一种广西金花茶多糖肽的制备方法技术

本发明专利技术属于生物提取技术领域，具体涉及一种广西金花茶多糖肽的制备方法。本发明专利技术提供的广西金花茶多糖肽的制备方法包括脱脂预处理、提取、醇沉、纯化步骤，本发明专利技术广西金花茶多糖肽的制备工艺合理，多糖肽提取效率高，纯度高达86.3％，另外，制备的多糖肽抗氧化活性良好，对羟自由基的清除率达到73％，对超氧阴离子自由基的清除率达到81％，为金花茶作为抗氧化、抗衰老保健食品的开发提供理论依据。

Preparation of a polysaccharide peptide from Guangxi Camellia

The invention belongs to the field of biological extraction technology, in particular to a preparation method of Guangxi golden flower tea polysaccharide peptide. The preparation method of Guangxi golden tea polysaccharide peptide provided by the invention includes degreasing pretreatment, extraction, alcohol precipitation and purification steps. The preparation process of the Guangxi golden tea polysaccharide peptide is reasonable, the extraction efficiency of polypeptides is high and the purity is up to 86.3%, in addition, the antioxidant activity of the polypeptides is good and the hydroxyl radical scavenging rate of the prepared polypeptides is good. Up to 73%, the scavenging rate of superoxide anion free radicals reached 81%, providing a theoretical basis for the development of Camellia as an antioxidant and anti-aging health food.

