一种茶枯多糖提取工艺制造技术

本发明专利技术公开了一种茶枯多糖提取工艺，包括粉碎茶枯、超声波处理、水浴、离心分离、无水乙醇沉淀、离心收集并清洗沉淀、溶解、调节pH值、酶解、TCA溶液沉淀蛋白质、过滤收集上清液、干燥等步骤。本发明专利技术工艺由于在采用TCA沉淀蛋白质之前，采用生物酶法对茶枯多糖粗提液进行了预处理，最大化地使多糖和所连接的蛋白质分离开了，所以后续采用TCA沉淀蛋白质的过程中，能最大化地减少茶枯多糖的损耗，提高得率。实验证明，运用本发明专利技术工艺提取茶枯多糖，与传统工艺相比，在不降低茶枯多糖纯度的前提下，大大提高了茶枯多糖的得率。本发明专利技术具有重要的市场推广前景。

A process for extracting polysaccharides from tea leaves

The invention discloses a process for extracting tea withering polysaccharides, including crushing tea withering, ultrasonic treatment, water bath, centrifuge separation, anhydrous ethanol precipitation, collecting and cleaning precipitation, dissolving and regulating pH value, enzymolysis, precipitation of protein in TCA solution, filtering and collecting supernatant, drying and so on. In the process of using TCA to precipitate protein, the process of biological enzyme is used to pretreat the crude polysaccharide extract of tea blight, which maximizes the separation of the polysaccharides and the connected proteins, so in the process of subsequent TCA precipitation, the loss of the polysaccharides can be reduced and the yield can be increased. The experiment proved that the extraction of tea polysaccharide by the invention technology, compared with the traditional technology, greatly improved the yield of the tea dry polysaccharide on the premise that the purity of the polysaccharide was not reduced. The invention has an important prospect of marketing.

