功能化温度敏感型聚合物及其制备方法与在（PTM）蛋白质检测中的应用技术
Functionalized temperature sensitive polymers and their preparation methods and their application in (PTM) protein detection
The invention discloses a functionalized temperature sensitive polymer and its preparation method and its application in (PTM) protein detection. The structural formula I of the functionalized temperature sensitive polymer shows that in type I, R is CH2, R value is 0 or 1, M is any natural number between 20~750, and N is any natural number between 110~1120;
【技术实现步骤摘要】
功能化温度敏感型聚合物及其制备方法与在(PTM)蛋白质检测中的应用
本专利技术涉及功能化温度敏感型聚合物及其制备方法与在(PTM)蛋白质检测中的应用，属于分析
技术介绍
蛋白质免疫印迹法(WesternBlot，WB)是一种检测复杂生物样本中蛋白质表达与分布的分析技术，已在生物学研究中广泛应用数十年，可以进行定性及半定量分析，是现代生物医学、生物化学及免疫遗传学等领域研究的有力工具。在此技术中，目标蛋白通过SDS-PAGE分离并转移到PVDF膜，使用抗体进行孵育识别目标蛋白，并通过抗体连接酶(例如辣根过氧化物酶(HRP))与底物进行化学发光反应，从而显色产生颜色信号达到检测目的。传统的WB技术是基于抗体对目标蛋白的特异性识别进行检测，因此WB检测的特异性和灵敏度主要依赖于抗体的质量和所连接HRP的性能。在WB检测中抗体可能会对其他非目标蛋白产生非特异性吸附而出现假阳性结果，而且抗体本身存在制备周期长和批次不稳定等缺点，特别是针对蛋白质翻译后修饰(Post-translationalmodifications，PTMs)的WB检测仍然存在很多难点。PTMs...
【技术保护点】
式Ⅰ所示聚合物，
【技术特征摘要】
1.式Ⅰ所示聚合物，式Ⅰ中，R为CH2，r值为0或1，m为20～750之间的任意自然数，n为110～1120之间的任意自然数；为辣根过氧化物酶单元。2.根据权利要求1所述的式Ⅰ所示聚合物，其特征在于：式Ⅰ所示聚合物为下述式Ⅰ-A所示聚合物，式Ⅰ-A中，m为20～750之间的任意自然数，n为110～1120之间的任意自然数；为辣根过氧化酶单元。3.权利要求1或2所述的式Ⅰ所示聚合物的制备方法，包括如下步骤：(1)在引发剂存在的条件下，温敏单体和功能单体经自由基聚合反应得到式Ⅱ所示温度敏感型聚合物；所述温敏单体为N-异丙基丙烯酰胺；所述功能单体为丙烯酸或丁烯酸；式Ⅱ中，R为CH2，r值为0或1，m为20～750之间的任意自然数，n为110～1120之间的任意自然数；(2)式Ⅲ所示辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase，HRP)和式Ⅳ所示施陶丁格试剂(NHS-triarylphosphine，NHS-Phosphine)发生亲核取代反应，得到式Ⅴ所示功能试剂；(3)式Ⅱ所示温度敏感型聚合物与式Ⅴ所示功能试剂经氨基-羧基偶联反应，得到式Ⅰ示聚合物。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于：步骤(1)中，所述温敏单体与所述功能单体的摩尔比为1：1～7：1；和/或，所述引发剂为过硫酸钾、过硫酸铵和过硫酸钠中任一种；所述引发剂的用量为所述温敏单体质量的5％～50％；和/或，所述自由基聚合反应的温度为50～80℃，时间可为8～12小时；和/或，所述自由基聚合反应在水中进行；和/或，所述自由基聚合反应在惰性气氛中进行；和/或，步骤(2)中，式Ⅳ所示施陶丁格试剂与式Ⅲ所示辣根过氧化物酶的比例为(0.5～2)mM：(5～20)mg/mL；和/或，所述亲核取代反应的温度为20～25℃，时间为0.5～2小时；和/或，所述亲核取代反应在磷酸盐缓冲液与有机溶剂的混合液中进行；所述...
【专利技术属性】
技术研发人员：钱小红，秦伟捷，刘彤，张万军，
申请(专利权)人：北京蛋白质组研究中心，
类型：发明
国别省市：北京,11
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