一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法技术

本发明专利技术公开了一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法：在磁珠表面修饰适合连接核酸探针的多糖分子；设计用于检测靶核酸片段的功能化探针，将功能化探针修饰于结合有多糖分子的磁珠表面；通过杂交，将靶核酸片段及其发光中心捕获至磁珠表面；磁分离，清洗，即得到已获取发光中心的磁珠；加入兼容型多糖水解复合试剂，通过多糖水解将化学发光中心从磁珠表面分离下来，即得到不含磁珠的化学发光中心溶液；对该溶液进行化学发光检测，即可获取增敏的靶核酸信息。本发明专利技术完全克服了磁珠对化学发光信号的遮蔽效应导致的发光信号损失，相比常规的“基于磁珠的核酸化学发光检测方法”，灵敏度提升7倍，能够检测出最少50 fM核酸片段，检测灵敏度极高。

Nucleic acid sensitization detection method based on polysaccharide modified magnetic beads and separation of chemiluminescence centers

The invention discloses a nucleic acid sensitization detection method based on a polysaccharide modified magnetic bead and separation chemiluminescence center, which modifies a polysaccharide molecule suitable for connecting a nucleic acid probe on a magnetic bead surface; designs a functional probe used to detect the target nucleic acid fragment, modifies the functional probe into a magnetic bead surface with a polysaccharide molecule; The target nucleic acid fragment and its luminescent center are captured to the surface of the magnetic bead, and magnetic separation and cleaning are used to obtain the magnetic beads that have been obtained, and the chemiluminescence center is separated from the surface of the magnetic beads by a compatible polysaccharide hydrolytic compound, and the chemiluminescent center solution without magnetic beads is obtained. The sensitized target nucleic acid information can be obtained by chemiluminescence detection. The invention completely overcomes the luminescent signal loss caused by the masking effect of magnetic beads on chemiluminescence signals. Compared with the conventional \magnetic beads based nucleic acid chemiluminescence detection method\, the sensitivity is increased by 7 times, and the minimum of 50 fM nucleic acid fragments can be detected, and the detection sensitivity is very high.

【技术实现步骤摘要】
一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法
本专利技术涉及生化检测和分子诊断领域，尤其涉及一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法。本专利技术可应用于涉及超灵敏核酸分子检测的领域。
技术介绍
随着纳米技术的迅速发展，纳米材料逐渐被应用到生命科学领域，纳米磁珠(magneticbeads,MBs)因具有分离速度快、效率高、可重复使用、操作简单、易功能化、易实现自动化以及不影响分离物质的活性等特殊的物理化学性质和生物相容性，目前已应用于细胞分离、免疫测定、蛋白质和酶的固定以及核酸检测等方面。近年来，发光标记类检测方法，如荧光标记、酶标化学发光等已广泛应用于生物分子检测。操作安全，方法简便、快速，具有巨大的潜力，正成为生物分析研究与发展的最重要领域。因此，结合核酸探针杂交技术，通过标记能够产生发光信号的分子而获取靶核酸信息，可实现靶核酸的快速检测与高通量筛查。目前，已报道各种基于固相杂交与发光标记的核酸检测方法。其基本思路为：在固相载体表面修饰核酸探针，通过捕获标记有发光信号分子的待测特异核酸片段，再检测发光信号，经分析后，即可快速确认靶核酸的特性。但随着研究本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法，其特征在于该方法包括：1）在磁珠表面修饰适合连接核酸探针的多糖分子；2）设计用于检测靶核酸片段的功能化探针，将功能化探针修饰于结合有多糖分子的磁珠表面；3）通过杂交，将标记有化学发光中心的靶核酸片段捕获至磁珠表面；4）磁分离，清洗，即得到已获取标记有化学发光中心的靶核酸片段的磁珠；5）加入兼容型多糖水解复合试剂，通过多糖水解反应将化学发光中心从磁珠表面分离下来，即得到不含磁珠的发光中心溶液；所述兼容型多糖水解复合试剂包括兼容型缓冲液、多糖酶、反应终止液；其中，所述兼容型缓冲液，其成分包括50 mM NaAc, Tris‑HCl, 1mM...

【技术特征摘要】
1.一种基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法，其特征在于该方法包括：1）在磁珠表面修饰适合连接核酸探针的多糖分子；2）设计用于检测靶核酸片段的功能化探针，将功能化探针修饰于结合有多糖分子的磁珠表面；3）通过杂交，将标记有化学发光中心的靶核酸片段捕获至磁珠表面；4）磁分离，清洗，即得到已获取标记有化学发光中心的靶核酸片段的磁珠；5）加入兼容型多糖水解复合试剂，通过多糖水解反应将化学发光中心从磁珠表面分离下来，即得到不含磁珠的发光中心溶液；所述兼容型多糖水解复合试剂包括兼容型缓冲液、多糖酶、反应终止液；其中，所述兼容型缓冲液，其成分包括50mMNaAc,Tris-HCl,1mMMgCl2,0.05%Tween20pH>8；所述反应终止液，其成分包括：1%TFA,50mMNa2CO3,pH>8；6）对该发光中心溶液进行发光检测，即可获取靶核酸信息。2.根据权利要求1所述的基于多糖修饰磁珠与分离化学发光中心的核酸增敏检测方法，其特征在于，步骤1）所述表面修饰包括但不限于在磁珠表面以共价键、非共价键或物理吸附方式修饰功多糖分子，所述多糖分子是能够同时与磁珠及功能化探...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨淏文，李智洋，何农跃，
申请(专利权)人：南京鼓楼医院，
类型：发明
国别省市：江苏,32