【技术实现步骤摘要】
一种茶枯多糖提取工艺
本专利技术涉及医药保健领域，具体地涉及一种茶枯多糖提取工艺。
技术介绍
近年来，多糖在抗衰老、降血脂等方面的应用上有很大的发展。茶籽压榨后副产物即茶枯中含有丰富的生物活性物质，茶枯多糖即是其中之一。茶枯多糖具有很好的自由基清除能力和抗氧化能力，倍受研究人员和消费者的青睐；茶枯多糖的调节血糖、抗血栓、调节免疫等功能也越来越受到重视，对茶枯多糖提取工艺的研究也越来越全面、深入。在现有的水提法提取茶枯多糖工艺中，由于提取过程中不可避免的会有蛋白质残留其中，且蛋白质杂质的存在会影响茶枯多糖的抗氧化性，为了提取到更纯的茶枯多糖，工艺中设置去蛋白工序，采用向茶枯多糖粗提液中添加三氯乙酸(TCA)溶液促使蛋白质变性沉降而达到去除蛋白质杂质的目的，即可得到较纯的多糖。但是由于茶枯多糖大多以糖蛋白的形式存在，采用添加TCA处理变性沉淀蛋白质杂质的同时，茶枯多糖会也会随着蛋白质一起被沉降下来，造成茶枯多糖的大量损失。
技术实现思路
本专利技术的目的在于克服现有茶枯多糖提取工艺中会损失大量多糖的技术缺陷，提供一种降低多糖损耗的茶枯多糖提取工艺。为实现上述目的，本专利技术提供的茶枯多糖提取工艺，其特征在于包括如下步骤：1)、将茶枯置于60℃烘箱内干燥8-10小时后粉碎，过60目筛；2)、取茶枯粉末，加入20倍质量的蒸馏水，将混浊液置于40000Hz超声波中处理20min后，放置于70℃水浴中2小时，不时振摇；3)、将水浴后的混浊液4000r/min离心分离10min，取上清液加入3倍体积无水乙醇置于4℃静置2小时,4000r/min离心10min，收集并清洗沉淀；4)、将清洗后的沉淀加入与步骤2)相同量的蒸馏水重新溶解，即为茶枯多糖粗提液，调节pH值，然后向溶液加入一定酶活的蛋白酶，设定温度和时间进行酶解处理；5)、向酶解处理后的溶液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，20℃静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，收集上清液，即为茶枯多糖提取液；6)、干燥，即得到茶枯多糖。优选地，步骤4)中所述的pH值为9.0，所述的蛋白酶为蛋白酶A，酶活为250U/mg，加入酶后酶的质量与体系的体积比为0.009g:100mL，反应时间50min，反应温度为37℃。运用本专利技术工艺提取茶枯多糖，由于在采用TCA沉淀蛋白质之前，采用生物酶法对茶枯多糖粗提液进行了预处理，最大化地使多糖和所连接的蛋白质分离开了，所以后续采用TCA沉淀蛋白质的过程中，也就最大化地减少了茶枯多糖的损耗，提高了得率。【附图说明】图1为酶添加量对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；图2为酶解时间对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；图3为酶的作用温度对茶枯多糖得率及损耗率的影响图；图4为酶的作用pH值对茶枯多糖得率及损耗率的影响图。【具体实施方式】现结合实施例详细说明本专利技术的技术方案。应理解，以下实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。在不背离本专利技术精神和实质的情况下，对本专利技术步骤或条件所作的修改或替换，均属于本专利技术的范围。若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。实验材料：茶枯，实验前60℃烘干后粉碎，过60目筛备用。实验试剂：蛋白酶A、木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、链霉蛋白酶、无水乙醇、浓硫酸、苯酚、TCA、考马氏亮蓝G-250(称取考马氏亮蓝G-25050mg，加体积百分比浓度为95％乙醇25ml溶解，加体积百分比浓度为85％磷酸50ml，H2O定容到500ml，过滤去除少量未溶解物，4℃保存备用)。仪器设备：粉碎磨、标准检验筛(规格90目)、电热恒温干燥箱、电子天平、超声波清洗器、数显恒温水浴锅、pH计、紫外线可见分光光度计、电热套、台式高速冷冻离心机。茶枯多糖含量的测定：采用蒽酮-硫酸法测定多糖含量。茶枯多糖得率＝蒽酮-硫酸法计算出的茶枯多糖质量(g)/原料茶枯质量(g)×100％茶枯多糖损耗率＝(加酶液处理前茶枯多糖得率-加酶液处理后茶枯多糖得率)/加酶液处理前茶枯多糖得率×100％茶枯多糖纯度＝蒽酮-硫酸法计算出的茶枯多糖质量(g)/干燥后得到的茶枯多糖产品质量(g)×100％实施例1对于是否加酶的显著性分析制备茶枯多糖粗提液，实验组样品先加木瓜蛋白酶处理后再加入TCA溶液沉淀蛋白质，对照组样品没有加木瓜蛋白酶而直接加入TCA溶液沉淀蛋白质，以两组样品处理前后溶液内茶枯多糖含量变化来计算茶枯多糖损失率，结果见表1。