【技术实现步骤摘要】
一种广西金花茶多糖肽的制备方法
本专利技术属于生物提取
，具体涉及一种广西金花茶多糖肽的制备方法。
技术介绍
金花茶花色金黄，多数种具蜡质光泽，晶莹可爱，花型有杯状、壶状、碗状和盘状等，形态多样，秀丽雅致，在山茶类群中，被誉为“茶族皇后”。金花茶是一种保健价值很高的药食同源植物，金花茶的花叶均可入药或食用，明代伟大的医药家李时珍在《本草纲目》中早有记载“山茶嫩叶炸熟、水淘，可食，亦可蒸晒作饮”。研究分析发现，金花茶含有400多种对人体有益的化学成份，含有天然有机锗、硒、锰、钒、锌等多种对人体有重要保健作用的微量元素以及维生素、茶多酚、维生素、黄酮、多糖和多种人体必需的氨基酸等。经临床实验证明：金花茶具有降血脂、降胆固醇、降血压、抑制肿瘤生长、抗衰老、激活人体多种酶等特殊保健作用，与医著记载相互吻合，互相应证。中国专利申请CN106866833A公开了一种具有抗应激作用的金花茶多糖提取物及其制备方法，包括以下步骤：金花茶的细枝或叶打成粗粉，85％乙醇湿渗漉，药渣加水加热回流，95％乙醇沉淀，离心得沉淀。该制备方法简单易行、成本低廉，使用的是平时基本作为废弃物的金花茶的细枝或叶，有利于资源的深入开发，制备的金花茶多糖可应用于抗应激药物、耐疲劳药物、耐缺氧药物、耐寒冷药物以及保健食品，但是采取了高温提取，容易造成活性成分的损失。多糖肽是一种糖蛋白，是多糖与蛋白质的复合体，具有很高的分子量，由多糖的重复单元组成。多糖肽具有很强的生物活性，研究证实，多糖肽具有重要的药理学作用，可以增强机体免疫功能，具有抗氧化作用，并可以在一定程度上抑制肿瘤细胞的生长，而且相对于多糖，有着口服有效性。现有提取金花茶有效成分的方法是高温提取，具有保健功能的生理活性物质的部分活性会丧失，而且提取率、纯度低，单位产品原料消耗量大。另外，有关多糖肽的研究逐渐受到关注，广西金花茶是我国特有茶种，国内外对它的研究报道甚少，对其多糖肽制备的研究更是少之又少。
技术实现思路
为了解决现有技术中存在的问题，本专利技术的目的在于提供一种广西金花茶多糖肽的制备方法。本专利技术制备的广西金花茶多糖肽的纯度高达86.3％，且抗氧化活性良好，可用于制备抗氧化、抗衰老等保健产品。专利技术提供的一种广西金花茶多糖肽的制备方法，包括以下步骤：S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过10-20目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二氯甲烷和乙醇，二氯甲烷和乙醇体积比为2-5:1-3，60-80℃回流2-3h，得脱脂金花茶；S2、提取：向步骤S1所得脱脂金花茶中加入蒸馏水和纤维素酶，用质量浓度为5-10％的柠檬酸溶液调节pH值至5.5，40-60℃酶解0.5-1h，高温灭酶，脉冲电场处理后超声提取0.5-2h，3层200目纱布过滤，收集滤液，滤渣加入蒸馏水后同法操作再提取一次，合并滤液，浓缩，得多糖肽溶液；S3、醇沉：将步骤S2所得多糖肽溶液在不断搅拌中缓慢滴加无水乙醇，磁力搅拌20-40min后2-5℃静置16-24h，10000-15000r/min高速离心，收集乙醇沉淀部分I，离心后的上清液再缓慢滴加无水乙醇，同法操作，收集乙醇沉淀部分II，合并两次收集到的沉淀部分，真空低温干燥，得多糖肽粗品；S4、纯化：将步骤S3所得多糖肽粗品加蒸馏水微热溶解，离心除去不溶性杂质，通过聚丙烯酰胺凝胶柱层析，用含5-10mol/LNaCl的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液洗脱，蒸馏水透析10-20h，取袋内液进行浓缩，加入5倍体积的无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀部分，冷冻干燥，即得。进一步地，所述步骤S1中二氯甲烷、乙醇的总体积与金花茶粉末加入量之比为5-8mL/g。进一步地，所述步骤S2中蒸馏水加入量为300-500mL，纤维素酶加入量为30-50mg。进一步地，所述步骤S2中脉冲电场强度为10-20kV，频率为1000-2000Hz，脉冲数为4-8。进一步地，所述步骤S2中超声提取温度为50-55℃，频率为25-55kHz。进一步地，所述步骤S3中多糖肽溶液和无水乙醇的体积比为1:0.5-3，上清液和无水乙醇的体积比为1:1-2。进一步地，所述步骤S4中缓冲液pH为5.8-7.0，浓度为0.1-0.35mol/L。本专利技术首先对金花茶叶进行脱脂、酶解细胞壁预处理，脱去脂肪后，蛋白质和肽的疏水部分不再与其中的脂肪作用，使其亲水基团更易与溶剂水分子结合，从而使得提取液中的蛋白质和肽的含量大幅增加，酶解细胞壁有利于有效成分的最大限度溶出，提高有效成分的提取率，并改善生产过程中的过滤速度；脉冲电场-超声提取相结合的方式可使提取效率大大提高，解决了一般的超声提取技术存在能量在原料中分布不均匀的缺点，可提高能量的利用率，有利于节约能源，提高效率；采用聚丙烯酰胺凝胶柱层析改善了多糖肽的纯化效果，提高其纯度和质量。与现有技术相比，本专利技术具有以下优点：(1)本专利技术广西金花茶多糖肽的制备工艺合理，多糖肽提取效率高，纯度高达86.3％。(2)制备的广西金花茶多糖肽抗氧化活性良好，对羟自由基的清除率达到73％，对超氧阴离子自由基的清除率达到81％，为金花茶作为抗氧化、抗衰老保健食品的开发提供理论依据。具体实施方式以下通过具体实施方式的描述对本专利技术作进一步说明，但这并非是对本专利技术的限制，本领域技术人员根据本专利技术的基本思想，可以做出各种修改或改进，但是只要不脱离本专利技术的基本思想，均在本专利技术的范围之内。本专利技术中，纤维素酶可购自郑州亿之源化工产品有限公司；聚丙烯酰胺凝胶可购自Bio-Rad公司。实施例1、一种广西金花茶多糖肽的制备方法S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过10目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二氯甲烷和乙醇，二氯甲烷和乙醇体积比为2:1，60℃回流3h，得脱脂金花茶；S2、提取：向步骤S1所得脱脂金花茶中加入400mL蒸馏水和30mg纤维素酶，用质量浓度为5％的柠檬酸溶液调节pH值至5.5，40℃酶解1h，高温灭酶，脉冲电场处理后于温度为50℃、频率为25kHz的条件下超声提取0.5h，3层200目纱布过滤，收集滤液，滤渣加入蒸馏水后同法操作再提取一次，合并滤液，浓缩，得多糖肽溶液；S3、醇沉：将步骤S2所得多糖肽溶液在不断搅拌中缓慢滴加0.5倍体积的无水乙醇，磁力搅拌20min后2℃静置20h，10000r/min高速离心，收集乙醇沉淀部分I，离心后的上清液再缓慢滴加同体积的无水乙醇，同法操作，收集乙醇沉淀部分II，合并两次收集到的沉淀部分，真空低温干燥，得多糖肽粗品；S4、纯化：将步骤S3所得多糖肽粗品加蒸馏水微热溶解，离心除去不溶性杂质，通过聚丙烯酰胺凝胶柱层析，用含5mol/LNaCl的Na2HPO4-NaH2PO4缓冲液洗脱，蒸馏水透析15h，取袋内液进行浓缩，加入5倍体积的无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀部分，冷冻干燥，即得。所述步骤S1中二氯甲烷、乙醇的总体积与金花茶粉末加入量之比为5mL/g。所述步骤S2中脉冲电场强度为10kV，频率为1000Hz，脉冲数为4。所述步骤S4中缓冲液pH为5.8，浓度为0.2mol/L。实施例2、一种广西金花茶多糖肽的制备方法S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过20目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种广西金花茶多糖肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过10‑20目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二氯甲烷和乙醇，二氯甲烷和乙醇体积比为2‑5:1‑3，60‑80℃回流2‑3h，得脱脂金花茶；S2、提取：向步骤S1所得脱脂金花茶中加入蒸馏水和纤维素酶，用质量浓度为5‑10％的柠檬酸溶液调节pH值至5.5，40‑60℃酶解0.5‑1h，高温灭酶，脉冲电场处理后超声提取0.5‑2h，3层200目纱布过滤，收集滤液，滤渣加入蒸馏水后同法操作再提取一次，合并滤液，浓缩，得多糖肽溶液；S3、醇沉：将步骤S2所得多糖肽溶液在不断搅拌中缓慢滴加无水乙醇，磁力搅拌20‑40min后于2‑5℃静置16‑24h，10000‑15000r/min高速离心，收集乙醇沉淀部分I，离心后的上清液再缓慢滴加无水乙醇，同法操作，收集乙醇沉淀部分II，合并两次收集到的沉淀部分，真空低温干燥，得多糖肽粗品；S4、纯化：将步骤S3所得多糖肽粗品加蒸馏水微热溶解，离心除去不溶性杂质，通过聚丙烯酰胺凝胶柱层析，用含5‑10mol/L NaCl的Na2HPO4‑NaH2PO4缓冲液洗脱，蒸馏水透析10‑20h，取袋内液进行浓缩，加入5倍体积的无水乙醇沉淀，离心，收集沉淀部分，冷冻干燥，即得。...

