一种生物合成厚朴酚的方法技术

本发明专利技术涉及一种生物合成厚朴酚的方法，以4‑烯丙基苯酚为原料，漆酶为催化剂，催化而完成。本发明专利技术与现有技术不同之处在于：1)以低成本化合物为原料，工艺原材料成本低；2)以酶反应为基础，反应速度快，选择性专一性好，反应条件温；3)本工艺在生产设备的规模和数量上比其他方法要要少，操作简单，易于产业转化；4)本工艺仅在生产的最后步骤有分离纯化工序，产品纯化工艺简单，产品质量比一般方法纯度更好、含量更高；5)合成过程没有废液排放，环境友好，无污染，可持续生产，本发明专利技术工艺从经济、环境和职业健康角度均为优良的工业化生产指路线。

【技术实现步骤摘要】
一种生物合成厚朴酚的方法
本专利技术涉及一种厚朴酚的生物合成方法，具体的说为一种酶催化生产厚朴酚的方法。
技术介绍
厚朴酚分子式：C18H18O2；英文名称：Magnolol；CAS：528-43-8；分子量：266.33；物理性质：溶于苯、乙醚、甲醇、丙酮和氯仿等常见有机溶剂，易溶于NaOH溶液，难溶于水，为棕褐色至白色精细粉末，气香，味辛辣，微苦。近年来随着现代医学的发展，发现厚朴酚具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤等诸多药理作用，应用范围极广，如化妆品，洗护用品等。其产品价格与国际市场的需求也是密不可分。传统厚朴酚生产的工艺，分为中草药提取和有机化学合成。实际市场中多以植物提取为主。有机化学生产步骤繁琐，残余有机溶剂太多，且存在化学废液的排放，化学污染严重。而以植物提取得到厚朴酚，往往受到气候，季节以及人为因素的限制。本专利技术旨在解决这两方面的缺陷，提供一种条件反应温和、合成效率高的厚朴酚生物合成方法。
技术实现思路
本专利技术的目的在于解决现有技术的不足，提供一种生物合成厚朴酚的方法，该方法选择性高，无污染，生产周期短。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：一种生物合成厚朴酚的方法，所述合成方法以4-烯丙基苯酚为原料，使用漆酶的催化而完成；4-烯丙基苯酚，又称胡椒酚，英文名chavicol。Cas号为501-92-8，分子式为C9H10O。所用漆酶为sigma商城购买，货号38837，为彩绒革盖菌所提取。所述合成方法步骤如下：1)首先配置50-55mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6-6.2，抽滤备用；2)使用甲醇配置50-55mg/ml的4-烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为50-55mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为2-3ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4-烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为4-5mg/ml，添加步骤3)中酶使其终浓度为1-1.2mg/ml；5)反应体系置于37-38℃，震荡反应2-3.5h；6)将反应液离心，对沉淀中厚朴酚提取、分离纯化。本专利技术的生物合成厚朴酚的合成路线如下，如下所示：优选的，步骤1)中pH为6。优选的，震荡反应频率为450rpm。优选的，震荡反应时间为3h。本专利技术的有益效果是：本专利技术制备厚朴酚与现有技术不同之处在于：1)以低成本化合物为原料，工艺原材料成本低；2)以酶反应为基础，反应速度快，选择性专一性好，反应条件温；3)本工艺在生产设备的规模和数量上比其他方法要要少，操作简单，易于产业转化；4)本工艺仅在生产的最后步骤有分离纯化工序，产品纯化工艺简单，产品质量比一般方法纯度更好、含量更高；5)合成过程没有废液排放，环境友好，无污染，可持续生产，本专利技术工艺从经济、环境和职业健康角度均为优良的工业化生产指路线。附图说明图1为本专利技术的厚朴酚生物合成路线图；图2为本专利技术合成样品的液相结果图；图3为本专利技术合成样品的质谱结果图。具体实施方式下面通过具体实施例，并结合附图，对本专利技术的技术方案作进一步的具体说明。以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。漆酶，购自sigma商城，其它试剂和原料均系市购常规试剂和原料。实施例1一种生物合成厚朴酚的方法，所述合成方法以4-烯丙基苯酚为原料，经过漆酶的催化而完成，所述方法步骤如下：1)首先配置50mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6，抽滤备用；2)使用甲醇配置50mg/ml的4-烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为50mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为2ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4-烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为4mg/ml，添加步骤3)中酶使其终浓度为1mg/ml；5)反应体系置于37℃，震荡反应3.5h；6)将反应液离心，对沉淀中厚朴酚提取、分离纯化；本实施例中，所述漆酶来自彩绒革盖菌，震荡反应频率为450rpm，震荡反应时间为3h。实施例2一种生物合成厚朴酚的方法，所述合成方法以4-烯丙基苯酚为原料，经过漆酶的催化而完成，所述方法步骤如下：1)首先配置55mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6.2，抽滤备用；2)使用甲醇配置55mg/ml的4-烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为55mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为3ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4-烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为5mg/ml，添加步骤3)中酶使其终浓度为1.2mg/ml；5)反应体系置于38℃，震荡反应2h；6)将反应液离心，对沉淀中厚朴酚提取、分离纯化；本实施例中，所述漆酶来自彩绒革盖菌，震荡反应频率为450rpm，震荡反应时间为3h。实施例3一种生物合成厚朴酚的方法，所述合成方法以4-烯丙基苯酚为原料，经过漆酶的催化而完成，所述方法步骤如下：1)首先配置50mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6，抽滤备用；2)使用甲醇配置50mg/ml的4-烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为50mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为2ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4-烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为5mg/ml，添加步骤3)中酶使其终浓度为1mg/ml；5)反应体系置于37℃，震荡反应3h；6)将反应液离心，对沉淀中厚朴酚提取、分离纯化；本实施例中，所述漆酶来自彩绒革盖菌，震荡反应频率为450rpm，震荡反应时间为3h。实施例3合成的样品的液相和质谱结果如图2和图3所示。以上内容仅仅是对本专利技术所作的举例和说明，所属本
的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离专利技术的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本专利技术的保护范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种生物合成厚朴酚的方法，其特征在于，所述合成方法以4‑烯丙基苯酚为原料，经过漆酶的催化而完成，所述方法步骤如下：1)首先配置50‑55mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6‑6.2，抽滤备用；2)使用甲醇配置50‑55mg/ml的4‑烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为50‑55mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为2‑3ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4‑烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为4‑5mg/ml，添加步骤3)中酶使其终浓度为1‑1.2mg/ml；5)反应体系置于37‑38℃，震荡反应2‑3.5h；6)将反应液离心，对沉淀中厚朴酚提取、分离纯化。

【技术特征摘要】
1.一种生物合成厚朴酚的方法，其特征在于，所述合成方法以4-烯丙基苯酚为原料，经过漆酶的催化而完成，所述方法步骤如下：1)首先配置50-55mM磷酸二氢钾溶液，再使用磷酸氢二钾调pH至6-6.2，抽滤备用；2)使用甲醇配置50-55mg/ml的4-烯丙基苯酚溶液；3)将漆酶溶于步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液中，浓度为50-55mg/ml；4)配置反应体系：反应体系体积为2-3ml，使用步骤1)中所配置的磷酸二氢钾溶液为缓冲液，添加步骤2)的4-烯丙基苯酚溶液，使其终浓度为4-5...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨月，王筱，陈贤情，江会锋，王文，
申请(专利权)人：嘉兴欣贝莱生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33