对所得数据进行差异显著性分析，可知加酶组和不加酶组在多糖损失率的降低上是有极显著(P＜0.01)差异的。由此可初步判断，实验假设成立，加木瓜蛋白酶后可以显著降低多糖损失率，有效减少多糖损失。表1不同处理方法(不加酶/加酶)多糖损失率实施例2酶的筛选表2不同生物酶实验所得多糖损失率比较将四种处理茶枯多糖粗提液的酶酶活均调整至25U/mL液体，由表2可知蛋白酶A处理后多糖损失率最小，链霉蛋白酶处理后多糖损失率较大，且链霉蛋白酶价格较高，综合考虑到作用效果和经济效益，最终选择使用蛋白酶A。实施例3单因素实验应用控制变量法并结合相关资料中蛋白酶A的最适作用条件设定实验梯度进行单因素实验。1、酶的用量实验选用蛋白酶A，酶活为250U/mg，取0.1g酶定容到100mL使用。每组均取茶枯多糖粗提液20mL，分别添加酶量为0.5mL、1.0mL、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL、4.0mL，实验结果见图1。分析数据可知：酶用量不同对减少多糖损失效果差异极显著(P＜0.01)，并且在2.0mL、2.5mL、3.0mL时对降低多糖损失率效果相对较好，对这三个点(2.0mL、2.5mL、3.0mL)进行差异显著性分析，得到P＞0.05,无显著性差异。从节约成本和获得好的实验效果等方面综合考虑，酶用量选择2.0mL为宜。2、酶的作用时间分别设置酶在茶枯多糖粗提液中的作用时间为5min、25min、45min、65min、85min，酶解结束后迅速添加三氯乙酸(TCA)终止酶解反应。测定上清液中多糖含量，结果见图2。分析数据可知：酶的作用时间不同，各组样品间多糖损失率差异极显著(P＜0.05)。作用45min时，茶枯多糖得率达到13.84％，损失率较小为18.99％，随后作用时间增加而多糖损失率略微降低，因此，确定酶作用时间为45min。3、酶的作用温度由相关文献资料可知，蛋白酶A的最适作用温度在37℃左右，因此以37℃为中心向两边放点设置梯度进行实验。分别设置酶的作用温度为17℃、27℃、37℃、47℃、57℃，酶解后结果见图3。分析数据可知：酶的作用温度不同对减少多糖损失效果差异极显著(P＜0.01)，在37℃是，茶枯多糖得率为13.98％，损耗率为18.22％。实验结果与大多数资料中蛋白酶A的最适作用温度37℃左右一致，综合考虑后选择37℃作为酶的作用温度。4、酶的作用pH值查阅相关资料可知蛋白酶A的最适作用pH为7.8～8.5，故酶解前分别调整茶枯多糖提取液的pH值6、7、8、9、10、11，实验结果见图4。分析数据可知：酶的作用pH值不同对减少多糖损失效果差异极显著(P＝0.00089＜0.01)，pH值为8时，茶枯多糖得率为14.34％，损耗率为16.09％。综合考虑后选择pH本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种茶枯多糖提取工艺，其特征在于包括如下步骤：1)、将茶枯置于60℃烘箱内干燥8‑10小时后粉碎，过60目筛；2)、取茶枯粉末，加入20倍质量的蒸馏水，将混浊液置于40000Hz超声波中处理20min后，放置于70℃水浴中2小时，不时振摇；3)、将水浴后的混浊液4000r/min离心分离10min，取上清液加入3倍体积无水乙醇置于4℃静置2小时,4000r/min离心10min，收集并清洗沉淀；4)、将清洗后的沉淀加入与步骤2)相同量的蒸馏水重新溶解，即为茶枯多糖粗提液，调节pH值，然后向溶液加入一定酶活的蛋白酶，设定温度和时间进行酶解处理；5)、向酶解处理后的溶液中加入3倍体积的质量百分比浓度为6％的三氯乙酸溶液，20℃静置24h进行蛋白质沉淀、过滤，收集上清液，即为茶枯多糖提取液；6)、干燥，即得到茶枯多糖。步骤4)中所述的pH值为9.0，所述的蛋白酶为蛋白酶A，酶活为250U/mg，加入酶后酶的质量与体系的体积比为0.009g:100mL，反应时间50min，反应温度为37℃。

【技术特征摘要】
1.一种茶枯多糖提取工艺，其特征在于包括如下步骤：1)、将茶枯置于60℃烘箱内干燥8-10小时后粉碎，过60目筛；2)、取茶枯粉末，加入20倍质量的蒸馏水，将混浊液置于40000Hz超声波中处理20min后，放置于70℃水浴中2小时，不时振摇；3)、将水浴后的混浊液4000r/min离心分离10min，取上清液加入3倍体积无水乙醇置于4℃静置2小时,4000r/min离心10min，收集并清洗沉淀；4)、将清洗后的沉淀加入与步骤2)相同量的蒸馏水...

【专利技术属性】
技术研发人员：余翔，吴晓光，张梦佳，冯艳丽，梁艳，
申请(专利权)人：湖北师范学院，湖北灵茗生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北,42