根据权利要求1所述的用于发酵提取板蓝根多糖的板蓝根预处理方法，其特征在于，所述步骤（1）中植物培养基：按质量份数计，取硝酸铵60~70份，硝酸钾100~...

【专利技术属性】
技术研发人员：芮志行，郑薇，林凡，
申请(专利权)人：芮志行，
类型：发明
国别省市：江苏,32