【技术特征摘要】
1.一种广西金花茶多糖肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、脱脂：金花茶叶片清洗后粉碎，过10-20目筛，得金花茶粉末，取上述所得金花茶粉末10g，加入二氯甲烷和乙醇，二氯甲烷和乙醇体积比为2-5:1-3，60-80℃回流2-3h，得脱脂金花茶；S2、提取：向步骤S1所得脱脂金花茶中加入蒸馏水和纤维素酶，用质量浓度为5-10％的柠檬酸溶液调节pH值至5.5，40-60℃酶解0.5-1h，高温灭酶，脉冲电场处理后超声提取0.5-2h，3层200目纱布过滤，收集滤液，滤渣加入蒸馏水后同法操作再提取一次，合并滤液，浓缩，得多糖肽溶液；S3、醇沉：将步骤S2所得多糖肽溶液在不断搅拌中缓慢滴加无水乙醇，磁力搅拌20-40min后于2-5℃静置16-24h，10000-15000r/min高速离心，收集乙醇沉淀部分I，离心后的上清液再缓慢滴加无水乙醇，同法操作，收集乙醇沉淀部分II，合并两次收集到的沉淀部分，真空低温干燥，得多糖肽粗品；S4、纯化：将步骤S3所得多糖肽粗品加蒸馏水微热溶解，离心除去不溶性杂质，通过聚丙烯酰胺凝胶柱层析，用含5-10mol/LNaCl的Na2HPO4...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈俊丞，
申请(专利权)人：广西天昌投资有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45